牛大力多糖在小鼠模型抗肝炎作用的試驗觀察

曹志方，郝赫宣，楊雨輝，陳 濤，姜亞磊，王金花

（1.海南大學農學院，海南海口570228；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室，海南海口570228）

牛大力多糖在小鼠模型抗肝炎作用的試驗觀察

曹志方1，郝赫宣1，楊雨輝2，陳 濤1，姜亞磊1，王金花1

（1.海南大學農學院，海南海口570228；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室，海南海口570228）

為了確定牛大力中多糖成分是否具有保肝、抗炎的作用。本試驗采用小鼠急性肝損傷模型對牛大力多糖的保肝、抗炎作用進行研究。結果顯示，牛大力多糖對肝損傷引起的肝臟腫大有明顯地抑制效果，抑制率高達72.18%；肝組織切片也顯示其對肝臟細胞和結構的完整性具有保護作用。牛大力多糖還能降低小鼠血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶（P＜0.01）的活性，明顯抑制丙二醛（P＜0.05）的生成，同時降低炎性介質關鍵酶環氧化酶-2（P＜0.05）的表達，從而抑制炎性介質的合成。因此認為牛大力多糖具有保肝、抗炎的作用，具有較好的開發應用前景。

牛大力多糖；保肝；抗炎

牛大力，別名山蓮藕、大力薯等。為豆科崖豆藤屬植物，美麗崖豆藤的干燥根莖。牛大力入藥歷史悠久，臨床上己證實其對諸多慢性疾病有治療作用，主治腰痛、腎虛帶下、風濕性關節炎、腰肌勞損、慢性肝炎、病后體虛等，表明牛大力在治療肝炎、抗血管性炎癥、抗氧化等方面具有很大的潛力［1-2］。

近年來關于牛大力多糖的研究多集中在抗炎和提高免疫力等方面，如鄭元升等［3］利用小鼠急性炎癥模型證明牛大力多糖能夠明顯減輕二甲苯對小鼠耳廓造成的局部炎癥，具有較好的抗炎作用。石焱等［4］通過實驗證明，牛大力多糖可增強吞噬細胞的吞噬功能，增加抗體形成細胞的數量，并能促進淋巴細胞轉化。但是關于牛大力多糖對肝臟保護與肝損傷后炎癥介質的產生，及相關的酶表達情況的研究卻未見報道。為了確定牛大力多糖的抗肝炎作用，特進行了如下內容的研究，旨在為開發該藥提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 受試動物昆明系小鼠，SPF級，體重（20±2 g），購自長沙市天勤生物技術有限公司，許可證號SCXK（湘）2014-0011。

1.2 受試藥物牛大力多糖凍干粉［5］，由海南大學藥理學研究室提供，生藥材，購自海南隆安源大藥堂，經海南大學農學院王金花副教授鑒定為豆科崖豆藤屬美麗崖豆藤的干燥根莖。

1.3 藥品與試劑聯苯雙酯滴丸，廣州白云山星群藥業股份有限公司，批號：KF40034；四氯化碳（CCl4），國產分析純；丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙二醛（MDA）、小鼠環氧化酶（COX-2）試劑盒，均為國產ELISA試劑盒。

1.4 牛大力多糖對小鼠藥物性肝損傷的保護作用

1.4.1 動物分組及給藥取SPF級KM小鼠60只，體重在20～22 g范圍內，適應性喂養3 d后，隨機分為6組，雌雄各半。分別為空白對照組，模型對照組，西藥對照組，牛大力多糖高劑量（0.2 g/kg體重）、中劑量（0.1 g/kg體重）、低劑量（0.05 g/kg體重）給藥組。西藥對照組給予聯苯雙酯，給藥劑量為45mg/kg體重，空白對照組和模型對照組給予等容積蒸餾水，連續給藥8 d。

