丹參中丹酚酸B含量的測定方法

摘要：丹參是一種唇形科植物丹參的根莖和干燥根部分，而丹酚酸B則是從丹參中分離提取的一種也具有新木質素骨架和咖啡酰縮酚酸結構的水溶性成分。單分散有抗前列腺腫瘤、抗氧化清除自由基、抗肝纖維化和放置神經推行性疾病等效用，其開發利用的前景極為廣闊。

關鍵詞：丹參；丹酚酸B含量；測定方法

由《中國藥典》2005版和當前報道中丹酚酸B測定方法中可知，供試品溶液制備手段，是采用75%甲醇，進行1 h的加熱回流后提取，并采取HPLC測定其含量[1]。這種測定丹參中丹酚酸B含量的方法，具有良好的重現性，然而操作比較復雜，耗時較長，有方法改進的必要。

1材料和儀器

從廣州廣弘中藥材有限公司中購得丹參藥材，且通過中藥鑒定，確定其為唇形科植物丹參根莖和干燥根，與2005年版的《中國藥典》中相關規定相符合。其中，甲醇是色譜純，水為純凈水，其他試劑都是分析純。儀器則采用由安捷倫科技有限公司生產的Agilent1100高效液相色譜儀，及上海科導SK1200H超聲波提取器。

2方法和結果

2.1丹酚酸B供試液制備方法

2.1.1回流提取法 去本品中粉0.2 g，在去本品粉末的測定水分，通過精密稱定后，將其放置在色錐形的容量瓶中，再加入50 ml的75%甲醇，稱定重量后，行1 h的加熱回流，取出放冷后，再行重量稱定，使用75%的甲醇不足所減失的重量，將其搖勻，再濾過，將濾液取出，即得，其編號定為1。

2.1.2超聲提取法 取本品中粉0.2 g，同時去本品粉末的測定水分四分，通過精密稱定后，將其分別放置在四個100 ml的容量瓶中，再加入4 ml的75%乙醇，提取10，20，30，40 min，再精密量取其中的1 ml提取物，放置在100 ml的量瓶例，將甲醇加至刻度，搖勻后即得，其編號定為2，3，4，5。

2.2使用HPLC測定超聲提取法和回流提取法中丹酚酸B含量

2.2.1色譜條件 色譜柱為Symmetry C18（4.6 mm ×150 mm，5 m）；流速為1.0 ml/min；柱溫為35℃；檢測波長為286 mm；流動相為甲醇.乙腈.甲酸水 （30：10：1：59）；理論半數根據丹酚酸B峰值計算，且要高于2000。

2.2.2制備對照品溶液 去對照品丹酚酸B 1.4 mg，加入甲醇后，制成10 ml溶液，其濃度為0.14 mg/ml。

2.2.3制作標準曲線 取丹酚酸B的對照品溶液2，4，5，10，12，14 μl，分別對其進樣，測定其峰面積，使用峰面積Y對進樣量X進行線性回歸，其回歸方程為Y=160.93X-6.976，R=0.9999.結果顯示丹酚酸B為0.28～0.12 μg時，和峰面積線性關系較好。

2.2.4精密度試驗和重現性實驗 取5 μl的樣品溶液，經過6次的重復進樣后，結果顯示丹酚酸B的峰面積為0.28%；去本組丹酚酸B制備的5份供試液測定進樣，結果顯示丹酚酸B的峰面積為1.26%。

2.2.5穩定性考察 取5 μl的樣品溶液，在制備后及2、4、12、24 h進行測定，結果顯示丹酚酸B的峰面積為1.82%，可見溶液在24h比較穩定。

2.2.6回收率實驗 在5份樣品溶液中，加入1.7 ml的丹酚酸B對照品溶液，經測定，其憑借回收率是95.5%，其峰面積是1.14%。結果顯示，采取超聲提取法，提取10，20，30，40 min的效果，與《中國藥典》中加熱回流1 h的丹酚酸提取效果相同。

3討論

使用超聲波所產生空化現象，可以細化各類物質及制造乳濁液，同時可加速植物中有效成分進入溶劑，增加有效成分提取率[2]。超聲可轉為熱能，使得藥物組織中溫度驟然提升，以此加速植物中有效成分溶解。同時，超聲波還可通過使用超聲壓強和輻射壓強引發的機械作用解聚生物分子，以此將植物細胞壁上有效成分溶解在溶劑中。

超聲波所產生的空化現象還會產生顯微氣泡，而氣泡\"定向擴散\"可形成共振腔，從而破壞生物大分子和細胞膜，增加其有效成分擴撒速度。此外，超聲波還能破壞藥物細胞，將溶媒滲入藥物細胞中，以此加速藥物中有效成分在溶媒中的溶解速度，提升有效成分提出率[3]。

和《中國藥典》中的方法相比，本組測定方法繼承了其優點，又改進了其中缺陷，不僅可保障丹酚酸B的提取率，還能縮短提取時間，且其丹酚酸B測定結果和《中國藥典》中的差異沒有統計學意義。可見，這種丹酚酸B提取法是一種高產、快速的新型藥物提取法，值得推廣。

參考文獻：

[1]許永，趙成.不同提取方法對丹參中丹酚酸B含量測定的影響[J].安徽醫藥，2009，13（10）：1193-1194.

[2]謝王乙子.丹參葉片不定芽的誘導及其成苗中丹酚酸B含量的測定[J].雅安：四川農業大學，2010.

[3]仇雅靜.對《中國藥典》2005年版丹參中丹酚酸 B含量測定方法的探討[J].中國藥品標準，2009，10（1）：9-10.

編輯/肖慧