不同復方中藥提取液止瀉效果的研究

張邑帆，朱買勛，鄭 華，翟少欽，陳春林，張素輝，曹國文

（重慶市畜牧科學院，重慶榮昌402460）

不同復方中藥提取液止瀉效果的研究

張邑帆，朱買勛，鄭 華，翟少欽，陳春林，張素輝，曹國文

（重慶市畜牧科學院，重慶榮昌402460）

為篩選一種高效、安全、經濟的針對畜禽腹瀉病的復方中藥，依據中獸醫辨證擬定5個止痢復方，通過測定對雞白痢沙門菌和大腸桿菌的抑菌作用，篩選效果較好的復方中藥，再設高、中、低劑量組，采用灌服番瀉葉的方式導致小鼠腹瀉，以楊樹花口服液作為陽性對照，觀察復方對腹瀉小鼠的止瀉作用；檢測碳末在小腸內推進率反應藥物對小腸蠕動的影響，小鼠耳廓腫脹度反應藥物抑制腫脹效果。結果顯示，方5的抑菌效果優于其他4個復方，且效果與藥液濃度成正比。止瀉4 h內陽性對照、高、中劑量組小鼠腹瀉率分別為40%、40%、60%，與空白組（腹瀉率為100%）相比較差異均為極顯著（P＜0.01）；高、中劑量組碳末在腸道內的推進距離縮短，與空白組相比較差異極顯著（P＜0.01）；中劑量組小鼠耳廓腫脹率降低，與空白組相比較差異顯著（P＜0.05）。表明方5能較好地抑制雞白痢沙門菌和大腸桿菌，改善動物小腸蠕動，增強抗炎效果。

止瀉；腸推進；抗炎

畜禽腹瀉病是嚴重威脅現代畜禽養殖業的主要疾病之一，畜禽發生腹瀉性疾病，不僅影響其生長發育，還容易引起死亡，嚴重阻礙我國畜禽業的發展。目前針對畜禽腹瀉病主要是使用抗生素進行防治，但長期使用或者不合理用藥物不僅導致了耐藥菌株的出現，還致使畜產品的藥物殘留，危害人類健康。中藥活性物不僅具有抗菌、增強機體免疫機能、提高動物抗應激和抗炎能力，還富含營養物質，能改善動物生產性能，且毒副作用小、不易產生耐藥性，利用中藥防治畜禽疾病已成為近年來研究的熱點［1-3］。本試驗依據中獸醫辨證理論自擬5個復方中藥，通過對雞白痢沙門菌和大腸桿菌得抑菌作用篩選效果較好的復方，并以小鼠為試驗動物，研究該復方對番瀉葉所致小鼠腹瀉的止瀉效果及其對小鼠腸道蠕動和抗炎效果，為抗腹瀉中藥的研究和臨床應用提供參考。

1 材料

1.1 試驗動物清潔級昆明系小鼠150只，體重

26±2 g，雌雄各半，購自重慶實崠生物技術有限公司。實驗動物許可證號：SCXK-（軍）2012-0003，編號：0020969。

1.2 試驗中藥止痢復方1：由黃連、秦皮、石榴皮等組成，簡稱方1；止痢復方2：由黃連、烏梅、蒼術等組成，簡稱方2；止痢復方3：由黃連、烏梅、辣蓼等組成，簡稱方3；止痢復方4：由黃連、木香、秦皮等組成，簡稱方4；止痢復方5：由黃連、三顆針、烏梅等組成，簡稱方5。各復方藥液濃度均為1 m L含生藥1 g，由重慶市畜牧科學院獸醫研究所中獸藥研發課題組提供。對照藥物為楊樹花口服液，重慶永健生物技術有限責任公司，批號：20140101。番瀉葉煎劑：將番瀉葉剪碎，浸泡30 min，煎煮5 min，濃縮至1 mL含生藥1 g，滅菌，4℃保存，備用。

