復(fù)方熊膽茵陳顆粒祛痰化瘀作用藥效學(xué)研究

鄭海音，徐 偉，黃鳴清，李 煌，洪振豐，闕金花

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350122)

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復(fù)方熊膽茵陳顆粒祛痰化瘀作用藥效學(xué)研究

鄭海音1，徐 偉2，黃鳴清2，李 煌2，洪振豐1，闕金花2

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350122)

目的：研究復(fù)方熊膽茵陳顆粒的祛痰化瘀作用。方法：小鼠連續(xù)灌胃給藥5天，末次給藥30min后采用酚紅法檢測復(fù)方熊膽茵陳顆粒的祛痰作用；同時(shí)，SD大鼠連續(xù)灌胃給藥5天，末次給藥1 h后測定大鼠排痰量，研究復(fù)方熊膽茵陳顆粒的祛痰作用；SD大鼠連續(xù)灌胃給藥14天，末次給藥后采用腎上腺素+冷水刺激制造急性血瘀大鼠模型，檢測大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，研究復(fù)方熊膽茵陳顆粒的化瘀作用。結(jié)果：復(fù)方熊膽茵陳顆粒中、高劑量組可增加小鼠酚紅排泌量，高劑量組可增加大鼠排痰量；復(fù)方熊膽茵陳顆粒高劑量可改善腎上腺素+冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠全血還原中切黏度和紅細(xì)胞剛性指數(shù)。結(jié)論：復(fù)方熊膽茵陳顆粒具有一定的祛痰化瘀作用。

復(fù)方熊膽茵陳顆粒；祛痰；化瘀

復(fù)方熊膽茵陳顆粒是福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院院內(nèi)制劑(批準(zhǔn)文號：閩藥制Z20110007)，并獲得國家知識產(chǎn)權(quán)局授權(quán)專利(ZL201210516947.9)。方中含有熊膽粉、茵陳、山楂、澤瀉、白術(shù)、柴胡、甘草等七味中藥，具有清肝利濕、祛痰化瘀、疏肝健脾之功效。本研究就該方的祛痰化瘀功效進(jìn)行初步藥效學(xué)研究，以進(jìn)一步探討該方的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)采用小鼠酚紅祛痰及大鼠排痰法，觀察復(fù)方熊膽茵陳顆粒的祛痰作用；構(gòu)建腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠模型，觀察復(fù)方熊膽茵陳顆粒的化瘀作用。

1 材料與儀器

1.1 動物

健康SPF級SD大鼠，SPF級KM小鼠，均雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(粵)2008-0002。

動物在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心SPF級動物房進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件：中箱10只小鼠，大箱5只大鼠；飼養(yǎng)溫度與濕度：20～26℃，40%～70%，采用10∶14h晝夜間斷照明，自由進(jìn)食和飲水。飼料和飲用水均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。購入大(小)鼠均檢疫3～7天，期間每天檢查1次，且未發(fā)現(xiàn)不健康大(小)鼠，全部健康鼠均納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物

復(fù)方熊膽茵陳顆粒(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，批號：20121101)；復(fù)方貝母氯化銨片(西安利君制藥有限責(zé)任公司，批號：120725)；硫酸氫氯吡格雷片(深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司，批號：20121005)；復(fù)方丹參片(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，批號：12A041)；鹽酸腎上腺素(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司產(chǎn)品，批號：1203121)；戊巴比妥鈉(Sigma公司，批號：120210)；苯酚紅(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：20120210)。

1.3 儀器

BS-3000A系列電子天平(上海友聲衡器有限公司)；BS224S電子天平(德國Sartorius)；N6G全自動血液流變儀(北京普利生儀器有限公司產(chǎn)品)；UV-1200型紫外可見分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 復(fù)方熊膽茵陳顆粒祛痰試驗(yàn)

2.1.1 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對小鼠酚紅祛痰的影響 苯酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[1]：稱取一定量的苯酚紅，加5%碳酸氫鈉溶液配制成100μg·mL-1的酚紅溶液，作為儲備液，分別精密吸取0.01、0.03、0.07、0.10、0.30、0.50mL酚紅儲備液于10mL容量瓶中，用5%碳酸氫鈉溶液定容，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。取適量上述配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以5%的碳酸氫鈉溶液作為空白對照，采用分光光度計(jì)于546nm處測定吸光度(OD)，每個濃度平行測定3次，取其平均值，以酚紅劑量為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=1.038X+0.005，r=0.999 7。

