膽寧片中蒲公英、金錢草提取工藝優化研究

陳嬌婷，楊范莉

(1.贛南醫學院 藥學院，江西 贛州 341000；2.西北藥學雜志社，陜西 西安 710061)

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膽寧片中蒲公英、金錢草提取工藝優化研究

陳嬌婷1，楊范莉2

(1.贛南醫學院 藥學院，江西 贛州 341000；2.西北藥學雜志社，陜西 西安 710061)

目的：優選膽寧片中蒲公英、金錢草的提取工藝。方法：以咖啡酸含量、浸膏得率為指標，設計正交試驗優選提取工藝。結果：蒲公英、金錢草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h，第2次加水10倍量水，煎煮1.0h；咖啡酸含量為50.69%，浸膏得率為25.58%。結論：該提取工藝穩定性高，可節約能源，適于工業應用。

膽寧片；咖啡酸；浸膏得率；提取工藝

膽寧片收載于部頒標準中藥第十二冊[1]，由蒲公英、金錢草、人工牛黃等藥物組成，具有清熱化濕、疏肝利膽的作用，主要用于治療急慢性膽囊炎、膽道感染、膽結石等疾病。工藝規定蒲公英、金錢草為水煎煮提取，本實驗對浸泡時間、煎煮時間、提取次數、加水量等因素進行考察，選取蒲公英中主要抗菌成分咖啡酸[2]為考察指標，設計正交實驗[3-5]，確定水提工藝參數并優化。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國Waters2695)；蒲公英對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-200413)；蒲公英、金錢草(購于安徽亳州青源藥材站)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 檢測波長的確定

根據2010版《中國藥典》(一部)蒲公英藥材中咖啡酸的檢測波長[2]，選擇本品測定波長為323nm。見圖1。

2.2 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

圖1 咖啡酸紫外吸收光譜

流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(20∶80)，取磷酸二氫鈉1.56g，加水1 000mL溶解，再加1%的磷酸溶液調節pH為3.8～4.0；檢測波長：323nm；柱溫：25℃；流速：0.8mL·min-1。

2.3 對照品溶液的制備

精密量取110℃干燥至恒重的咖啡酸對照品3.8mg，置25mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，精密吸取1mL，置10mL棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得(咖啡酸濃度為15.2μg/mL)。測定結果見圖2。

2.4 供試品溶液的制備

水提液加水定容至1 200mL，精密量取10mL，置50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，封口靜置30min，吸取上清液，微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。測定結果見圖3。

圖2 咖啡酸對照品HPLC圖譜

圖3 供試品溶液HPLC圖譜

2.5 水提工藝參數的確定

2.5.1 正交實驗結果 稱取藥材(蒲公英75g、金錢草100g)各9份，以浸泡時間、煎煮時間、提取次數、加水量為考察因素，按L9(34)正交表設計試驗。見表1。

表1 因素水平

結果顯示：以咖啡酸提取量為指標，極差分析結果為C>D>B>A，即影響水提效果的因素順序為：煎煮次數>加水倍量>煎煮時間>浸泡時間，最佳組合為A2B1C2D3。以浸膏得率為指標，極差分析結果為C>B>A>D，即影響提取效果的因素順序為：煎煮次數>煎煮時間>浸泡時間>加水倍數，最佳組合為A1B3C3D3。正交試驗方案及試驗結果見表2。

2.5.2 水提工藝優化 將各提取液定容至1 200mL，過濾，取濾液，按“2.2”項色譜條件測定提取液中咖啡酸的含量，并測定其浸膏得率，采用統計學軟件SPSS10.0進行極差和方差分析。結果見表3、表4。

表2 正交試驗方案及試驗結果分析

結果分析：煎煮次數和加水倍量對咖啡酸提取量影響差異顯著(P<0.05)；煎煮次數對浸膏得率影響差異顯著(P<0.05)。因此，從活性成分含量的重要性和能源方面考慮，煎煮次數選擇2次，煎煮時間選擇每次1h。由于浸泡時間對該兩項指標影響均無顯著性差異，酌情選擇浸泡0.5h。加水倍量為12倍量，但考慮到生產實際中藥材在第1次提取時已充分吸水，第2次提取時不再吸水。因此，確定最佳工藝為：加水浸泡0.5h，提取2次，加水量分別為12倍、10倍，提取時間分別為1.0h、1.0h。

表3 咖啡酸含量方差結果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

表4 浸膏得率方差結果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

2.5.2 驗證試驗 稱取藥材(蒲公英75g、金錢草100g)3份，按優選工藝進行驗證。實驗方法同上，各組提取液濃縮定容至1 200mL，測定咖啡酸提取量和浸膏得率。結果顯示：咖啡酸的平均提取量為52.52 mg；浸膏得率為23.85%。驗證試驗結果表明，優選工藝提取所得咖啡酸和浸膏得率穩定可行。

綜上所述，膽寧片劑中兩味主藥的提取工藝為蒲公英、金錢草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h；第2次加水10倍量水，煎煮1.0h，合并煎煮液，濾過。提取液濃縮后與方中其他藥物提取所得浸膏按處方比例混合，其中間體與輔料混勻后符合片劑成型工藝要求。

3 討論

提取溶劑倍量一般比藥材吸收量高3～5倍，本研究對蒲公英和金錢草的溶劑吸收量進行考察，確定蒲公英吸水量約為原藥材量的3倍，故正交試驗加水量定為8～12倍。

《中國藥典》中咖啡酸含量HPLC測定方法較為穩定，但分離度較差，本實驗對流動相進行適當調整，增大水相比例，分離度較好，無干擾，理論塔板數達到要求。

[1] 國家食品藥品監督管理局.中華人民共和國衛生部頒標準[S].北京：中國醫藥科技出版社，2005：136.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社, 2010:244-245.

[3] 楊軍宣，黃元紅，陳虹靜，等.不同預處理方法對淫羊藿減壓回流提取效果的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2013,19(16)：48-50.

[4] 張銳，張旭，劉建群，等.黨參的亞臨界水提取工藝優選[J].中國實驗方劑學雜志，2013,19(10)：34-37.

[5] 黃建猷，劉智生，黃瑞松，等．正交試驗法優選乳康酊滲漉提取工藝研究[J]．中國實驗方劑學雜志，2007，13(11)：19.

(責任編輯：李嵐春)

Optimization of Extraction Process of Dandelion in Danning Tablet

Chen Jiaoting1,Yang Fanli2

(1.Gannan Medical University,JiangXi Provice,Ganzhou 341000,China; 2.Pharmaceutical Journal of Northwest , Xi'an 710061,China)

Objective:To optimize the extraction process of Danning tablet.Methods:The optimum extraction process was selected by orthogonal test．The content of caffeic acid and extraction rate as indexes.Results:Extraction process of dandelion and christina loosestrife herb was as follows：soaked 30 min, added 15 times water in the first, 1h per time and 12 times water in the second, 1h per time. The transfer rate of caffeic acid and extraction rate were 50.69% and 25.58%.Conclusion:The optimum extraction technology is resource-saving，stable and practicable．

Danning Tablet;Caffeic Acid;Extraction Rate;Extraction Process

2015-04-14

陳嬌婷 (1980-)，女，江西省贛南醫學院講師，研究方向為藥物新劑型與新技術。E-mail:chenjiaoting80119@126.com

R284;TQ461

A

1673-2197(2015)16-0021-03

10.11954/ytctyy.201516010