HPLC法測定牛黃滲透泵片中膽酸含量

趙 紅，陳懷明，黃 艷，劉文文，鐘 磊，張超云，羅再剛

(安徽理工大學 化工學院，安徽 淮南 232001)

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HPLC法測定牛黃滲透泵片中膽酸含量

趙 紅，陳懷明，黃 艷，劉文文，鐘 磊，張超云，羅再剛

(安徽理工大學 化工學院，安徽 淮南 232001)

目的：采用HPLC法測定自制牛黃滲透泵片中膽酸含量。方法：用冰醋酸溶解自制牛黃滲透泵片，經硫酸-水混合溶液70℃水浴處理后，采用HPLC法測定，色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.15%磷酸水溶液(40∶60)為流動相，檢測波長為387nm。結果：膽酸在48μg/mL～240μg/mL(r=0.999 2，n=3)濃度范圍內呈良好線性關系，平均回收率為99.60%，RSD=0.87%。結論：該方法可用于測定牛黃滲透泵片中膽酸含量，快速簡便，準確有效。

牛黃滲透泵片；HPLC；膽酸；含量測定

牛黃是牛科動物牛的膽結石，為名貴中藥材，具有極高的藥用價值，中醫可用于治療口舌生瘡、咽喉腫痛、高熱神昏、驚厥抽搐等病癥[1]。隨著現代快節奏的生活，多數人群處于亞健康狀態，易導致口舌生瘡，又因工作忙碌，常忘記按時吃藥。為適應現代生活節奏的改變，本文研制了牛黃滲透泵片，將每天服藥3次的普通片制備成每天服藥1次的緩釋片。大量藥理實驗表明，牛黃的藥理作用是由膽酸發揮[2]，因此以膽酸為待測物，采用HPLC法測定自制牛黃滲透泵片中膽酸的含量[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DP-120單沖式壓片機(江蘇泰州市制藥機械二廠)，片劑硬度測定儀(上海恒勤儀器設備有限公司)，BY300A型小型包衣機(南京天利制藥設備有限公司)，島津LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司),ODS(250mm×4.6mm,25μm)色譜柱。

1.2 試藥

膽酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100078-201014)，天然牛黃(北京同仁堂)。

2 方法與結果

2.1 牛黃滲透泵片的制備

片芯的制備：將處方量的牛黃原料藥與輔料過100目篩，混合均勻，加入適量的無水乙醇制軟材，用16目篩子制粒，50℃下干燥2h，30目篩子整粒，再加入適量的潤滑劑硬脂酸鎂，用單沖頭壓片機壓片得到每片含牛黃約30mg、片重約為210mg的單層片芯。

包衣液的制備：將乙基纖維素、適量PEG4 000溶于丙酮溶液(丙酮∶水= 95∶5)中，用磁力攪拌器攪拌至完全溶解，即得包衣液。

包衣與打孔：將制得的片芯置于包衣鍋中，包衣鍋轉速為40r·min-1，包衣溫度為50～55℃。包衣過后在55℃條件下干燥12h，用機械方法打孔，制得牛黃滲透泵片。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 C18柱，流動相為乙腈-0.15%H3PO4水溶液(40∶60)，檢測波長為387nm。

2.2.2 供試品溶液的制備 取牛黃滲透泵1片，去包衣層，碾碎，緊密稱定約10mg，加60%的冰醋酸數滴，研磨，全部移入100mL量瓶中，用60%的冰醋酸定容，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續濾液1mL，至帶塞試管中，加硫酸-水(50∶65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取膽酸對照品30.0mg，放置100mL量瓶中，加60%的冰醋酸溶解定容作為母液。

2.2.4 線性關系 分別用移液管精密移取母液4、6、8、12、15、20mL至25mL容量瓶中，均加硫酸-水(50:65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min，進樣。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明：在48μg/mL～240μg/mL范圍內，膽酸的線性回歸方程為Y=87.189X-24.465(r=0.999 2,n=3)，線性關系良好。

