高效液相色譜法測定復方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量

【摘 要】本文采用高校液相測定了復方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（3：5：92）為流動相，檢測波長為280nm；色氨酸在50～150μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系；酪氨酸在100～900μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。色氨酸和酪氨酸的平均回收率分別為99.5%、99.5%，RSD為0.63%（n=6）、0.56%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于復方氨基酸注射液中色氨酸和酪氨酸的含量測定。

【關鍵詞】復方氨基酸注射液；色氨酸；酪氨酸

復方氨基酸注射液是一種透明、無色或微黃色的澄明液體，可提供完全、平衡的18種必需和非必需氨基酸，改善氮平衡。復方氨基酸注射液具有促進人體蛋白質代謝正常，糾正負氮平衡，補充蛋白質，加快傷口愈合的作用。復方氨基酸注射液用于大面積燒傷、創傷及嚴重感染等應激狀態下肌肉分解代謝亢進、消化系統功能障礙、營養惡化及免疫功能下降的病人的營養支持。復方氨基酸注射液含有L-脯氨酸（C5H9NO2）、L-組氨酸（C6H9N3O2）、L-色氨酸（C11H12N2O2）、L-絲氨酸（C3H7NO3）、L-丙氨酸（C3H7NO2）、L-精氨酸（C6H14N4O2）、L-纈氨酸等。本文采用高校液相測定了復方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。

1.儀器與試藥

WP-UP-Ⅱ-30分析型實驗室專用超純水機（四川沃特爾水處理設備有限公司）；FL2200-2高效液相色譜儀（浙江福立分析儀器有限公司）；CO-1000型色譜柱溫箱（武漢恒信世紀科技有限公司）；B8510E-DTH超聲波清洗機（必能信超聲（上海）有限公司）；320 XT 電子分析天平（上海精科天美貿易有限公司）；U-1901 雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。色氨酸和酪氨酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（武漢萊恩化工有限責任公司）、甲醇（武漢萊恩化工有限責任公司）、醋酸鈉（鄭州世紀凱美化工產品有限公司）、四氫呋喃（襄樊金譯成精細化工有限公司）、三乙胺（福建省福州市匯豐化工有限公司）、磷酸二氫鈉（東莞市多正化工有限公司）、磷酸（鄭州世紀凱美化工產品有限公司）。

2.含量測定

2.1色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果[1-12]，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（3：5：92）為流動相；檢測波長為280nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數按酪氨酸峰計算應不得低于2000。

2.2供試品溶液的制備

取復方氨基酸注射液適量，精密量取，置50mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理十分鐘使溶解，放置至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3對照品溶液的制備

分別精密稱取酪氨酸和色氨酸對照品約5mg和50mg，置100mL容量瓶中，用加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中分別含酪氨酸50μg和色氨酸500μg）。

2.4標準曲線的制備

制備濃度為50μg·mL-1、60μg·mL-1、70μg·mL-1、80μg·mL-1、90μg·mL-1、100μg·mL-1、110μg·mL-1、120μg·mL-1、130μg·mL-1、150μg·mL-1的色氨酸對照品溶液，制備濃度為100μg·mL-1、200μg·mL-1、300μg·mL-1、400μg·mL-1、500μg·mL-1、600μg·mL-1、700μg·mL-1、800μg·mL-1、900μg·mL-1的酪氨酸對照品溶液。分別按色氨酸、酪氨酸的測定參數繼續測定。以吸光度為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，色氨酸在50～150μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系；酪氨酸在100～900μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，分別精密吸取色氨酸和酪氨酸對照品溶液重復測定6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD分別為0.51%和0.53%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.6重現性試驗

分別稱取同批復方氨基酸注射液樣品6份，分別依照2.3項下供試品制備方法制備供試品，按質量標準含量測定項下方法測定含量，并計算樣品的RSD值，RSD值為0.77%，0.68%，結果表明，此含量測定方法的重現性良好。

2.7穩定性試驗

依照2.3項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4，8，10h進樣測定，供試品色氨酸和酪氨酸峰面積的RSD分別為0.69%和0.76%。結果表明色氨酸和酪氨酸至少在10h內穩定。

2.8回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的色氨酸和酪氨酸對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量，計算回收率。6次測定的平均回收率分別為99.5%和99.5%，RSD分別為0.63%和0.55%。

2.9樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定復方氨基酸注射液三批樣品中色氨酸和酪氨酸的含量，結果三批樣品的色氨酸和酪氨酸含量分別為標示量的99.6%、100.1%、99.5%和99.5%、99.6%、100.2%。

3.討論

分別考察甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（5：10：85），甲醇-四氫呋喃-0.075mol/L醋酸鈉緩沖液（pH4.5）（30：20：50），乙腈-四氫呋喃-三乙胺磷酸緩沖液（25：15：60），甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（3：5：92），甲醇-乙腈-水（40：40：20），10.25mol/L醋酸鋅-50mmol/L醋酸溶液（含3%乙腈），乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（8：92）不同比例的流動相，結果以甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（3：5：92）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-0.1%醋酸鈉水溶液（3：5：92）為流動相。復方氨基酸注射液中色氨酸和酪氨酸的含量為標示量的95%-105%。 [科]

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