原發性干燥綜合征患者CD19+IgD+B細胞亞群與臨床特征的相關性研究

摘要：目的 探討原發性干燥綜合征患者外周血CD19+IgD+B/CD19+B細胞比例與患者臨床特點的相關性。方法 對我院68例確診的初發、未經免疫抑制劑及激素治療的原發性干燥綜合征患者進行CD19+IgD+B/CD19+B細胞亞群檢測，同時記錄患者抗干燥綜合征抗體、抗核抗體、唇腺病理改變，與CD19+IgD+B細胞亞群比例進行相關性分析，所有患者在經激素和羥氯喹治療3個月后復查CD19+IgD+B細胞亞群。結果 唇腺活檢浸潤灶指數FS（+）患者較FS（-）患者CD19+IgD+B細胞比例高（P<0.05）；在FS（+）患者中有生發中心患者外周血CD19+IgD+B細胞比例明顯高于生發中心陰性患者（p<0.05）；血清IgG球蛋白與CD19+IgD+B細胞比例呈正相關關系；抗SSB抗體陽性CD19+IgD+B細胞比例明顯高于陰性患者。抗SSA抗體、抗RO-52抗體、ANA抗體與CD19+IgD+B細胞比例無明顯相關性（P>0.05），SSB抗體滴度與CD19+IgD+B比例呈正相關關系。治療3月后復查CD19+IgD+B細胞比例較治療前明顯下降（P<0.05）。結論 CD19+IgD+B細胞比例與患者疾病活動度密切相關，可作為評價原發干燥綜合征治療效果的新方法。

關鍵詞：原發性干燥綜合征，CD19+IgD+B細胞，臨床特點

原發性干燥綜合征是一種累及外分泌腺的慢性炎性自身免疫性疾病，病理表現為受累組織中大量T淋巴細胞及B淋巴細胞浸潤，并產生大量的自身抗體及免疫球蛋白。原發性干燥綜合征免疫系統紊亂與B細胞的異常密切相關。在原發性干燥綜合征患者中存在B細胞在外分泌腺如唇腺組織中聚集形成異位生發中心，同時亞群紊亂，產生多種自身抗體[1]。研究發現，CD19+IgD+B細胞比例在原發干燥綜合征患者數量明顯增多，并且明顯高于類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡及系統性硬化癥患者，而CD19+CD38+B細胞比例明顯減少[2]。因此，CD19+IgD+B細胞在外周血中的比例可能反應了患者機體內免疫紊亂的程度，與患者自身抗體特征及臨床特征可能有一定的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 按照2012年美國風濕病學會干燥綜合征分類（診斷）標準[3]，收集2013年1月～2014年3月于綿陽市中心醫院風濕免疫科住院，初次診斷原發干燥綜合征，且未經激素和免疫抑制劑治療的患者臨床資料，共68例，其中女60例，男8例，年齡（36.84±16.5）歲，平均病程13.27±10.2月.

1.2 CD19+IgD+B細胞和CD19+B細胞亞群檢測：采用藻紅蛋白花青苷（PECY5）標記的鼠抗人CDl9單克隆抗體、藻紅蛋白（PE）標記的鼠抗人IgD單克隆抗體標記患者及外周血B細胞。應用金域檢驗中心Cytomics FC 500流式細胞儀及其分析軟件對CD19+IgD+B細胞亞群比例進行分析。

對68例患者行糖皮質激素+羥氯喹治療，治療前及治療3個月病情穩定后檢測外周血CD19+IgD+B細胞亞群比例。

1.3臨床資料收集 收集患者抗核抗體譜、唇腺病理改變、免疫球蛋白，并將1）抗SSA抗體、抗SSB抗體、抗ANA抗體、Ro-52抗體與CD19+IgD+B細胞比例進行相關性分析；唇腺病理FS+與FS-，生發中心陽性與生發中心陰性與CD19+IgD+B細胞進行相關性分析，經激素及羥氯喹治療前后3個月CD19+IgD+B細胞比例變化進行分析。

1.4計學處理 數據以χ±s表示，對于服從正態分布的計量資料采用了獨立樣本t檢驗，對于計數資料，采用x2檢驗。

2 結果

2.168例患者唇腺病理結果，FS+患者42例，FS-26例，42例FS陽性患者12例出現生發中心；68例患者抗ANA抗體陽性38例，陰性30例；所有患者抗SSA抗體、抗Ro-52抗體均為陽性，29例抗SSB抗體陽性；抗SSA抗體（+）者25例，抗SSA抗體（++）19例，抗SSA抗體（+++）24例；抗Ro-52抗體（+）41例，抗Ro-52抗體（++）19例，抗Ro-52抗體（+++）8例；抗SSB抗體+16，抗SSB抗體++7例；抗SSB抗體+++6例；抗ANA抗體1：100 11例，抗ANA抗體1：320 20例，抗ANA抗體1：1000 7例。所有68例患者均完成3月規范治療。見表1。

