獻(xiàn)血人群人類血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性分布特點(diǎn)

徐向華

江蘇省泰州市中心血站檢驗(yàn)科,江蘇泰州 225300

人類血小板抗原（HPA)位于血小板膜糖蛋白上，這些膜糖蛋白是由遺傳基因決定的，在臨床和輸血實(shí)踐中具有重要的研究意義。血小板上有血小板特性性抗原，是血小板抗原重要抗原之一[1]。一般情況下血小板抗原可以分為兩種類型，一類是血小板抗原與其他組織或細(xì)胞共有的抗原，一類是血小板本身所特有的抗原，就是我們所說(shuō)的HPV，血小板抗原不合能夠?qū)е卵“遢斪o(wú)效、出血后呈現(xiàn)不良癥狀以及新生兒免疫性血小板減少紫癜等。傳統(tǒng)的血清學(xué)分析方法不能清晰的獲取高質(zhì)量、高特異性抗血清多多種因素的制約，影響血小板分型工作的深入發(fā)展[2]。該研究特選取200例泰州市獻(xiàn)血人群人資料進(jìn)行血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究的檢測(cè)標(biāo)本隨機(jī)選取泰州市沒有血緣關(guān)系的200例健康獻(xiàn)血者靜脈血0.5 mL（EDTA抗凝)。在進(jìn)行血小板采集的所有人的身體健康指標(biāo)必須符合《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》，單采前獻(xiàn)血者外周血PLT≥150×10 9/ L，HCT≥0.36，獻(xiàn)血過程中的間隔至少要大于1個(gè)月，在5 d內(nèi)不能服用消炎類藥品[3]。

檢測(cè)儀器選用由Promega公司生產(chǎn)的Tap DNA聚合酶；HPA1～5系統(tǒng)基因特異性引物由美國(guó)GT公司合成；凝膠圖像分析系統(tǒng)采用UVP公司提供的系統(tǒng)；PCR擴(kuò)增儀采用德國(guó)公司生產(chǎn)的產(chǎn)品；DNA提取采用德國(guó)QIAamp DNA Mini Kit[4]。

1.2 方法

1.2.1 DNA血樣提取 獻(xiàn)血人群的外周血提出方法采用Pel-freez公司的快速鹽析法進(jìn)行提取，操作方式按照說(shuō)明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.2.3 電泳 對(duì)HPA基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳處理需要配置2%的瓊脂糖凝膠，然后從HPV產(chǎn)物中取5 l 的量，將它直接點(diǎn)樣到凝膠孔中，采用0.5×TEB緩沖液，然后以10 V/cm電泳處理20 min。然后在紫外光下拍攝記錄凝膠圖像，觀察處理結(jié)果，并做好記錄工作。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

該研究中所有獻(xiàn)血人群的基因頻率按照基因計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用c2檢驗(yàn)，不同人群基因頻率分布的差異比較也采用c2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)，表示兩組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[5]。

2 結(jié)果

該研究中200名獻(xiàn)血人群HPA-1a、2a、3a、4a、5a基因頻率分別為：0.942、0.741、0.926、0.945、0.773，HPA-1b、2b、3b、4b、5b基因頻率分別為:0.058、0.286、0.084、0.045、0.227，各系統(tǒng)均呈多態(tài)性分布，ab雜合子依次為64和30例,-2bb類型4例;HPA-3和-15高度雜合,aa基因型依次為112和80例,很多獻(xiàn)血人群屬于bb基因型。見表1。

3 討論

人體血液HPA一般有染色體雙等位共顯性基因組成，其基因遺傳性一般呈多態(tài)性分布（除了3個(gè)堿基因缺失以外），其他抗原一般是由單核苷酸組成，就是醫(yī)學(xué)上所說(shuō)的單核苷酸多態(tài)性，其多態(tài)性分布一般具有某種差異[6]。另外，血小板特異性抗原具高度多態(tài)性，它的多態(tài)性是由位于血小板上的糖蛋白上的單個(gè)堿基取代而導(dǎo)致相應(yīng)氨基酸的改變而形成，血小板抗原多態(tài)性分析在疾病的防治中有著重要的指導(dǎo)意義。特發(fā)性血小板減少性紫癜是血小板減少性紫癜中的一種，也是一種常見的自身免疫性疾病，人體血液對(duì)其具有重要的治療意義[7]。

