培美曲塞及多西他賽聯(lián)合順鉑化療對晚期肺腺癌患者免疫功能的影響

劉 波 鐘明艷 李慶萍 黃 敏 馬熙天

淋巴細(xì)胞亞群分析是檢測細(xì)胞免疫和體液免疫功能重要指標(biāo)，它能總體反映機體當(dāng)前的免疫功能、狀態(tài)和平衡水平，我們通過測定肺腺癌患者化療前后免疫功能的變化，為免疫治療提供一定依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇從2013年4月－2015年6月我院住院的70例患者，男性40例，女性30例;年齡33～82歲，中位年齡55歲。所有患者經(jīng)支氣管檢查取得病理、手術(shù)組織病理或經(jīng)過CT引導(dǎo)下或B超引導(dǎo)下穿刺下取得明確病理診斷結(jié)果。根據(jù)化療方法將患者分為培美曲塞組、多西他賽組，于化療前及化療結(jié)束后分別取靜脈抗凝血2 m l和血清2 m l，抗凝血用于檢測免疫活性細(xì)胞。

1.2 設(shè)備與方法

我院 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8 及 NK 細(xì)胞特異性細(xì)胞固定及檢測法，SemiBio細(xì)胞免疫芯片以細(xì)胞分離固定技術(shù)為基礎(chǔ)，利用抗原抗體特異性反應(yīng)，通過芯片基板達(dá)到將特異性細(xì)胞進(jìn)行固定、分離的目的，完成檢測。具體主要流程:(1)靜脈標(biāo)本血2 ml搖勻K2EDTA抗凝血加于相應(yīng)編號380 ml磷酸鹽緩沖液中，即刻混勻。(2)將濕盒置于水平臺，加室溫水至濕盒底部被完全覆蓋。(3)取出玻片置于濕盒架上，將包被面朝上，按序?qū)?biāo)簽貼于玻片一端，后將玻片置于濕盒架上。(4)吸取5 ml稀釋血樣，滴入玻片方框區(qū)域中心。確認(rèn)沒有血樣流出，且方框內(nèi)無氣泡，蓋緊盒蓋，濕溫(20～30℃)孵育40 min。(5)孵育40 min后，將玻片按序插入玻片架。(6)將玻片架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉(zhuǎn)提拉直至玻片呈無色透明。(7)將玻片架即刻放入過氧化酶染色中，靜置1 min。(8)將1 ml 2.5% ～3.5%過氧化氫溶液加入預(yù)先盛有水(至400 ml刻度線)專用缸中，攪拌均勻后制成新鮮工作溶液中。(9)將稍加瀝干的玻片架轉(zhuǎn)入新鮮過氧化氫工作溶液中，靜置4 min。(10)將玻片架轉(zhuǎn)入75%乙醇(400 ml)專用缸中，旋轉(zhuǎn)提拉直至干凈，提出后振去多余乙醇。(11)打開玻片架搭扣，將其置入SemiBio自動玻片干燥儀下干燥6 min，確保黑框內(nèi)干燥。(12)將玻片架放入復(fù)染液中，靜置1 min。(13)將玻片架轉(zhuǎn)入純水(500 ml)專用缸中，靜置30 s，其后根據(jù)玻片數(shù)量不等提拉相應(yīng)次數(shù)，提出后振去多余水分。(14)打開玻片架搭扣將其置于SemiBio自動玻片干燥儀下吹干。(15)通過SemiBio全自動可視化細(xì)胞檢測儀現(xiàn)場或異地隨時進(jìn)行細(xì)胞自動計數(shù)，重復(fù)步驟12-14。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

用SPPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示，采用t檢驗或方差分析。

2 結(jié)果

(1)培美曲塞組化療前后CD3明顯增高(P＜0.05);CD4值增高(P ＜0.05);CD8明顯降低(P ＜0.05);CD4/CD8升高，(P ＜0.05)，NK 值明顯升高(P＜0.05)，見表1。(2)多西他賽組化療前后 CD3、CD4值稍升高，但無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);CD8值變化無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);CD4/CD8比值稍升高，無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。NK值稍減低，無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

多西他賽組與培美曲塞組化療前后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK變化比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)(表2)。

表1 多西他賽組與培美曲塞組化療前、后免疫指標(biāo)的表達(dá)比較±s)

表1 多西他賽組與培美曲塞組化療前、后免疫指標(biāo)的表達(dá)比較±s)

