細胞塊石蠟切片檢查對惡性漿膜腔積液的診斷價值

李慶國

聊城市光明醫院，山東 聊城252000

細胞塊石蠟切片檢查對惡性漿膜腔積液的診斷價值

李慶國

聊城市光明醫院，山東 聊城252000

目的探討細胞塊石蠟切片檢查對惡性漿膜腔積液的診斷價值。方法對560例于2009年5月～2013年5月在本院就診的胸腔、腹腔和心包積液患者的穿刺抽取液分別采用細胞塊石蠟切片法與常規離心涂片法進行細胞學檢查，統計并分析兩種方法和兩種方法聯用對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。結果560例漿膜腔積液患者中，經手術病理、纖維支氣管鏡、胸腹腔鏡、影像引導下穿刺活檢、診斷性治療等確診為惡性腫瘤并發積液的有210例。常規離心涂片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為57.6%，特異度為98.8%；細胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為69.5%，特異度為99.4%，兩種方法敏感度比較差異具有統計學意義（P＜0.05）；兩種方法聯用對惡性漿膜腔積液的敏感度為72.3%，特異度為100%。結論在對漿膜腔的穿刺抽取液進行細胞學檢查時，細胞塊石蠟切片法要優于常規離心涂片法，兩種方法聯用可進一步提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。

惡性漿膜腔積液；高速離心機；細胞塊石蠟切片法；常規離心涂片法

漿膜腔積液是臨床多種疾病的常見并發癥，脫落細胞學檢查為鑒別良性和惡性漿膜腔積液的重要手段。傳統的離心涂片法細胞學檢查的特異性高，但由于惡性漿膜腔積液中的腫瘤細胞少且分散，其敏感性較低，易造成漏診[1]。細胞塊石蠟切片法收集的細胞數多，可明顯提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率，但其脫水、浸蠟等過程中會有固縮和人為損害，導致有時細胞形態不如涂片法清晰，從而造成假陰性或假陽性[2]。筆者應用細胞塊石蠟切片法與常規離心涂片法對漿膜腔積液進行細胞學檢查，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2009年5月～2013年5月在本院通過影像診斷和穿刺確診的560例漿膜腔積液患者，其中胸腔積液322例，腹腔積液150例，心包積液56例，多漿膜腔積液32例（指積液2處或2處以上）；男性341例，女219例，年齡13～85歲，中位年齡49歲；積液為黃色392例，血性147例，乳糜性21例。

1.2 檢查方法

將每例患者漿膜腔的穿刺抽取液分為2份，1份經常規離心涂片法制成涂片，另1份則經細胞塊石蠟切片法制成切片。由兩位副主任醫師采用雙盲法通過會診作出診斷報告。

1.2.1 常規離心涂片制作方法

常規離心涂片制作方法如下：取新鮮漿膜腔積液標本10～20 mL，經高速離心機以2000 r/min的轉速離心5 min后取沉渣，用推片法制片5～7張／例，自然干燥后用瑞特-姬姆薩雙染色法進行染色。血性混濁標本離心后取有核細胞層制片。對可疑癌細胞涂片要縮短染色時間。

1.2.2 細胞塊石蠟切片制作方法

細胞塊石蠟切片制作方法如下：漿膜腔積液標本室溫靜置10～20 min，用尖底離心管取容器底層標本50 mL，經高速離心機以5000 r/min的轉速離心5 min，棄上清留沉淀物；在離心管中加10%中性甲醛5～10 mL，與沉淀物混勻，室溫固定處理1 h后離心棄上清；再加入10%中性甲醛5～10 mL，混勻后補充固定1 h后離心，棄上清，用濾紙包好沉淀物（若漿膜腔積液中沉淀物較少時，可加入75%的乙醇5～10 mL，然后靜置30 min，使沉淀物凝固硬化）；用吸管吸取細胞塊到顯微鏡擦鏡紙上，包好后放入自動脫水機中進行組織處理，制成石蠟細胞塊，再將細胞塊切成厚度為3 μm的切片，60 ℃烘干1 h。

1.2.3 閱片方法

閱片方法如下：將離心涂片及細胞切片置于顯微鏡下觀察，若見到多個具有惡性特征的細胞則診斷為陽性，未見異型細胞則診斷為陰性，查見異型細胞但不足以診斷為惡性的則要結合臨床進行綜合診斷。

1.3 統計學方法

全部數據經核查無誤后采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，兩組計數資料的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 腫瘤來源分析