1.3 菌株雞白痢沙門菌（Salmonella pullorum），購自中國獸醫微生物菌種保藏中心，菌株編號CVCC534；大腸桿菌（Escherichia coli），購自中國獸醫微生物菌種保藏中心，菌株編號CVCC83907。

2 試驗方法

2.1 復方中藥最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）的測定參照文獻［4］，對5個復方中藥進行MIC及MBC的測定以評價其體外抗大腸桿菌和沙門菌的作用效果，每個試驗重復3次。

2.2 復方中藥對雞白痢沙門菌和大腸桿菌體外抑菌試驗試驗采用牛津杯法，取0.1mL濃度為106～107CFU/mL菌液均勻涂布于固體培養基上。每個平板中放置3個牛津杯，分別取高、中、低3個劑量組的藥液200μL，每個復方對每種菌重復試驗3次。分別在培養12 h和24 h時測量抑菌圈，判斷藥物敏感性。判定標準：≥20 mm為極敏；15～19mm為高敏；10～14mm為中敏；10 mm以下為低敏［4］。

2.3 復方中藥對番瀉葉所致小鼠腹瀉的止瀉作用根據抑菌試驗選擇止瀉效果最佳的復方，設高、中、低劑量組，每組小鼠分別按照10 g/kg、5 g/kg、2.5 g/kg體重的劑量進行灌胃，1次/d，連續3 d，灌楊樹花口服液作為陽性對照，灌生理鹽水作為空白對照。末次給藥30min后按0.4mL/只的劑量灌胃番瀉葉，各鼠單獨放于鋪有濾紙的鼠籠內，每隔1 h更換1次，共觀察6 h，記錄小鼠的總便數和濕糞數，統計2 h、4 h、6 h內的腹瀉率和稀便率，重復試驗2次。腹瀉率=腹瀉的動物數/該組動物總數×100%；稀便率=每只動物所排的濕糞數/總便數。

2.4 復方中藥對番瀉葉所致的小鼠小腸推進試驗選取小鼠50只，同2.3試驗進行分組和灌藥。末次給藥30 min后分別按0.5 m L/只灌胃碳末阿拉伯膠混懸液，30 min后脫頸處死小鼠，解檢，剪取上自幽門、下至回盲部的腸管，不加牽引地平鋪于平臺上，觀察記錄各組推進情況，每個試驗重復2次。

2.5 復方中藥對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹試驗

選取小鼠50只，同2.3試驗進行分組和灌藥。末次給藥30 min后各組小鼠右耳雙面涂二甲苯0.1mL/只，1h后脫頸處死，剪取小鼠左、右耳片，稱重，計算小鼠耳廓腫脹率及抑腫脹率。腫脹率=（右耳片重量-左耳片重量）/左耳片重量× 100%；抑制率=（空白組耳片腫脹度-給藥組耳片重量腫脹度）/空白組耳片腫脹度×100%。

2.6 試驗數據處理采用SPSS18.0軟件LSD法進行方差分析，以0.05或0.01作為顯著性差異標志。

3 結果

3.1 復方中藥對雞白痢沙門菌和大腸桿菌的MIC、MBC測定從表1可知，方5的抑菌、殺菌作用效果較好，對雞白痢沙門菌和大腸桿菌的MIC和MBC值均為31.25mg/L。

表1 復方中藥對雞白痢沙門菌和大腸桿菌的MIC、MBC測定（單位：mg/L）

3.2 復方中藥對雞白痢沙門菌和大腸桿菌體外抑菌效果從表2可知，抑菌12 h后，5個復方中藥高劑量組藥物對大腸桿菌和雞白痢沙門菌極敏；中劑量時，方1對大腸桿菌失去了抑菌效果，只有方3、方5對其仍處于極敏，與其他組相比較差異極顯著（P＜0.01）；抑菌24 h后，只有方5的高、中、低劑量組能同時對大腸桿菌和雞白痢沙門菌有抑菌效果，因此方5為抑菌效果較好的復方中藥。