SPF級KM小鼠50只，雌雄各半，(25±2)g。檢疫合格后，隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組(復(fù)方貝母氯化銨，50mg/mL)及復(fù)方熊膽茵陳顆粒低、中、高劑量組(按原藥材計(jì)4.85、9.69、19.39g·kg-1·d-1)各10只。各組小鼠按20mL/kg分別灌胃給予相應(yīng)的受試藥物，每天1次，連續(xù)5天，空白對照組灌服等體積蒸餾水。末次給藥30min后，按0.01mL/g腹腔注射酚紅溶液(50mg/mL)。注射酚紅溶液30min后，處死小鼠，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處氣管，放入含有2mL生理鹽水試管中，加0.1mL濃度為1M的NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH為堿性，浸泡1h后取上清液，采用分光光度計(jì)于546nm處測定OD值，根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算小鼠酚紅分泌量。

2.1.2 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對大鼠排痰量的影響 SPF級SD大鼠50只，雌雄各半，(180±20)g，隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組(復(fù)方貝母氯化銨，10mg/mL)及復(fù)方熊膽茵陳顆粒低、中、高劑量組(按原藥材計(jì)2.42、4.85、9.69g·kg-1·d-1)各10只。各組大鼠按10mL/kg灌服相應(yīng)藥物，空白對照組給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥5天。末次給藥1h后，腹腔注射3%的戊巴比妥鈉溶液麻醉大鼠，仰位固定，頸部去毛，解剖分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨間插入已知重量的玻璃毛細(xì)管(毛細(xì)管長10cm，內(nèi)徑0.8mm左右)，使分泌液沿毛細(xì)管上升，收集60min氣管分泌引流液，稱重后收集60min/100g體重的引流重量。

2.2 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠影響[2]

SPF級SD大鼠84只，雌雄各半，(250±50)g。檢疫結(jié)束后動物隨機(jī)分為7組，即陰性對照組、模型對照組、陽性對照組(硫酸氫氯吡格雷片，1.56mg/mL；復(fù)方丹參片，112.5mg/mL)及復(fù)方熊膽茵陳顆粒低、中、高劑量組(按原藥材計(jì)2.42、4.85、9.69g·kg-1·d-1)各12只。陰性對照組、模型對照組每天給予等體積的蒸餾水，其他各組大鼠每天按10mL/kg體重灌胃給予相應(yīng)治療藥物，每天1次，連續(xù)給藥14天。末次給藥后，除陰性對照組外，其他各組大鼠皮下注射腎上腺素0.8mL/kg，共2次，間隔4h。首次注射腎上腺素2h后，將大鼠置于冰水浴中浸泡5min，陰性對照組于同等時(shí)間內(nèi)注射同劑量的生理鹽水及冰水浸泡，腎上腺素第2次注射后，大鼠禁食不禁水，24h后麻醉大鼠，取腹主動脈血，檢測大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方熊膽茵陳顆粒的祛痰作用研究

3.1.1 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對小鼠酚紅祛痰的影響 復(fù)方貝母氯化銨組及復(fù)方熊膽茵陳顆粒中、高劑量組小鼠的酚紅排泌量均顯著高于空白對照組(P<0.01)，復(fù)方熊膽茵陳顆粒低劑量組小鼠的酚紅排泌量與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對小鼠酚紅排痰量的影響 ±s)

注：與空白對照組比較，*P>0.05，**P<0.01。

3.1.2 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對大鼠排痰量的影響 復(fù)方貝母氯化銨組、復(fù)方熊膽茵陳顆粒高劑量組大鼠的痰排泌量顯著高于空白對照組(P<0.01)，復(fù)方熊膽茵陳顆粒低、中劑量組大鼠的痰排泌量與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

3.2 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠血液流變學(xué)影響

模型評價(jià)：模型對照組全血黏度、全血還原黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)及剛性指數(shù)均明顯增加，與陰性對照組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，紅細(xì)胞壓積增加(P<0.05)，紅細(xì)胞電泳指數(shù)均有所增加。結(jié)果表明，腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠模型建模成功。

表2 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對大鼠排痰量的影響 ±s)

注：與空白對照組比較，*P>0.05，**P<0.01。

給藥后，與模型對照組比較，硫酸氫氯吡格雷片組可降低全血中切、高切黏度、全血還原低切、中切和高切黏度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)(P<0.05)，其他指標(biāo)均有所改善但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；復(fù)方丹參片組大鼠血液流變學(xué)各指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；復(fù)方熊膽茵陳顆粒高劑量組可降低全血還原中切黏度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)(P<0.05)，其他指標(biāo)均有所改善但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；復(fù)方熊膽茵陳顆粒低、中劑量組大鼠的血液流變學(xué)各指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表3 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠血液流變學(xué)影響 ±s)

續(xù)表3 復(fù)方熊膽茵陳顆粒對腎上腺素及冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠血液流變學(xué)影響 ±s)

注：與陰性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05。全血低切黏度、全血還原中切、高切黏度均采用秩和檢驗(yàn)，其他指標(biāo)均采用方差。

4 討論

復(fù)方熊膽茵陳顆粒中、高劑量組可增加小鼠酚紅排泌量，復(fù)方熊膽茵陳顆粒高劑量組可增加大鼠痰排泌量，表明復(fù)方熊膽茵陳顆粒具有一定的祛痰作用，且呈現(xiàn)一定程度的劑量依賴性。

