注射用阿奇霉素細菌內毒素檢查方法學驗證

【摘 要】本實驗對阿奇霉素的細菌內毒素檢查方法進行研究，建立快速準確的細菌內毒素檢查法。按《中國藥典》2010版附錄ⅪE細菌內毒素檢查方法進行。利用不同廠末生產的鱟試荊進行干擾試驗，全面考察阿奇霉素對細茼內毒素控查的干擾作用，以確定最佳試驗條件。阿奇霉素可以采用稀釋方法排除干擾。本細茵內毒素檢查結果安全、可靠。

【關鍵詞】阿奇霉素；細菌內毒素；研究

阿奇霉素為半合成的十五員大環內酯類抗生素。阿奇霉素在甲醇、丙酮、氯傷、無水乙醇或稀鹽酸中易溶，在水中幾乎不溶[1-6]。阿奇霉素適用于化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎；敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發作；敏感細菌引起的皮膚軟組織感染；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎[7-12]。本實驗對阿奇霉素的細菌內毒素檢查方法進行研究，建立快速準確的細菌內毒素檢查法。

1.材料與方法

1.1材料

（1）儀器Ms3digital旋渦混合器（北京賽美思儀器設備有限公司），凈化工作臺（北京卓川電子科技有限公司），DK一600S電熱恒溫水槽（南京先歐儀器制造有限公司），DMH一1電熱干燥箱（南京易普易達科技發展有限公司）。

（2）試劑鱟試劑（北京百星高科技術開發有限公司）；鱟試劑2（湛江博康海洋生物有限公司）鱟試劑3（上海坤肯生物化工有限公司）；鱟試驗用水（上海坤肯生物化工有限公司）；細菌內毒素工作標準品（中國藥品生物制品檢定所）；pH調節劑（上海坤肯生物化工有限公司）。

1.2方法

（1）試驗準備所有容器、用具都必須經過處理，去除外源性內毒素，玻璃用具的滅菌處理為180℃2小時或250℃30分鐘以上，塑料用具須確證不干擾實驗結果。

（2）鱟試劑靈敏度復核按《中國藥典》2010版二部附錄Ⅺ E細菌內毒素檢查法規定，進行鱟試劑的標示靈敏度復核。上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技術開發有限公司三個廠家的鱟試劑均符合規定。1.2.3阿奇霉素細菌內毒素檢查干擾試驗

1.3干擾預試驗

阿奇霉素細菌內毒素檢查干擾本品，加鱟試驗用水進行供試品溶液和供試品陽性對照溶液的配制。供試品溶液配制：取三個批號的供試品，分別用用鱟試驗用水10mL充分振搖使溶解。制備成0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.42mg/mL、0.83mg/mL、1.67mg/mL、3.33mg/mL六個濃度，并用pH調節劑調節pH值至6～8。細菌內毒素工作標準品溶液稀釋方法：用lmL的鱟試驗用水溶解1支細菌內毒素工作標準品，用旋渦混合器連續混合十分鐘，再用鱟試驗用水稀釋成4λ、2λ，進行下一步稀釋前，至少混和三十秒。供試品陽性對照溶液的配制：制備成0.1mg/mL+2λ、0.2mg/mL+2λ、0.42mg/mL+2λ、0.83mg/mL+2λ、1.67mg/mL+2λ、3.33mg/mL+2λ六個濃度。試驗過程：取上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技術開發有限公司三個廠家的鱟試劑，先分別加人0.1mL 鱟試驗用水溶解，再分別加入0.1mL供試品和供試品陽性各濃度稀釋液，混勻后，于三十七攝氏度保溫六十分鐘，同時設陰性和陽性對照，每個濃度平行做2管。三個批號供試品溶液，三個廠家的鱟試劑結果均為濃度為3.33mg/mL未凝固；濃度為1.67mg/mL未凝固；濃度為0.83mg/mL未凝固；濃度為0.42mg/mL未凝固；濃度為0.2mg/mL未凝固；濃度為0.1mg/mL未凝固.三個批號陽性對照溶液，三個廠家的鱟試劑結果為濃度為0.1mg/mL均凝固；濃度為0.2mg/mL凝固；濃度為0.42mg/mL凝固；濃度為0.83mg/mL凝固；濃度為1.67mg/mL凝固；濃度為3.33mg/mL未凝固。。實驗濃度選擇含阿奇霉素為1.67mg/mL的稀釋液。

1.4供試品的干擾試驗

為進一步確證供試品溶液對0.25EU/mL的鱟試劑是否存在干擾作用，分別用鱟試驗用水和供試品1.67mg/mL稀釋液進行實驗，將細菌內毒素工作標準品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內毒素溶液。供試品2.5mg/mL稀釋液的制備：取上述三個批號的供試品，分別用鱟試驗用水稀釋成含吉西他濱1.67mg/mL的供試液。用鱟試驗用水與1.67mg/mL供試液分別將細菌內毒素工作標準品稀釋成0.5EU/mL、0.25EU/mL、0.125EU/mL、0.0625EU/mL四個濃度，作為細菌內毒素標準品溶液和細菌內毒素供試品溶液。取上述三個廠家的鱟試劑，每支分別加0.1毫升鱟試驗用水溶解，加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ濃度的系列內毒素溶液和供試液各1毫升，于三十七攝氏度保溫六十分鐘。供試品批號為131001，鱟試劑廠家為上海坤肯生物化工有限公司，細菌內毒素濃度0.5EU/mL凝聚，細菌內毒素濃度0.25EU/mL凝聚，細菌內毒素濃度0.125EU/mL一支凝聚其他未凝聚，細菌內毒素濃度0.0625EU/mL未凝聚，E值均為0.2EU/mL，無干擾作用；供試品批號為131001，鱟試劑廠家為湛江博康海洋生物有限公司和北京百星高科技術開發有限公司，細菌內毒素濃度0.5EU/mL均凝聚，細菌內毒素濃度0.25EU/mL均凝聚，細菌內毒素濃度0.125EU/mL均未凝聚，細菌內毒素濃度0.0625EU/mL均未凝聚，E值均為0.2EU/mL，均無干擾作用供試品批號為131002、131003，三個鱟試劑廠家，細菌內毒素濃度0.5EU/mL均凝聚，細菌內毒素濃度0.25EU/mL均凝聚，細菌內毒素濃度0.125EU/mL均未凝聚，細菌內毒素濃度0.0625EU/mL均未凝聚，E值均為0.2EU/mL，均無干擾作用。

2.結果

供試品濃度為經稀釋至1.67mg/mL濃度使用λ=0.25EU/mL鱟試劑檢驗時.證實可消除其對檢驗的干擾，無干擾作用。本細茵內毒素檢查方法安全、可靠。 [科]

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