2.2.5 專屬性試驗 取牛黃滲透泵片的陰性對照品，按“2.2.2”項方法操作，進樣。結果顯示：在陰性對照品中，未出現與膽酸相同保留時間的色譜峰，表明滲透泵片中輔料對膽酸測定無干擾。見圖1。

2.2.6 精密度試驗 去膽酸對照品，按“2.2.3”項方法制備溶液，重復進樣6次。結果表明：其RSD值小于1.5%，符合精密度要求。

2.2.7 穩定性試驗 取牛黃粉末，按“2.2.2”項方法制備溶液，分別于0、2、4、8、12h進樣測定含量。結果表明：不同時間點RSD值小于1.5%。符合穩定性要求。

2.2.8 重復性試驗 取牛黃滲透泵片6片，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，分別進樣。結果表明：各峰面積RSD值小于1.5%，符合重復性要求。

2.2.9 加樣回收試驗 精密稱取牛黃供試品適量(相當于膽酸約5mg)，置于100mL量瓶中，再精密稱取膽酸對照品約5mg，加入60%的冰醋酸數滴，研磨，定容，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續濾液1mL，至帶塞試管中，加硫酸-水(50∶65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min，平行進樣3次，測定含量。結果顯示：膽酸回收率為99.60%，RSD為0.87%。見表1。

表1 牛黃供試品加樣回收試驗結果

2.2.10 樣品含量測定 取牛黃滲透泵片，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項條件進樣，測定其中膽酸含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定

3 討論

目前，牛黃的標準測定方法為糠醛比色法，該方法受反應溫度和反應時間影響較大，重現性較差。在192nm波長處測定膽酸含量，多種溶劑有吸收，會干擾測定結果。本實驗用60%的冰醋酸溶解后，以一定濃度的硫酸溶液水浴方法對膽酸進行處理，膽酸在387nm處有吸收峰。通過專屬性試驗證明，該輔料和溶劑無干擾作用，可準確測定膽酸含量，為本實驗室自制的牛黃滲透泵片含量測定及后期釋放度測定提供了方法學依據。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學工業出版社，2015:53.

[2] 許珍珍，黃一平，余晶晶，等.不同提取方法對人工牛黃中膽酸含量的影響[J].中國藥房,2009,20(9):664-665.

[3] 王志強，劉海津.薄層掃描法測定天然牛黃與人工牛黃膽酸含量比較[J].中醫學報,2011,26(10):161-162.

(責任編輯：李嵐春)

Determination of Cholalic Acid in Calculus Bovis Osmotic Pump Tablets

Zhao Hong,Cheng Huaiming,Huang Yan,Liu Wenwen,Zhong Lei,Zhang Chaoyun, Luo Zaigang

(Chemical Engineering College ,Anhui University of Science and Technology,Huainan 230001,China)

Objective:Determinate the homemade cholalic acid in calculus bovis osmotic pump tablets.Methods:The tablets were dissolved by glacial acetic acid, 70℃ sulfuric acid- water curing treated, and then measured by HPLC in which C18was used as filler, acetonitrile-0.15% phosphate acid solution(40∶60)was used as mobile phase, the detective wavelength was at 387nm.Results:The cholalic acid fell in the range of 48～240μg/mL(r=0.999 2,n=3), the average recoveries were 99.60%(RSD=0.87%，n=3).Conclusion:This method can be used for the determination of bezoar osmotic pump in bile acid content, it is quick and easy, accurate and effective.

Calculus Bovis Osmotic Pump;HPLC;Cholic Acid;Content Determination

2015-07-07

大學生創新基金項目(AH201410361213)；安徽理工大學青年教師基金項目(QN201311)；國家自然科學基金青年科學基金項目(21102003)

趙紅(1980-)，女，碩士，安徽理工大學講師，研究方向為藥劑學。

R284.2

A

1673-2197(2015)22-00011-02

10.11954/ytctyy.201522005