血瘀證是指一定病因誘導(dǎo)的血流緩慢或停滯，或血液離開血管產(chǎn)生瘀積，主要體現(xiàn)血液“濃、黏、凝、聚”的現(xiàn)象，是由于血液流變性異常而形成的全身或局部血液循環(huán)障礙[3]，并導(dǎo)致全身或局部血行的生理功能發(fā)生紊亂、改變等疾病。本實(shí)驗(yàn)采用給大鼠皮下注射腎上腺素加冷水刺激成功復(fù)制血流變性符合“濃、黏、凝、聚”的血瘀模型，其中對照組、低劑量組、高劑量組大鼠在冷水刺激后各死亡1只，復(fù)方丹參片組及中劑量組大鼠各死亡2只。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：復(fù)方熊膽茵陳顆粒可改善血液流變學(xué)和血液黏度，減少血液循環(huán)及微循環(huán)阻礙，增加組織器官血流量發(fā)揮治療效果。復(fù)方熊膽茵陳顆粒與硫酸氫氯吡格雷片組相同，對血瘀大鼠全血還原中切變黏和紅細(xì)胞剛性指數(shù)具有降低作用(P<0.05)；復(fù)方熊膽茵陳顆粒與硫酸氫氯吡格雷片組及復(fù)方丹參片組比較，全血各切變黏度、全血還原各切變黏度、紅細(xì)胞黏度、紅細(xì)胞壓積及紅細(xì)胞各指數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血液流變學(xué)研究結(jié)果表明，復(fù)方熊膽茵陳顆粒對血瘀大鼠的血液黏度具有降低作用。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，血液的流動性質(zhì)和血液黏度是反映各種活血化瘀藥物的客觀指標(biāo)[4]，可直接作為各種活血化瘀藥物共同作用的指標(biāo)之一。

綜上所述，復(fù)方熊膽茵陳顆粒中、高劑量組可增加小鼠酚紅排泌量，高劑量組可增加大鼠排痰量；復(fù)方熊膽茵陳顆粒高劑量可改善腎上腺素+冷水刺激誘導(dǎo)的急性血瘀大鼠全血還原中切黏度和紅細(xì)胞剛性指數(shù)。復(fù)方熊膽茵陳顆粒具有祛痰、化瘀作用，為臨床應(yīng)用的藥理基礎(chǔ)。

[1] 劉堯,毛羽.廣藿香揮發(fā)油止咳化痰藥理實(shí)驗(yàn)的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(8):1920-1921.

[2] 白仲梅,張建強(qiáng),魏玉輝,等.地奧心血康對血淤大鼠血液流變學(xué)及凝血系統(tǒng)的影響[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2013,39(2):38-40.

[3] 郭玉明,姜淼,品愛平.中醫(yī)證候分類研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(7):106-109．

[4] 劉靜,陳麗梅,曹林青,等.伊痛舒注射液對血瘀大鼠的活血祛瘀作用[J].西北藥學(xué)雜志,2004,19(6):260-261.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Study on the Effect of Compound Xiongdanyinchen Granule in Eliminating Phlegm and Removing Stasis

Zheng Haiyin1,Xu Wei2,Huang Mingqing2,Li Huang2,Hong Zhenfeng1,Jue Jinhua2

(1.Department of Integrated Medicine;2.Department of Pharmacy,TCM College of Fujian,Fuzhou 350122,China)

Objective:To study the effect of eliminating phlegm and removing stasis of compound Xiongdanyinchen granule.Methods:The mice were given corresponding medicines for 5 days,using the method of phenol red to detect the effect of eliminating phlegm of compound xiongdanyinchen granule 30 min later after the last administration,also the rats were ig.5 days,by measuring the capillary of phlegm to study its eliminating phlegm effect 1 h later after the last administration.And the rats ig 14 days,then the acute blood-stasis model rats were made by injected adrenaline and soaked in ice water after the last administration,by detected the indexes of blood rheology of rats to study its removing stasis effect.Results:High and middle dosage of compound xiongdanyinchen granule can increased the excretory amount of phenol red for the mice,and the high dosage can increased excretory amount of phenol red for the rats.Also,the high dosage can improve RBV (blood viscosity) and IR (Index of rigidity of red cell) in the acute blood-stasis model rats.Conclusion:comoound xiongdanyinchen granule showed the effect of eliminating phlegm and removing stasis.

Compound Xiongdanyinchen Granule;Eliminating Phlegm;Removing Stasis

2015-03-09

福建省科技重大專項(xiàng)(2010YZ0001-1)

鄭海音(1977-)，女，福建中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向?yàn)椴±韺W(xué)與病理生理學(xué)。E-mail:zhyfjtcm@sina.com

R285

A

1673-2197(2015)16-0009-03

10.11954/ytctyy.201516005