560例漿膜腔積液標本中經手術病理、纖維支氣管鏡、胸腔鏡、胃鏡、穿刺活檢及痰檢等證實為惡性積液的有210例，其中141例為惡性胸腔積液，來源于原發性肺癌100例（70.9%），乳腺癌15例（10.6%），食道癌11例（7.8%），惡性淋巴瘤7例（4.9%），惡性間皮瘤4例（2.8%），胸腺癌4例（2.8%）；57例為惡性腹腔積液，來源于消化道腫瘤25例（43.8%），卵巢癌14例（24.5%），肝癌8例（14.0%），腎癌3例 （5.3%）， 惡性間皮瘤3例 （5.3%）， 惡性淋巴瘤3例（5.3%），原發于大網膜腺癌1例（1.7%）；12例為惡性心包腔積液，來源于肺癌7例（58.3%），胸腺癌2例（16.7%），食道癌3例（25.0%）。

2.2 常規離心涂片法與細胞塊石蠟切片法的診斷結果比較

常規離心涂片法與細胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度分別為57.6%和69.5%，差異有統計學意義（P＜0.05），特異度分別為98.8%和99.4%，差異無統計學意義（P＞0.05）；兩種方法聯用對惡性漿膜腔積液的敏感度為72.3%，特異度為100%。結果見表1～3。

表1 常規離心涂片法的診斷結果（例）

表2 細胞塊石蠟切片法的診斷結果（例）

表3 兩種方法聯用的診斷結果（例）

2.3 常規離心涂片及細胞切片的鏡下表現

常規離心涂片中的細胞數量少，呈分散或堆積重疊樣，背景雜質較多，但細胞排列良好，對于判斷腫瘤細胞的來源有較高的價值（圖1）。細胞塊石蠟切片中的細胞數量多，呈大量集中樣，有核細胞密度高，細胞結構完整，圖像背景清晰，便于觀察分析（圖2）。

圖1 離心涂片鏡下表現

圖2 細胞塊石蠟切片鏡下表現

3 討論

惡性漿膜腔積液常由癌細胞刺激、癌栓阻塞淋巴管和血管致組織液回流障礙等引起，人體任何系統的惡性腫瘤都可能發生漿膜腔轉移，其中以肺癌、胃腸道癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性淋巴瘤最為常見。漿膜腔積液內各種細胞形態在以往文獻中描述較多[3-4]，應用漿膜腔穿刺抽取液查找癌細胞不僅能夠快速進行診斷，還能夠避免腹腔鏡、支氣管鏡、胃鏡、穿刺活檢等操作對患者造成的不必要的損傷。目前多數醫院采用常規離心涂片法來檢查癌細胞，具有快速、簡便、易行的優點，缺點主要是檢出率較低，文獻[5-6]報道其檢出率約為40%～50%，主要原因在于：① 常規涂片法只能留取10 mL樣本離心，收集的細胞數量少，容易造成假陰性；② 涂片常存在厚薄不均的現象，涂片太厚可導致細胞互相重疊而影響觀察；涂片太薄時，細胞數又太少，只能觀察到少數細胞及單個細胞的形態變化，難以做出判斷；③ 細胞來源多、成分復雜，細胞漿角化傾向不明顯，常遇到增生的間皮細胞和腺癌細胞難以鑒別的問題。

漿膜腔積液離心沉淀物細胞塊石蠟切片法是較好的細胞學檢查技術，有研究表明胸腹腔積液標本的石蠟切片的平均細胞數量高于涂片法[7]。本研究結果顯示，細胞塊石蠟切片厚薄均勻，其中的細胞結構完整，圖像背景清晰，便于觀察分析；細胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的敏感度為69.5%，高于常規離心涂片法的57.6%（P＜0.05）；且蠟塊可反復、間斷切片，并可根據需要采用敏感抗體進行免疫組織化學染色，以明確標記出間皮細胞和腫瘤細胞，起到鑒別診斷和鑒別腫瘤來源的作用[8-9]。

盡管細胞塊石蠟切片法對惡性漿膜腔積液的檢出率高于常規涂片法，但是本組210例惡性漿膜腔積液中，有4例由常規離心涂片法檢出而細胞塊石蠟切片法卻呈假陰性，考慮原因為：常規離心涂片中的細胞排列良好，近似原細胞的體積和形狀，更能反映出細胞的染色性、顆粒性和真實性，在一定程度上也能反映出器官的功能狀態和反應性變化如增生、炎性反應等，易辨認良惡性細胞；而細胞塊石蠟切片中的細胞較為集中，雖便于觀察各種細胞的特殊排列，但因其脫水、浸蠟、切片等過程中有固縮和人為損害，有時會出現細胞形態不如涂片清晰從而造成假陰性的情況。因此，臨床上應聯用常規離心涂片法和細胞塊石蠟切片法進行細胞學檢查。本研究結果顯示，兩種方法聯用對惡性漿膜腔積液的檢出率達72.3%，顯著高于常規離心涂片法及細胞塊石蠟切片法單獨應用時的檢出率，且無假陽性情況出現。