指標(biāo)多西他賽組培美曲塞組化療前 化療后 t P 化療前 化療后t P.74 70.90 ±3.35 －1.277 0.160 CD4 31.36 ±5.74 34.44 ±1.67 －6.765 0.000 34.66 ±1.62 35.10 ±2.75 －1.015 0.105 CD8 32.02 ±1.73 29.20 ±2.93 5.862 0.000 32.02 ±1.73 31.78 ±2.28 0.593 0.555 CD4/CD8 1.50 ±0.45 1.64 ±0.52 －2.784 0.005 1.45 ±0.68 1.56 ±0.78 －0.784 0.620 NK 19.64 ±2.70 21.67 ±2.78 －3.684 0.000 21.38 ±CD3 64.52 ±5.74 70.9 ±3.34 －6.784 0.000 68.5 ±5 2.93 22.18 ±2.87 －1.378 0.171

表2 培美曲塞組與多西他賽化療前后的免疫指標(biāo)變化值的比較±s)

表2 培美曲塞組與多西他賽化療前后的免疫指標(biāo)變化值的比較±s)

指標(biāo) 培美曲塞組 多西他賽組t P CD3 6.38 ±7.15 0.14 ±4.10 5.354 0.000 CD4 3.08 ±3.04 －1.16 ±4.10 3.039 0.000 CD8 2.82 ±3.26 0.24 ±2.96 4.142 0.000 CD4/CD8 0.98 ±0.86 0.43 ±0.37 1.354 0.107 NK 2.02 ±3.36 0.80 ±4.09 3.770 0.000

3 討論

培美曲塞是一種新的、多靶位葉酸拮抗劑，原理是通過細(xì)胞內(nèi)葉酸依賴性的正常代謝過程，抑制細(xì)胞復(fù)制的代謝過程，從而抑制腫瘤的生長。多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥物，通過干擾細(xì)胞有絲分裂和分裂間期細(xì)胞功能所必須的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用。Hanna等［1］應(yīng)用培美曲塞VS多西他賽二線治療NSCLC的Ⅲ期臨床研究實驗中證實在肺腺癌治療中培美曲塞優(yōu)于多西他賽，血液學(xué)毒性低于多西他賽，因此培美曲塞已經(jīng)越來越多應(yīng)用于治療晚期肺腺癌。

T細(xì)胞在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中起重要作用［2］。CD3是CD4與CD8總和，CD4+T細(xì)胞包括調(diào)節(jié)T細(xì)胞，它在免疫反應(yīng)中有免疫抑制和免疫調(diào)控作用［3］CD8+T細(xì)胞主要通過細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，又稱細(xì)胞毒性細(xì)胞。CD4/CD8可作為NSCLC患者免疫紊亂指標(biāo)［4］。在本研究中，通過多西他賽聯(lián)合順鉑化療后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比較均無統(tǒng)計學(xué)意義，表明多西他賽化療后期免疫功能無明顯下降;培美曲塞聯(lián)合順鉑治療后患者CD3、CD4、CD4/CD8值明顯升高，CD8值明顯降低，提示患者化療后機體免疫得到優(yōu)化，與國內(nèi)一些學(xué)者所報道一致［5-6］其原因可能是化療可能導(dǎo)致體內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)降低，體內(nèi)免疫自穩(wěn)機制打破原有免疫耐受，各淋巴細(xì)胞亞群向正常過程重建，化療使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡同時激活免疫應(yīng)答，從而降低體內(nèi)腫瘤負(fù)荷，重建T細(xì)胞免疫功能［7］。本研究中，使用培美曲塞的肺腺癌患者免疫增強原因可能是培美曲塞的療效好于多西他賽，血液學(xué)毒性低，更有利于T細(xì)胞免疫功能重建，最終需進(jìn)一步臨床研究證實。

NK細(xì)胞可通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)發(fā)揮殺傷性腫瘤細(xì)胞功能，還可通過分泌細(xì)胞因子、通過死亡受體介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡和釋放穿孔素顆粒酶誘導(dǎo)凋亡等途徑而殺傷腫瘤細(xì)胞［8］。化療藥物多為細(xì)胞毒性藥物，在殺滅腫瘤細(xì)胞同時也殺傷機體正常增殖和分化細(xì)胞，尤其是殺傷增殖分化的免疫細(xì)胞。一般認(rèn)為，NK細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng)多為中、早期腫瘤，對于晚期腫瘤，NK細(xì)胞難以發(fā)揮作用。本研究中，培美曲塞組化療后NK細(xì)胞數(shù)增多，因為化療后晚期肺腺癌腫瘤退縮較快，從而導(dǎo)致NK細(xì)胞增殖，使患者免疫功能增強。

綜上所述，晚期肺腺癌免疫力低下，通過研究患者化療前后免疫功能指標(biāo)變化情況，可為針對性使用化療用藥提供理論基礎(chǔ)，并進(jìn)行針對性的免疫治療。

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