婦樂顆粒對家兔盆腔炎模型炎癥細胞因子及ICAM－1的影響＊

劉鳳萍 張民英 陜西省漢中市人民醫院婦產科（漢中723000）

盆腔炎（Pelvic inflammatory disease，PID）是女性生殖器及其周圍結締組織炎癥的總稱，具體可見子宮內膜炎、子宮肌炎、輸卵管炎、盆腔腹膜炎等臨床病癥，炎性滲出、生殖器官粘連，局部組織增厚或發生瘢痕增生為其病理實質改變［1］，該病為婦科常見病，嚴重者可導致不孕，或導致慢性盆腔痛、異位妊娠等并發癥。統計顯示，全世界每年被診斷為盆腔炎的婦女約有78萬，而在我國，其發病率也在逐年攀升，對婦女健康產生嚴重影響。由于該病發生發展及癥狀的不典型性，目前臨床對其診療比較局限。婦樂顆粒由忍冬藤、大黃（制）、大血藤、大青葉、蒲公英、牡丹皮、赤芍、川楝子、延胡索（制）、甘草等多味中藥組成，具有清熱涼血，活血化瘀，消腫止痛之功效，主要用于治療急性盆腔炎、急性附件炎、急性子宮內膜炎等引起的帶下、腹痛等癥。但該制劑缺乏治療盆腔炎的基礎研究，本研究觀察了婦樂顆粒對家兔盆腔炎模型血清 IL－2、IL－8、IL－10、TNF－α水平及子宮、輸卵管細胞粘附分子（ICAM－1）的影響，初步探討了婦樂顆粒治療盆腔炎的作用機理，為臨床提供了實驗依據。

1 材 料 1.1 實驗動物 5～6個月齡健康新西蘭雌兔，性成熟，未交配，購自西安交通大學實驗動物中心，合格證號：醫動字第08－018，于陜西中醫學院動物實驗室普通清潔環境分籠飼養，保持12h晝夜節律，室溫（22±1）℃，自由攝食飲水。

1.2 藥品與試劑 婦樂顆粒（四川綠葉寶光藥業股份有限公司生產，國藥準字Z51020624），婦科千金片（株洲千金藥業股份有限公司，國藥準字Z43020027）；兔血清ELISA檢測試劑盒 Rabbit IL－2ELISA KIT（批 號：EIA－16243）、Rabbit IL－8 ELISA KIT（批號：EIA－16251）、Rabbit IL－10ELISA KIT（批號：EIA－16198） 、Rabbit TNF－α ELISA KIT（批 號：EIA－16182），購自美國BD公司；細胞黏附分子 （ICAM －1）抗體（批號：bs－4782R）購自博奧斯公司。

1.3 主要儀器 酶標儀（BioTek），電子分析天平（賽多利斯），超凈工作臺（蘇州凈化設備有限公司），倒置顯微鏡（日本尼康），RM2016病理切片機（上海徠卡儀器有限公司）。

2 方 法 2.1 菌液制備 金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌標準菌株以1∶1比例混合，于實驗前1h稀釋為1×107／L濃度菌液。

2.2 造模與分組 所有家兔于實驗前稱重、測肛溫、化驗血常規，排除炎癥，并隨機抽取3只家兔進行腹腔鏡檢查術，觀察健康家兔盆腔狀況。預留10只家兔作為對照組，其余家兔實驗前6h肌內注射孕馬血清50IU，造模時家兔固定，暴露外陰，將一次性無菌輸液管插入家兔泌尿生殖口內約8cm；回抽順利無液體，注入混合菌液（1mL／kg），觀察30s無液體外溢，將兔倒置5min后放回飼養籠，第49d靜脈麻醉下剖腹探查，家兔子宮質脆、充血，輸卵管管壁增厚粗糙并與周圍組織粘連，或外觀略呈串珠樣改變確定模型成功，常規關腹。造模成功的家兔隨機分為模型組、婦樂顆粒組、婦科千金片組，每組10只，分別灌服蒸餾水、婦樂顆粒1.028g／kg、婦科千金片0.225g／kg，對照組也灌服蒸餾水，1d1次，連續30d。用藥劑量系根據臨床人用劑量換算家兔給藥量。

2.3 取材與標本處理 給藥結束后，家兔次日清晨戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈取血20mL，ELISA法檢測白介素IL－2、IL－8、IL－10，腫瘤壞死因子TNF－α水平；剖腹觀察盆腔臟器變化，處死，取子宮及雙側輸卵管放入4%多聚甲醛溶液中固定，常規包埋，石蠟切片，做細胞黏附分子 （ICAM －1）免疫組化染色。

2.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件統計分析，t檢驗單因素方差分析。

3 結 果 3.1婦樂顆粒對家兔血清中IL－2、IL－8水平的影響 表1可見，婦樂顆?？烧{節盆腔炎家兔血清中IL－2、IL－8的平衡。

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平變化（±s，n＝10）

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平變化（±s，n＝10）

注：與對照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01

組別 給藥劑量 IL－2（pg／mL） IL－8（pg／mL）－ 122.14 ±9.03 45.64±7.52模型組 － 81.38±17.15◇ 126.26±23.54◇婦樂顆粒組 1.028g／kg 114.62±13.43▲ 54.46±9.46◆婦科千金片組 0.225g／kg 116.85±12.54▲ 55.48±11.45對照組◆

