不同產(chǎn)地葛根HPLC指紋圖譜研究

白而力

(山西藥科職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 太原 030031)

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不同產(chǎn)地葛根HPLC指紋圖譜研究

白而力

(山西藥科職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 太原 030031)

目的：比較不同產(chǎn)地葛根藥材中葛根素的含量。方法：采用HPLC法，建立不同產(chǎn)地葛根的指紋圖譜。結(jié)果：三個(gè)產(chǎn)地的葛根藥材指紋圖譜比較相似，各共有峰都存在，但色譜之間的相對(duì)峰面積并不相同，由此可以看出其內(nèi)在質(zhì)量是有差別的。結(jié)論：野葛與粉葛的指紋圖譜差異較大，說明種間的成分差別較大，所以，生產(chǎn)過程中一定要使用同品種的原料，不同產(chǎn)地野葛的指紋圖譜相似，各共有峰都存在，各峰面積及相對(duì)面積有差異。

葛根；HPLC；指紋圖譜

葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi 或甘葛藤P.thomsoniiBenth. 的干燥根。含有葛根素(Puerarin) 、葛根素木糖甙(Pueraria2xyloside)、大豆黃酮(Daizein)、大豆黃酮甙(Daidzin)等異黃酮(Isoflavone)類物質(zhì)，干物質(zhì)中含量可達(dá)50mg/100g[1]。這些物質(zhì)可顯著改善高血壓、動(dòng)脈硬化患者的腦血流，增加冠狀動(dòng)脈血流量，調(diào)節(jié)血液循環(huán)，是一種較為常用的心肌保護(hù)物質(zhì)[2]。此外，葛根中還含有較多淀粉，干物質(zhì)含量達(dá)35%～40%(新鮮葛根中淀粉含量為20%左右)[3]，且這種淀粉質(zhì)地潔白細(xì)膩，具有糊化溫度低、淀粉糊透明度高、黏度穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)。淀粉中還含有少量維生素和礦物質(zhì)，是營養(yǎng)豐富的高級(jí)淀粉[4]。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑閷ふ乙环N新的簡單、快捷又有效的方法提取葛根中的主要成分，以建立其高效液相色譜指紋圖譜，并能利用建立的HPLC指紋圖譜鑒別不同產(chǎn)地葛根。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 高效液相色譜儀；依利特hypersil ODS2(4.6mm×250nm，5μm)色譜柱；DAD 二級(jí)管陣列檢測器；HP1100 色譜工作站。試劑為分析純：乙酸乙酯，無水乙醇，無水甲醇，苯(廣州化學(xué)試劑廠)。甲醇為Fisher 色譜純。水為超純水。用于指紋圖譜的葛根樣品：云南(粉葛) ，安徽(野葛)，四川(粉葛)為藥材市場所售商品藥材。以上樣品均經(jīng)由山西藥科職業(yè)學(xué)院中藥教研室鑒定。

1.2 提取方法選擇

本實(shí)驗(yàn)嘗試了用水和乙醇進(jìn)行提取，分別用加熱回流和超聲、微波等提取方法進(jìn)行比較提取效果。由于以水做提取溶劑，提取液糖份含量較高，溶液黏稠，不利于進(jìn)行HPLC檢測；用加熱的方法進(jìn)行提取，耗時(shí)長，加熱易不均勻，提取效果不佳。因此本實(shí)驗(yàn)采用微波破壁、超聲提取的方法，提取葛根中的主要成分。

1.3 溶液制備

1.3.1 對(duì)照品溶液制備 取葛根素注射液20μL稀釋至200μL，進(jìn)樣。

1.3.2 供試品溶液制備 稱取各種葛根樣品40～60目粉末20g，用超純水浸泡24h。過濾后微波3min，再加入80%乙醇超聲30min；過濾后將濾液濃縮至一定體積，用20mL苯萃取。將苯層旋干，水層蒸干，用10mL純甲醇溶解，待測。

1.4 重現(xiàn)性測試

準(zhǔn)確稱取3份葛根樣品40～60目粉末各5.000g，用超純水浸泡24h。過濾后微波3min，再加入80%甲醇超聲30min；過濾后上HPLC檢測。

1.5 不同產(chǎn)地葛根HPLC指紋圖譜比較

準(zhǔn)確稱取云南、安徽、四川葛根樣品40～60目粉末各5.000g，用超純水浸泡24h。過濾后微波3min，再加入80%甲醇超聲30min；過濾后上HPLC檢測。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜及提取條件選擇

色譜柱：hypersil ODS2 (4.6mm×250nm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇和水，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10μL，流速為1mL/min，檢測波長為250nm。

通過用不同極性的溶劑對(duì)提取液萃取(見圖1-圖3)，得到提取液中不同極性物質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間，從而設(shè)定洗脫梯度。梯度洗脫程序見表1。

圖1 苯層-甲醇溶液HPLC圖譜

圖2 甲醇萃取溶液

圖3 葛根素注射液

時(shí)間(min)濃度(%)0～2甲醇102～5甲醇10～205～10甲醇20～2515～20甲醇25～3020～50甲醇30～8050～70甲醇80～100

2.2 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取四川葛根樣品6份，每份0.1g，按照供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果表明，各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和其相對(duì)峰面積比值相當(dāng)一致，RSD為0.02，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3 不同產(chǎn)地葛根HPLC指紋圖譜比較

從測定結(jié)果看(圖4，表2)，三產(chǎn)地的葛根藥材指紋圖譜比較相似，各共有峰都存在，但色譜之間的相對(duì)峰面積并不相同，由此可以看出其內(nèi)在質(zhì)量是有差別的。指紋圖譜正是通過這種內(nèi)在的差異，達(dá)到鑒定不同批次、產(chǎn)地葛根的目的。

野葛與粉葛的指紋圖譜差異較大，說明種間的成分差別較大，所以，生產(chǎn)過程中一定要使用同品種的原料，不同產(chǎn)地野葛的指紋圖譜相似，各共有峰都存在，各峰面積及相對(duì)面積有差異。

圖4 不同產(chǎn)地葛根指紋圖譜

產(chǎn)地共有峰相對(duì)峰面積123456789101112131415云南0.130.030.010.021.000.060.140.070.030.020.050.020.260.230.06安徽0.060.000.020.151.000.070.130.070.010.030.020.030.140.020.00四川0.030.000.010.311.000.030.230.040.000.020.010.030.090.020.01

[1] 陳士林,陳四保,楊大堅(jiān), 等.葛根高效液相色譜的研究[J].中草藥,2003,34(7)：661-663.

[2] 鄭穎,吳鳳鍔.中藥指紋圖譜的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003,15(1):55-60.

[3] 曹紅,王國衛(wèi).現(xiàn)代儀器分析在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用[J].農(nóng)墾醫(yī)學(xué),2003,25(3):162-164.

[4] 白海波,李波,宋子榮.葛根提取工藝的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2002,8(6):14-15.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-03-20

白而力(1982-)，男，回族，山西藥科職業(yè)技術(shù)學(xué)院助教，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

R284

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1673-2197(2015)13-0024-03

10.11954/ytctyy.201513010