一種鉑類抗腫瘤藥用藥指導的多重SNP 檢測方法

南麗 姜丹 孔咪咪

(寧波海爾施基因科技有限公司 浙江 寧波 315800)

鉑類藥物是目前臨床上最常用的腫瘤化療藥物之一，包括順鉑、卡鉑和奧沙利鉑等。據統計，在我國抗癌化療治療方案中，以順鉑為主或有順鉑參加配伍的方案占所有化療方案的70% ～80%。但在鉑類藥物的臨床應用中，卻存在治療有效率低和副作用大的問題，而且存在顯著的個體差異。研究表明，人群對鉑類藥物的個體差異與多個單核苷酸多態性(SNP)密切相關。其中6 個基因的8 個SNP 位點:TPMT 的rs1142345 和rs18004601 位點、ERCC1 rs116152、XRCC1 rs254873、COMT 的rs4646316和rs93323771 位點、GSTP1 rs16954 及XPC rs22280015 尤其重要，用藥前檢測這些位點，可協助醫生評估順鉑治療后毒性風險、對患者是否有效及治療后生存時間、總體生存時間及死亡風險。

本研究開發了一種用于鉑類用藥指導的多重基因檢測試劑盒(以下簡稱:鉑類試劑盒)，同步特異性擴增與鉑類用藥相關的6 個基因8 個SNP 位點的等位基因類型，為醫生和患者提供了一種鉑類用藥指導的新型檢測方案。

1.材料和方法

1.1 DNA 提取:以抗凝靜脈血作為樣本進行DNA 提取。DNA 提取在自動化提取工作站Smart LabAssist－32(臺灣圓點奈米技術有限公司)上完成。試劑盒使用"核酸自動提取試劑盒(磁珠法)"(寧波海爾施基因科技，貨號:1060055)。

1.2 PCR 擴增:PCR 擴增反應:鉑類PCR 預混液16μL、Taq DNA 聚合酶2μL、樣品DNA /鉑類陽性對照2μL。混勻后按以下溫度進行熱循環反應:94℃3 分鐘;94℃30 秒，60℃30 秒，70℃30 秒，共35 個循環;72℃3 分鐘;4℃保存產物。

1.3 DNA 片段分離:采用遺傳分析儀(3500/3130，美國生命公司或GeXP，美國貝克曼庫爾特公司)進行DNA 片段分離，詳見說明書。

2.結果

鉑類試劑盒檢測人DNA 樣品，因每個SNP 位點有可能出現2 個基因型峰，故共可能出現12 －20 個特征峰，其中8 －16 個為SNP 特征峰、3 個人DNA 內參特征峰(BC－1、BC－3、BC－4)和1 個PCR 反應內參pcDNA特征峰(圖1)。鉑類陽性對照檢測結果應出現全部20 個特征峰。

圖1、本試劑盒檢測人基因組DNA 結果舉例。共出現16 個特征峰:8 個SNP 位點有4 個雜合子(XRCC1、TPMT－1、TPMT－2 和XPC)，即12 個基因型峰和4 個內參峰。

3.討論

目前常用的SNP 檢測方法:qPCR 法的優點是靈敏度高、準確性強，其缺點是通量低且探針成本高;DNA 芯片有高通量等優點，其缺點為成本昂貴、靈敏度低、重復性差且準確性低;Sanger 測序法是SNP 分析金標準，能發現已知SNP 和未知SNP，缺點是工作量大，周期長，多位點檢測累計價格相對昂貴。

本研究提供了一種快速、準確同步檢測多個SNP 位點用于指導鉑類用藥指導的新方法。目前，國內外尚無類似的研究報道。

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