檢驗科對如何留取漿膜腔積液也應該和臨床穿刺醫生進一步溝通，本研究中注意事項如下：① 大量積液患者行穿刺抽液時，開始抽取的積液較為清澈，離心后獲得的細胞塊可能較小或不宜制成蠟塊，因此應對最后抽取的較為渾濁的積液進行離心，以獲得較為理想的細胞蠟塊；② 穿刺抽液最好在超聲監視下完成，以實時觀察抽液過程，避免并發癥的發生；③ 對血性及乳糜性積液，應對其中的紅細胞進行脫色處理。

綜上所述，在對漿膜腔的穿刺抽取液進行細胞學檢查時，細胞塊石蠟切片法要優于常規離心涂片法，兩種方法聯用可進一步提高對惡性漿膜腔積液的診斷符合率。

[1] 王小智,丁毅鵬．惡性胸腔積液的細胞學檢查[J]．國外醫學呼吸系統分冊,2005,2(25):185-186．

[2] 羅慶豐,謝梅,高紋．石蠟切片及免疫組織化學技術在胸腹水細胞診斷中的應用[J]．實用癌癥雜志,2007,7(22):363-364．

[3] 馬正中,闞秀,劉樹范．細胞病理學診斷[M]．鄭州:河南科學技術出版社,2000:229-255．

[4] 曹躍華,楊敏,陳隆文,等．細胞病理學診斷圖譜及實驗技術[M]．北京:北京科學技術出版社,2009:109-120．

[5] 郭志俊,彭桂香,潘乃梁．胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規涂片法的對比[J]．臨床與實驗病理學雜志,2002, 18(4):437．

[6] Shield PW,Koivurirme K．The value of ealretinin and eytokeratin 5/6 as markers for mesothelioma in cell block preparations of geffusions[J]．Cytopathology,2008,19:218-223．

[7] 李志忠,劉錫范,李新香．胸腔積液細胞學檢查方法的對比研究[J]．中華全科醫師雜志,2004,3(1):76．

[8] 智連藝．367例胸腹腔積液細胞學檢查和瓊脂石蠟雙重包埋切片對照分析[J]．遼寧醫學院學報,2007,28(2):54．

[9] 毛瑛玉,楊敏,劉冬戈,等．細胞塊切片免疫細胞化學染色在漿膜腔積液細胞學診斷中的應用[J]．中華病理學雜志,2009, 38(8):547-550．

E ff ectiveness of Cellblock Para ffi n-Imbedded Sections in Diagnosis of Malignant Serous Cavity E ff usion

LI Qing-guo
Liaocheng Guangming Hospital, Liaocheng Shandong 252000, China

ObjectiveTo discuss the e ff ectiveness of cellblock paraffin-imbedded sections in diagnosis of malignant serous cavity e ff usion.MethodsA total of 560 patients were selected among all the patients with pleural, ascites and pericardial e ff usion who had been treated in the hospital from May 2009 to May 2013. The cellblock paraffin-imbedded sections and the cell centrifugation smear had been performed to make cytological examinations of pleural, ascites and pericardial effusion for these patients. The accuracy rates of two methods and combined use of two methods in diagnosis of malignant serous cavity effusion were analyzed respectively.ResultsAmong 560 cases, 210 were identified with malignant serous cavity e ff usion through the surgical pathology, fi beroptic bronchoscopy, laparoscope, imagingguided needle biopsy and diagnostic treatment. The sensibility and speci fi city of the cell centrifugation smear were 57.6% and 98.8% in comparison with the cellblock paraffin-imbedded sections’ 69.5% and 99.4% respectively. There were statistically signi fi cant di ff erences (P＜0.05) between two methods. The sensibility and speci fi city of the combined use of the two methods were 72.3% and 100%.ConclusionCellblock paraffin-imbedded sections demonstrated its superiority over the cell centrifugation smear in cytological examinations of serous cavity e ff usion. Combined use of two methods can further improve the accuracy rate in diagnosis of serous cavity e ff usion.

malignant serous cavity effusion; high-speed centrifuge; cellblock paraffin-imbedded sections; cell centrifugation smear

TH776+.2

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2015.03.034

1674-1633(2015)03-0111-03

2014-10-17

作者郵箱：15339949026@163．com