近幾年，隨著醫(yī)療技術(shù)以及微生物學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)人體血小板抗原的研究不斷 深入，促進(jìn)血小板檢測(cè)方法的進(jìn)步，目前人類已經(jīng)掌握以DAN為基礎(chǔ)的HPA基因分型方法，利用新型基因檢測(cè)方法能夠準(zhǔn)確的檢測(cè)、分析人類血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性分布的特點(diǎn)，能夠檢測(cè)出人體血液中血小板抗原1～5系統(tǒng)10個(gè)等位基因，進(jìn)而分析他們?cè)诓煌膫€(gè)體中合子表達(dá)狀態(tài)，為臨床醫(yī)學(xué)做出很大的貢獻(xiàn)。該文采用PCR-SSP方法對(duì)泰州市獻(xiàn)血人群HPA1-5系統(tǒng)進(jìn)行基因分型處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)泰州市人群中HPA1-5系統(tǒng)10個(gè)等位基因據(jù)能夠檢測(cè)到，這10個(gè)基因在不同的個(gè)體中以純合子和純雜合子狀態(tài)表達(dá)，而且HPA2-5系統(tǒng)的雜合度比較高，處理HPA4系統(tǒng)系統(tǒng)以外，其余系統(tǒng)均檢測(cè)出bb型純合子個(gè)體。從泰州市獻(xiàn)血人群的血液不配合率來(lái)看，HPA4、5系統(tǒng)的不賠率相對(duì)比較高，提示臨床上有重要的免疫學(xué)意義，在血小板的輸注中首先要警惕此類基因系統(tǒng)的血液，以免發(fā)生注射風(fēng)險(xiǎn)[8]。

應(yīng)用PCR-SSP技術(shù)對(duì)健康獻(xiàn)血者HPA1-5系統(tǒng)等位基因分型，能夠清晰的掌握部分已知血小板血型獻(xiàn)血者的資料，既可為臨床上因血小板免疫反應(yīng)導(dǎo)致的PTP、PTR等患者及需反復(fù)、多次輸血的患者提供HPA相配合的血小板，提高血小板輸注的安全、有效性，又可根據(jù)已知的HPA基因型組建HPA譜細(xì)胞系，對(duì)特異性抗體進(jìn)行鑒定等。HPA基因多態(tài)性的分子基礎(chǔ)的闡明及基因分型技術(shù)的普及，為篩選及建立已知HPA供者庫(kù)奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)為診斷、治療同種免疫血小板減少癥提供了研究手段，該資料在作為群體遺傳學(xué)資料的同時(shí)，也將有利于臨床血小板輸注治療。

該研究中200名獻(xiàn)血人群HPA1-5基因系統(tǒng)均呈多態(tài)性分布，ab雜合子依次為64和30例,-2bb4例;HPA-3和-15高度雜合,aa基因型依次為112和80例,很多獻(xiàn)血人群屬于bb基因型。其中本地區(qū)人群的HPA-1-5系統(tǒng)的不配合率為14.35%、28.94%，所以說(shuō)血小板抗原檢測(cè)在臨床上具有重要的免疫學(xué)意義，在以后的臨床輸血中要特別注意HPA5系統(tǒng)多態(tài)性到指定額血小板輸注風(fēng)險(xiǎn)。HPA-1-5是導(dǎo)致免疫性血小板減少的主要血型系統(tǒng)，而且HPA-5系統(tǒng)在5各系統(tǒng)中的雜合度最高，此類基因系統(tǒng)比較容易發(fā)生血小板免疫反應(yīng)，在臨床應(yīng)用中應(yīng)該高度重視。

表1 本地區(qū)獻(xiàn)血人群HPA-1-5基因型和等位基因頻率[n（%）]

綜上所述，該地區(qū)獻(xiàn)血人群HPA1-5系統(tǒng)基因均呈多態(tài)性分布,其中HPA-3、-2和-5的a與b基因雜合率較高。提示在臨床血液輸注過程中應(yīng)該特別注意此類血液的輸注，防止不良事件的發(fā)生。

[1] 楊蘭，梁秀云，曾江輝.廣西地區(qū)壯族瑤族人群人類血小板抗原基因的多態(tài)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013(20)：2644-2647.

[2] 張剛,曹麗群,謝毓濱,等.長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人血小板抗原(HPA1-17)基因多態(tài)性調(diào)查[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013(2):331-333.

[3] 劉群.機(jī)采血小板獻(xiàn)血不良反應(yīng)的誘因分析及護(hù)理體會(huì)[J].中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2013(4):32.

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[8] 楊芳，黃吉娥，曾小菁，等.貴州省黔東南州侗族獻(xiàn)血人群HPA-1～5多態(tài)性分析及隨機(jī)輸血不配合率研究[J].中國(guó)輸血雜志,2013(11)：1090-1093.