3.3 方5對番瀉葉所致的小鼠腹瀉的作用從表3可知，在2 h內，陽性對照、高劑量組腹瀉率降為0，中劑量組降為20%，隨著時間的延長，腹瀉率逐漸升高；稀便率也隨時間延長逐漸升高，陽性對照、高、中劑量組的稀便率與其對應時間段空白組的稀便率相比較差異極顯著（P＜0.01），而低劑量組與空白組相比較差異不顯著（P＞0.05）。

表2 不同復方中藥對雞白痢沙門菌和大腸桿菌體外抑菌效果（單位：mm）

表3 方5對番瀉葉致瀉小鼠腹瀉的影響（n=10）

3.4 方5對番瀉葉所致的小鼠小腸推進試驗從表4可知，陽性對照、方5高、中劑量組能顯著減慢小腸推進速度，縮短碳末在腸道內的推進距離，與空白組比較，差異極顯著（P＜0.01）。

表4 方5對小鼠小腸推進的影響（n=10）

3.5 方5對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹試驗從表5可知，高、低劑量抑制耳廓腫脹效果不明顯，陽性對照、中劑量組能顯著抑制耳廓腫脹，與空白組比較，差異顯著（P＜0.05）。

組別劑量（g/kg）腫脹率/%抑腫率/%

表5 方5對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（n=10）

4 討論

試驗采用番瀉葉復制小鼠腹瀉模型，其致瀉作用主要是其有效成分蒽醌類能刺激小鼠腸合成并釋放前列腺素（PG），促進結腸的水和電解質凈分泌，刺激主動Cl-分泌，加速大腸內容物輸送及瀉下作用［5］。試驗小鼠灌服番瀉葉后，出現嚴重的腹瀉現象，證明了番瀉葉致小鼠腹瀉模型建立成功。

依據現代藥理研究，中藥黃連和三顆針富含小檗堿、黃連素，烏梅有多種揮發性物質、有機酸和黃酮類物質，在體外對沙門菌、大腸桿菌、綠膿假單胞菌、金黃色葡萄球菌以及臨床分離的多種腸球菌有抑殺作用；烏梅、秦皮、石榴皮具有澀腸止痢的功效；蒼術、木香能調節小腸運動，降低小腸緊張性和節律性收縮，還有抗炎、鎮痛的作用［6-7］。試驗按照中獸醫辨證擬定的5個復方中藥，都有抑菌和調節胃腸運動的功效，結果顯示方5效果較好，分析其原因可能是方5中黃連和三顆針含有小檗堿和黃連素，能加大對細菌的抑殺作用，同時輔以烏梅，其富含多種營養物質，滋養動物機體，提高免疫功能，增強止痢效果。

動物機體在長期的瀉痢之后，胃腸道將會并發炎癥，在治療動物腹瀉的同時需要改善胃腸道功能，降低胃腸蠕動能力，進行消炎處理。炎癥是機體組織對各種致炎因子引起損傷所發生的防御反應，炎癥過程中血管內皮細胞自身的損傷引起組織液和部分血液外滲等而致瀉，發生的越嚴重，腹瀉也越嚴重，說明止瀉與抗炎是密不可分的，要得到較好的止瀉效果必須進行抗炎［8-9］。試驗中方5組中的小鼠在灌服中藥后能顯著抑制小鼠耳廓腫脹，說明該藥有一定的抗炎作用；且小腸內碳末推進距離縮短，能有效地減慢小腸的蠕動能力，證實該藥有較好的止瀉效果。

5 結論

5個復方中藥體外對雞白痢沙門菌和大腸桿菌均有一定的抑制作用，其中方5效果較好，且能改善番瀉葉所致小腹瀉鼠改善小腸蠕動，增強抗炎效果。

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S865.1+3

B

0529-6005（2015）12-0062-03

2015-06-16

農業部公益性行業（農業）科研專項（201303040-06）

張邑帆（1982-），男，獸醫師，碩士，從事中獸藥藥理毒理學研究，E-mail：zmxmz0817@163.com

曹國文，E-mail：caoguowen1957@126.com