2.2 浸潤灶指數FS（+）患者較FS（-）患者CD19+IgD+B細胞比例高（P<0.05）；在FS（+）患者中有生發中心患者外周血CD19+IgD+B細胞比例明顯高于生發中心陰性患者（P<0.05）。見表2。

2.3 血清IgG球蛋白與CD19+IgD+B細胞比例呈正相關關系；抗SSB抗體陽性CD19+IgD+B細胞比例明顯高于陰性患者。抗SSA抗體、抗RO-52抗體、ANA抗體與CD19+IgD+B細胞比例無明顯相關性（P>0.05），SSB抗體滴度與CD19+IgD+B比例呈正相關關系。

2.4 治療3月后復查CD19+IgD+B細胞比例較治療前明顯下降（t=10.763，P=0.00）

3討論

原發性干燥綜合征特征性表現為B細胞異常改變。B細胞在pss發病過程中存在分化及選擇紊亂，一方面B細胞表達過度活躍，使外周血產生大量異常的自身抗體.出現高丙球蛋白血癥；另一方面B細胞亞群分布異常，B細胞選擇性浸潤外分泌腺等組織[4]，進而激活腺體局部炎癥反應，最終導致涎腺和淚腺遭受破壞。原發性干燥綜合征患者外周血B細胞的成熟狀態通過細胞表面IgD及CD38蛋白鏈進行區分，通過IgD及CD38表達的不同可將B細胞分為Bm1到Bm5[5，6]。而不同種類的B細胞在原發干燥綜合征患者機體內產生著不同的作用，可能與患者的疾病活動狀態密切相關。

原發干燥綜合征主要侵犯外分泌腺，唇腺為最常受累的器官，唇腺活檢可查見大量淋巴細胞浸潤，SS患者外分泌腺浸潤的淋巴細胞中60%～70%是T淋巴細胞.B淋巴細胞約為20%～25%。巨噬細胞、NK細胞等不足5%。病理組織中浸潤的T淋巴細胞中70%以上是CD4+T細胞[7]。也有報道，干燥綜合征唇腺組織主要以B淋巴細胞浸潤為主[8]。因此，B細胞在干燥綜合征病情活動與臨床特征之間有著密切聯系。干燥綜合征患者存在高表達IgD蛋白鏈的B細胞，我們的研究發現，原發性干燥綜合征患者外周血存在CD19+IgD+B細胞高表達，且明顯高于正常對照組與類風濕關節炎組患者。我們在經規范化治療3月后復查外周血CD19+IgD+B細胞，發現治療后CD19+IgD+B比例是明顯下降的。說明CD19+IgD+B與原發干燥綜合征疾病的活動密切相關，可以反映患者的疾病活動度。同時我們對患者唇腺活檢結果與CD19+IgD+B細胞比例進行分析發現，存在淋巴細胞浸潤灶的患者CD19+IgD+B比例是明顯增高的，而有生發中心存在的患者CD19+IgD+B又明顯高于生發中心陰性患者。這說明了CD19+IgD+B細胞比例可評估患者的疾病活動狀態及治療效果。

干燥綜合征患者體內存在大量的自身抗體，最主要的自身抗體為抗核抗體ANA，抗干燥綜合征抗SSA抗體，抗干燥綜合抗SSB抗體，抗干燥綜合癥抗Ro-52抗體及球蛋白。這些抗體主要為B細胞分泌，這些抗體一方面作為干燥綜合征診斷的依據，另一方面反映了干燥綜合征患者疾病的活動和體內B細胞免疫紊亂的程度。干燥綜合征主要為B細胞介導的自身免疫性疾病，B細胞免疫紊亂及活躍程度可可能反應了患者的疾病活動狀態。我們的研究發現，患者疾病活動積分與CD19+IgD+B比例呈現明顯的正先關關系，同時我們在治療前后對CD19+IgD+B比例進行分析發現，CD19+IgD+B比例在治療后疾病較穩定的情況下比例是明顯降低的，這說明了CD19+IgD+B比例反應了患者疾病的活躍程度，可以作為評價干燥綜合征疾病活動及治療療效的指標。

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