骨癆敵顆粒對結核二聯療法致小鼠肝損傷的影響＊

周春梅 胡宗苗 王興海 白吉慶 張恩戶 陜西中醫藥大學（咸陽 712046）

結核病是由結核分枝桿菌引起的傳染性呼吸道疾病，是引起全球關注的重大傳染性疾病［1］。目前，二聯療法（異煙肼＋利福平，RFP＋INH）是WHO推薦的一線抗結核藥，但RFP和INH的代謝場所均為肝臟，具有肝毒性，且聯合用藥對肝損害更嚴重、發生率更高［2］。骨癆敵注射液為從民間驗方中篩選研發出的治療骨、關節結核的中藥注射劑，臨床效果顯著。本文觀察其口服制劑－骨癆敵顆粒劑對結核二聯療法致小鼠肝損傷的影響，以評價其對二聯療法的減毒作用。

1 材料與方法 1.1 實驗動物 雄性昆明種小鼠，體重（20±2）g，由第四軍醫大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：SCXK（軍）2012－007。動物飼養于陜西中醫學院中藥藥理實驗室，自由攝食飲水，動物房自然明暗，室溫（20±2）℃。

1.2 藥品與試劑 骨癆敵顆粒（1g相當于生藥4g），陜西中醫學院制藥廠自制，由參三七、骨碎補、黃芪、乳香和沒藥制成，具有益氣養血、壯骨補腎、活血化瘀等功效，用于骨關節、淋巴、肺等各種結核病；異煙肼片（規格：100mg×100片），西安利君制藥有限責任公司生產，批號1405290；利福平膠囊（規格：0.15g×100s），成都錦華藥業有限責任公司生產，批號130805；實驗用卡介苗凍干粉（規格：50mg／瓶），由西安茂新生物科技有限公司提供。

1.3 主要儀器設備 BT224S電子天平，德國賽多利斯科學儀器有限公司；TGL－16M臺式高速冷凍離心機，濟南博鑫生物技術有限公司；PUZS－300全自動生化分析儀，南京普朗醫用設備有限公司；DMBH200顯微鏡，舜宇光學科技有限公司。

1.4 方 法 取雄性昆明種小鼠，皮下注射卡介苗0.05mg／只后隨機分為對照組、二聯療法組、骨癆敵顆粒高、低劑量組，每組10只。二聯療法組和骨癆敵顆粒高、低劑量組每天給小鼠灌胃異煙肼80（mg·kg－1）加利福平120（mg·kg－1），1h后，骨癆敵顆粒高、低劑量組分別灌胃骨癆敵顆粒0.2g生藥／kg、0.1g生藥／kg；二聯療法組、對照組給予等量生理鹽水，1d1次，連續14d。最后一次灌胃后禁食不禁水12h，各組小鼠均摘眼球采血，分離血清，檢測血清ALT、AST的活性。處死各組動物，剖取肝臟，肉眼觀察肝臟大體形態和顏色，精密稱取完整肝臟的重量，計算肝指數 ［＝肝重（mg）／體重（g）×100%］，取肝左葉，10%福爾馬林固定，常規制片，蘇木素－伊紅（HE）染色，光鏡下觀察肝組織的病理學變化。

1.5 統計學方法 采用統計學軟件SPSS 19.0進行數據分析，通過單因素方差分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果 2.1 骨癆敵顆粒對小鼠一般情況的影響實驗期間，對照組小鼠飲食、排泄均正常，且毛色光潔，動作靈活，精神良好；二聯療法組小鼠飲食明顯減少，大小便顏色失常，均為橘紅色，且毛色發黃易脫落，活動遲緩，有不同程度的精神萎靡；骨癆敵顆粒高、低劑量組小鼠的飲食、排泄、毛色、精神等情況較二聯療法組明顯好轉，但比對照組稍差。

2.2 骨癆敵顆粒對小鼠肝臟的影響 對照組小鼠的肝臟顏色均勻，呈紅褐色，質地柔軟，邊緣較薄；二聯療法組與對照組相比，小鼠肝臟整體顏色變淺，呈黃褐色，體積增大，質地較脆，邊緣增厚；骨癆敵顆粒高、低劑量組與二聯療法組相比，小鼠肝臟顏色有所恢復，偏紅褐色，體積縮小，質地較柔軟，有輕微水腫。

2.3 骨癆敵顆粒對小鼠血清ALT、AST及肝指數的影響

見表1。

表1 骨癆敵顆粒對小鼠血清ALT、AST及肝指數的影響（±s）

表1 骨癆敵顆粒對小鼠血清ALT、AST及肝指數的影響（±s）

注：與二聯療法組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

組 別 n ALT（IU／L） AST（IU／L） 肝指數（mg／g）對照組 10 52.40±8.95▲ 156.40±20.00△ 38.82±2.54▲二聯療法組 10 88.20±9.80 213.40±44.52 57.18±3.74骨癆敵低劑量組 10 70.90±7.53▲ 161.50±7.43△ 53.04±3.74骨癆敵高劑量組 10 51.20±12.26▲ 146.70±29.55▲ 48.90±2.65▲