1.4.2 CCl4誘導小鼠急性肝損傷動物模型的建立各組小鼠于第4天、第8天給藥1 h后，除空白對照組腹腔注射等量生理鹽水外，其余各組小鼠均腹腔注射1%CCl4的油溶液10 mL/kg體重。禁食不禁水6 h后，稱量小鼠體重，摘眼球取血，3 000 r/min離心10 min分離血清。同時斷頸處死小鼠，取肝臟蒸餾水沖洗血跡、稱重，并用10%甲醛溶液保存。

1.4.3 組織觀察切片制作及生化指標檢測按肝臟重量/體重（g/100 g）測定肝臟指數。取各組小鼠肝臟制作組織切片，并觀察結果。利用小鼠ELISA試劑盒檢測血清中相關生化指標。

1.5 數據分析采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析。用單因素方差分析進行顯著性檢驗。組間差異顯著性采用單因素方差分析中的LSD方法進行多重比較檢驗。

2 結果

2.1 牛大力總多糖對CCl4所致急性肝損傷小鼠肝臟指數的影響模型組肝臟指數極明顯高于空白對照組（P＜0.01），肝臟明顯腫大，增長比例達到13.17%，說明急性肝損傷模型制作成功，肝損傷效果明顯；而灌胃牛大力多糖的小鼠肝臟指數較低，多糖對肝損傷引起的肝臟腫大有明顯地抑制效果（P＜0.05），抑制率高達72.18%。

2.2 肝損傷小鼠肝臟的組織切片觀察觀察結果發現（見中插彩版圖1），空白對照組小鼠的肝臟細胞正常，血管及周圍結構緊密；而模型組肝組織結構絮亂，毛細血管壁凹凸不平、斷裂，血管周圍結構松散，肝細胞出現明顯腫大，甚至出現大量細胞破裂的情況。而給予一定劑量牛大力多糖的小鼠，可以看出毛細血管壁呈光滑，血管周圍結構完整，肝細胞腫大較少，大部分細胞結構完整。說明牛大力多糖對肝臟細胞和組織結構的完整性具有保護作用。

2.3 牛大力總多糖對CCl4所致急性肝損傷小鼠血清ALT/AST表達的影響與空白對照組比較，模型對照組小鼠血清中ALT/AST表達量極明顯升高（P＜0.01）；陽性對照組ALT/AST的水平極顯著降低（P＜0.01），牛大力各劑量組均能降低血清中ALT/ AST的水平；與模型對照組比較，牛大力高、中劑量能明顯降低ALT/AST水平（P＜0.05）（表2）。

表1 牛大力總多糖對CCl4所致急性肝損傷小鼠肝臟指數的影（-X±SD，n=10）

表2 牛大力總多糖對CCl4所致急性肝損傷ALT/AST表達的影響（-X±SD，n=10）

2.4 牛大力總多糖對小鼠血清中MDA及COX-2表達的影響與空白對照組相比較，模型對照組小鼠血清的MDA和COX-2表達量極明顯升高（P＜0.01）；而西藥聯苯雙酯能極顯著降低小鼠的MDA和COX-2表達水平（P＜0.01）；牛大力高、中劑量組均能明顯降低MDA水平（P＜0.05）和抑制COX-2的表達（P＜0.01）。結果表明，牛大力多糖能對抗CCl4所致的急性肝損傷（表3）。

