無菌工藝模擬試驗研究

【摘 要】本文對無菌工藝模擬試驗進行綜述。

【關鍵詞】無菌；工藝；模擬

無菌產品主要分為兩大類，一類是最終滅菌產品，另一類是用無菌工藝過程生產的非最終滅菌產品[1-3]。我國新版GMP規定無菌生產工藝驗證必須實施培養基模擬灌裝試驗[4]。本文對無菌工藝模擬試驗進行綜述。

1.無菌工藝模擬試驗的概念

無菌工藝模擬試驗是采用微生物培養基替代產品對無菌工藝進行評估的驗證技術，也稱為培養基灌裝試驗[5-9]。無菌工藝模擬試驗的目的是證明在無菌制劑在生產過程中所采用的各種方法和各種規程以防止微生物污染的水平達到可接受的合格標準的能力，或提供保證所生產產品的無菌性的可信限度達到可接受的合格標準的證據[10-13]。在培養基模擬試驗中，首先將適當體積的無菌液體培養基分裝到無菌西林瓶中，或分裝無菌粉末，然后用注射器將培養基注入瓶中；或者采用粉末分裝過程將一種培養基干粉分裝到西林瓶中，然后再用注射器將其他液體，最后進行微生物培養。

2.無菌工藝模擬試驗的問題分析及應對策略

培養基灌裝試驗需要考慮很多關鍵點促生長試驗、廠房、設備、工藝、人員、干擾設計、環境等。

2.1最差條件的設計

如在最差條件下能獲得好的結果，說明在比最差情況要好的實際生產中，無菌保證的可靠性更有保證。通常設計的最差條件有：在生產結束進行試驗，超出常規生產時間還包括不清場直接試驗，無菌風險大于正常生產；模擬灌裝程序速度低于正常生產速度，增加了藥品在無菌區暴露的時間，無菌風險大于正常生產；容器規格為最大敞口容器增加了藥品在無菌區暴露的面積，無菌風險大于正常生產；滅菌的膠塞已貯存26h，超出了24h的貯存期限挑戰貯存時限，無菌風險大于正常生產；A/B級區人員生產人員定員為6人，模擬最大生產人員10人，風險大于正常生產；生產設備故障，更換灌裝頭，灌封線堵塞，輸送軌道的調節，破損件的更換非正常干預，無菌風險大于正常生產；采用大豆胰蛋白粉末培養基，增加了微生物生產的營養環境，無菌風險大于正常生產。

2.2培養基微生物性能和無菌性試驗

2.2.1培養基微生物性能實驗

取35瓶裝有5ml培養基的已滅菌的西林瓶，其中5支不接種作為空白對照、5支接種金黃色葡萄球菌（<100cfu）、5支接種枯草芽孢桿菌（<100cfu）、5支接種銅綠假單胞菌（<100cfu）、5支接種生孢梭菌（<100cfu）、5支接種白色念珠菌（<100cfu），5支接種曲霉菌，前四種菌在30～35℃培養 72 h，后兩種在23～28℃培養 7 天，空白試驗分別在30～35℃72h和23～28℃培養7天，培養時間內觀察并記錄。培養基微生物性能試驗可接受標準：陰性實驗中應無菌生長，接種的陽性對照實驗應有菌生產。

2.2.2培養基無菌性試驗

取培養基5ml裝于已滅菌密封的西林瓶中，按照此方法取10個樣依次做好標記，其中9支為陰性實驗，1支接種金黃色葡萄球菌（<100cfu）做陽性對照，所有樣品于23～28℃培養7天，再于30～35℃培養7天，每天觀察，并做記錄。培養基無菌性試驗可接受標準：陰性實驗應無菌生長，陽性對照實驗應有菌生長。

2.3培養基灌裝過程的記錄

完整的試驗記錄可用于試驗結果調查、偏差分析、定期回顧和追溯。試驗過程的記錄主要包括：試驗批記錄、懸浮粒子記錄、培養基微生物性能記錄、培養基無菌性試驗、沉降菌記錄、浮游菌記錄、表面微生物記錄、人員衛生監測記錄、培訓記錄、全程觀察記錄等。

2.4環境監測

2.4.1目的

檢測模擬分裝過程涉及到的A、B、C、D級潔凈區的塵埃粒子、沉降菌、浮游菌、溫度、濕度、壓差，保證潔凈區的環境不會對模擬分裝過程帶來污染。

2.4.2程序

靜態塵埃粒子測試：潔凈區內只有記錄人1人，對潔凈室內的塵埃粒子進行靜態檢測。動態塵埃粒子測試：潔凈室內應進入該區域模擬實驗的最大人員進出數。沉降菌動態測試：A級：每天生產中連續監測，每個菌碟按沉降菌布點圖進行鋪設，采樣時間不得超過四小時。B級：每天一次，每次生產開始采樣30分鐘。浮游菌的檢測生產開始后動態監測一次，每次采樣量1m3。

表1 塵埃粒子可接受標準

表2 可存活微生物的限度

2.5人員培訓

人員培訓的目的為使驗證相關人員掌握相關方案、操作規程及工藝規程。對驗證實施有關人員進行相關標準操作規程以及無菌工藝模擬試驗方案培訓，并將培訓結果加入到無菌工藝模擬試驗報告。人員培訓可接受標準：上崗操作人員已經接受了方案及操作規程培訓，并經考核合格后方可上崗。

3.試驗結果評價

如果試驗結果證明其污染水平超過規定的合格限度，則應立即停止生產，調查并記錄污染產生的原因。在調查結束并采用相應的措施后應重復進行無菌模擬分裝試驗。原因調查至少應包括：HEPA 過濾器的完整性檢測、粒子、風速等；生產環境中微生物監測數據；操作人員的操作方法、培訓情況；無菌室的清潔、清潔規程的培訓及執行情況；無菌室生產工具及其他用品的儲存狀況；生產環境中懸浮粒子監測數據；操作間的空氣流向、壓差；人員污染的監測數據等。 [科]

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