3.2 婦樂顆粒對家兔血清中IL－10、TNF－α水平的影響表2可見，婦樂顆粒可調節盆腔炎家兔血清中IL－10、TNF－α的水平。

3.3 婦樂顆粒對家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1的表達 與正常組比較，模型組家兔子宮、輸卵管組織ICAM－1陽性細胞數明顯升高；與模型組比較，婦樂顆粒組、婦科千金片組家兔子宮、輸卵管組織ICAM－1陽性細胞數均顯著下降，如表3、圖1。

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平變化（±s，n＝10）

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平變化（±s，n＝10）

注：與對照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01

）48.01±11.64模型組 － 43.54±15.64◇108.24±34.51◇婦樂顆粒組 1.028g／kg 78.94±11.74◆ 61.48±13.33◆婦科千金片組 0.225g／kg 75.30±8.94◆ 59.21±8.59對照組 － 89.55±9.82◆

圖1 各組家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1的表達

表3 家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1陽性表達（±s，n＝10）

表3 家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1陽性表達（±s，n＝10）

注：與對照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，◆P＜0.01

69.33±19.45模型組 － 136.34±45.54◇婦樂顆粒組 0.225g／kg 84.74±41.74◆婦科千金片組 1.028g／kg 87.30±38.94 ICAM－1對照組組別 給藥劑量－◆

4 討 論 盆腔炎為臨床青春期及育齡婦女常見病，細胞因子的異常表達與其炎癥的發生、發展密切相關，炎癥細胞浸潤、膠原蛋白沉積及組織纖維化是該病常見病理表現。大量研究表明，各種白介素與其相應受體結合，通過一系列信號傳導調節靶基因的表達，繼而表達產物發揮生物效應，發揮免疫調節、免疫應答等重要作用，參與炎癥反應的全程。

介導細胞免疫的IL－2由Th1型細胞分泌，其表達下降可導致細胞因子代謝增強，血中皮質醇分泌增多，并誘導抑制性細胞活性，使淋巴細胞對致分裂原反應下降［2］。IL－8能增進白細胞產生免疫應答，使白細胞趨化及游走能力加強［3］，對炎癥部位中性粒細胞和單核細胞的募集和活化、白細胞黏附分子表達十分重要［4］。IL－10是典型的抗炎與免疫抑制性細胞因子，是由Th2型細胞分泌的負調節因子。TNF－α是受致炎因子刺激后由單核－巨噬細胞產生的具有多種免疫功能細胞因子［5］，對機體具有雙重作用，炎癥初始，血管內皮細胞表達黏附因子會產生適量的TNF－α，提高機體自身免疫力，通過調節多種免疫細胞因子共同殺滅入侵致病原，有助于免疫系統發揮抗炎作用，但隨著炎癥的進展，過量的TNF－α產生，則產生劇烈的呈現毒性作用的免疫反應，過度表達的TNF－α將趨化中性粒細胞發生炎性浸潤，同時促進其它炎性因子表達，導致進一步炎性病理改變。在炎癥狀態下，活化的T細胞和B細胞使細胞間黏附分子1（ICAM－1）表達上調。ICAM－1是免疫球蛋白超家族成員，其表達增強將會通過與其配體結合，介導炎癥細胞活化、遷移及細胞間粘附，引起局部微血管阻塞等，進而導致組織器官結構和功能的嚴重損傷［6］?？梢娨种艻CAM－1表達對于阻止粘連的發生，包塊的形成，最終促使盆腔炎康復都具有重要意義。

［1］ 段丹梅.婦科千金片對慢性盆腔炎模型大鼠TNF－α、IL－2IL－6表達的影響［J］.中醫學報，2014，29（10）：1467－1468.

［2］ 李 強，曹德勝.高原重癥急性胰腺炎患者血清IL－2、IL－8變化的臨床意義［J］.山東醫藥，2010，50（21）：3.

［3］ 李亞珍，傅應云，韓雪梅，等.糖皮質激素對慢性阻塞性肺疾病患者IL－8及 TNF－α的影響［J］.廣東醫學，2011，32（5）：602－604.

［4］ 袁建菱，郭建生，左之文，等.婦科千金片對盆腔炎模型大鼠血清中IL－2、IL－6、IL－8含量的影響［J］.中華中醫藥雜志，2013，28（1）：250－252

［5］ 王振亮，姚乃禮.石藤膠囊對佐劑性關節炎大鼠TNF－α，IL－1β的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（8）：195－198.

［6］ 黃秀錦，朱 葉.保婦康對慢性盆腔炎大鼠ICMI－1、TGF－β1mRNA及炎性細胞因子表達的影響［J］.中藥藥理與臨床，2014，30（1）：116－118.