表3 牛大力總多糖對CCl4所致急性肝損傷小鼠血清中MDA生成和COX-2表達的影響（-X±SD，n=10）

3 小結與討論

根據目前的研究顯示，一般認為藥物性肝炎引起的肝損傷與病毒性肝炎引起的肝損傷癥狀相似［6-7］。肝損傷早起癥狀以肝細胞變性壞死、炎性細胞浸潤、纖維膠原大量合成堆積為主［8］。肝毒性物質能產生不同類型的中介物質，從而誘導肝細胞發生炎性反應，受損的肝細胞釋放炎癥細胞因子，細胞因子又進而刺激炎性介質合成的關鍵酶COX-2的表達增加，生成大量的PGs［9］，因而抗炎藥的作用往往是通過抑制COX-2實現的。關于誘導物質CCl4導致肝損傷的機制，認為肝細胞膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化，從而造成細胞器損傷［10］。MDA是脂質過氧化的代謝產物，過氧化損傷肝細胞膜的結構和功能，使膜通透性升高，導致細胞腫脹壞死，MDA釋放到體液中，繼而使體液中MDA大量增加［11］，進一步加劇膜的損傷。因此，通過保護肝細胞及細胞膜的完整性，防止氧化應激的發生，是抑制毒性物質對肝臟損傷的前提和關鍵。

綜上結果說明，牛大力多糖對小鼠急性肝損傷的抑制作用主要體現在對肝細胞完整性的保護，防止肝細胞膜過氧化的發生以及降低COX-2的水平起抗炎作用；而維持肝細胞的完整程度又進一步影響了細胞釋放到血清中MDA的含量及降低ALT/AST的活性，進一步佐證了多糖對肝臟的保護能力。因此認為牛大力多糖具有抗肝炎作用，具有較好地開發應用前景。

［1］黃泰康，丁志遵，趙守訓.現代本草綱目［M］.上冊北京：中國醫藥科技出版社，2001：253.

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［4］石焱，弓小雪，那婕.牛大力多糖對免疫抑制小鼠的免疫調節作用［J］.臨床軍醫雜志，2008，36（4）：530-532.

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［6］王建青.內質網應激在四氯化碳誘導小鼠急慢性肝損傷中的作用及部分機制［D］.合肥：安徽醫科大學，2012.

［7］林勝利，卓德祥，王曉紅，等.氧化損傷與內質網應激在四氯化碳致大鼠肝脂肪變性中的作用機制［J］.中國生物化學與分子生物學報，2006（05）：422-430.

［8］盧靜.小鼠肝損傷動物模型的建立及在束縛應激研究中的應用［D］.北京：中國農業大學，2013.

［9］林力.基于花生四烯酸模型和T細胞模型的抗炎中藥篩選研究［D］.北京：北京中醫藥大學，2005.

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［11］McAdam B F，Catella-Lawson F，Mardini IA，etal.Systemic bio?synthesis of prostacyclin by cyclooxygenase（COX）-2：the human pharmacology of a selective inhibitor of COX-2［J］.Proc Natl Acad SciUSA，1999，96（1）：272-277.

Study on anti-inflammation of polysaccharide of M illettia speciosa Cham pin liver usingmousemodel

CAO Zhi-fang1，HAOHe-xuan1，YANG Yu-hui2，CHEN Tao1，JIANG Ya-lei1，WANG Jin-hua1
（1.Hainan University Agricultural College，Haikou 570228，China；2.Hainan Key Lab of reproduciton and Epidemic Disease Research，Haikou 570228，China）

To determine the liver protection and anti-inflammation of polysaccharide in Millettia speciosa Champ，we used the established acute liver injurymousemodel.The results showed thatsignificant inhibitory effect on liver injury were observed，and the inhibition ratewas upto 72.18%.The changes in tissue sections also indicated protective effectof liver.The results also showed a significantly reduction of ALT and AST activity（P＜0.01），and the formation of MDA and the expression of COX-2 were signifi?cantly suppressed.These data suggest that the polysaccharide in Millettia speciosa Champhas the potential to be used for the pro?tection of liver.

polysaccharide ofMillettia speciosa Champ；liver protection；anti-inflammation

YANG Yu-hui

R 284

A

0529-6005（2015）12-0057-03

2015-06-18

海南大學中西部計劃學科重點領域建設項目（ZXBJH-XK002）；海南大學教育教學研究項目（hdjy1531）

曹志方（1989-），男，碩士生，從事中藥開發利用的研究，E-mail：990038104@qq.com

楊雨輝，E-mail：yanguniverse@sina.com