2.4 骨癆敵顆粒對小鼠肝組織病理學檢查的影響 見圖1。對照組小鼠的肝細胞無壞死和炎細胞浸潤，肝小葉結構非常清晰，肝細胞索圍繞中央靜脈呈放射狀排列；二聯療法組小鼠的大部分肝細胞發生空泡變性和點灶性壞死，且有明顯的炎細胞浸潤，肝小葉結構受到破壞，肝細胞索排列非常紊亂，且肝血竇受擠壓嚴重變形；骨癆敵顆粒低劑量組和骨癆敵顆粒高劑量組與二聯療法組相比小鼠肝臟組織的形態差異顯著，骨癆敵顆粒低劑量組小鼠的肝細胞有不同程度變性，但無明顯肝細胞壞死，肝小葉結構較清晰，但肝細胞索排列較紊亂；骨癆敵顆粒高劑量組小鼠的肝細胞損傷明顯減輕，無壞死及炎細胞浸潤，僅有少量肝細胞輕度水腫，肝小葉結構趨于正常，且肝細胞索圍繞中央靜脈大致呈放射狀排列。

圖1 骨癆敵顆粒對小鼠肝組織病理學的影響（HE染色×100）

3 討 論 異煙肼和利福平是現今臨床上治療結核病的一線藥物，二者的聯合用藥是抗結核病的首選方案，且抗結核的有效率很高，但二者均具有致肝損傷的不良反應。異煙肼在肝內分解的產物乙酰肼被認為與肝損害有關；利福平可誘導肝臟P450代謝酶的活性，與異煙肼合用會加重肝損傷［3］。ALT、AST主要分布在肝組織，正常情況下它們在血清中的含量很低，但肝臟的實質細胞受損或壞死時，血清中ALT、AST水平會明顯升高，并且它們的水平變化與肝細胞受損的程度一致，所以血清中的ALT、AST水平是檢測肝細胞損傷的敏感指標，用于診斷肝臟的實質損傷［4］。

骨癆敵顆粒劑由三七、黃芪、骨碎補、乳香（制）、沒藥（制）五味中藥制成，具有益氣養血、壯骨補腎、活血化瘀的功效，用于骨關節、淋巴、肺等各種結核病。方中三七可止血、活血、化瘀，有保肝、抗炎等藥理作用，其有效成分為三七皂苷，能顯著降低RFP和INH合用引起的血清ALT、AST及肝臟指數升高的水平，對RFP和INH合用引起的肝損傷有明顯的保護作用；黃芪有增強免疫、保肝、抗腫瘤、抑制病毒等藥理作用，有效成分為黃芪多糖［5］；骨碎補能補肝腎、強筋骨，有抗骨質疏松、抗炎等作用；乳香可消炎、鎮痛，能促進傷口愈合；沒藥具有抗腫瘤、保肝、凝血、鎮痛等作用，研究表明沒藥提取物能保護CCl4對大鼠造成的肝損傷［6］。故本實驗以異煙肼和利福平聯合用藥造成小鼠肝損傷模型，通過檢測血清ALT、AST水平及計算肝指數，并結合病理切片探查骨癆敵顆粒對小鼠肝臟的影響。結果顯示，大劑量的骨癆敵顆粒能顯著降低血清ALT、AST及肝指數水平，減輕結核二聯療法所致的肝損傷；同時，骨癆敵顆粒能顯著改善RFP和INH聯合使用導致小鼠肝損傷的病理學變化，并隨劑量增加肝損傷逐漸減輕，說明骨癆敵顆粒可保護小鼠肝臟，對RFP和INH合用所致小鼠肝損傷有預防作用。

［1］ 廖 麗.我國結核病流行現狀及防治工作形勢分析［J］.中外醫療，2014，（3）：129－130.

［2］ 房宏霞，武珊珊，呂曉珍，等.抗結核治療期間患者出現肝損傷相關癥狀與致肝損傷的關系分析［J］.中國防癆雜志，2013，（10）：816－822.

［3］ 劉奉鳳，陳耀凱.抗結核藥物性肝損傷的研究進展［J］.重慶醫學，2014，（19）：2512－2514.

［4］ 冀潤利，趙青娥.水飛薊素對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用［J］.中國應用生理學雜志，2012，（3）：279－280，287.

［5］ 何文涓，袁志堅，何曉升.黃芪多糖的藥理作用研究進展［J］.中國生化藥物雜志，2012，33（5）：692－694.

［6］ 韓 璐，孫甲友，周 麗，等.沒藥化學成分和藥理作用研究進展［J］.亞太傳統醫藥，2015，（3）：38－42.