白藜蘆醇對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用

李國偉

(太康縣人民醫院，河南 太康 475400)

白藜蘆醇對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用

李國偉

(太康縣人民醫院，河南 太康 475400)

目的：探討白藜蘆醇對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用和機制。方法：將64只健康雄性Wistar大鼠隨機均分為假手術組、模型對照組、白藜蘆醇40 μg/g組和白藜蘆醇20 μg/g組4組，每組16只。白藜蘆醇40，20 μg/g組大鼠于造模前30 min腹腔注射相應質量分數的白藜蘆醇溶液，假手術組和模型對照組大鼠僅予以同體積的8.5 g/L NaCl溶液，連用7 d。造模結束后，采用生物化學法測定各組大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及腎組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，采用TUNEL法測定腎組織的細胞凋亡狀況。結果：白藜蘆醇40，20 μg/g組血清Cr、BUN水平低于模型對照組(P<0.05)；其腎組織SOD、GSH-Px水平高于模型對照組，而MDA水平低于模型對照組(P<0.05)；其腎組織凋亡指數低于模型對照組(P<0.05)。白藜蘆醇兩劑量組間的血清Cr、BUN水平，腎組織SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指數對比，差別均有統計學意義(P<0.05)。結論：白藜蘆醇能夠通過抗氧化和抗凋亡作用保護大鼠腎缺血再灌注損傷。

腎缺血再灌注損傷/藥物作用；白藜蘆醇/藥效學；肌酐；尿素氮；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過氧化物酶；丙二醛；凋亡指數

腎缺血再灌注損傷多見于腎移植、腎臟供血動脈損傷、腎臟挫傷等病理生理過程中，自由基過剩、鈣超載、細胞凋亡、炎癥反應等均參與了其發生、發展過程[1-2]。白藜蘆醇是一種多酚類化合物，提取自桑椹、虎杖、葡萄等，具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤等作用，已被證實能夠保護大腦、心臟、肝臟、腎臟等器官或組織的缺血再灌注損傷[3-4]。本研究觀察了白藜蘆醇對大鼠腎缺血再灌注模型血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，腎組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，以及腎臟細胞凋亡指數的影響，探討其對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用和機制。

1 材料與方法

1.1 動 物

健康雄性Wistar大鼠64只，6月齡，體質量(350±37)g，由河南省實驗動物中心提供，質量合格證號：SCXK(豫)2013-0001。

1.2 藥品、試劑與儀器

白藜蘆醇，純度≥98%，西安天一生物技術有限公司產品，批號130712；臨用前以8.5 g/L NaCl溶液配制成質量分數為4，2 g/L的白藜蘆醇溶液，然后根據大鼠體質量按10 μL/g給藥。血清Cr、BUN試劑盒，購自上海申索佑福醫學診斷用品有限公司，批號依次是130824、130812；SOD、GSH-Px、MDA、考馬斯亮蘭蛋白試劑盒，購自南京建成生物工程研究所，批號依次是20130817，20130815，20130807，20130820；TUNEL試劑盒，美國Roche公司產品，批號13211142483。C8000全自動生化分析儀，美國Abbott Laboratories公司產品；721型分光光度計，上海第三分析儀器廠產品。

1.3 動物分組、用藥與模型的建立

將64只大鼠隨機分為假手術組、模型對照組、白藜蘆醇40 μg/g組和白藜蘆醇20 μg/g組4組，每組16只。白藜蘆醇40 μg/g組、白藜蘆醇20 μg/g組大鼠于造模前30 min腹腔注射相應質量分數的白藜蘆醇溶液，假手術組和模型對照組大鼠予以等體積質量分數為8.5 g/L NaCl溶液，連用7 d。大鼠腎缺血再灌注模型的建立：造模前禁食、禁水12 h，腹腔注射10 g/L 戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)麻醉，常規術前準備，腹腔正中切口，切除左腎以避免健側代償的發生，游離右腎動、靜脈并夾閉，缺血1 h并再灌注4 h。假手術組僅切除左腎和游離右腎動、靜脈，而不夾閉。

1.4 檢測指標

1.4.1 血清Cr、BUN

造模結束時，采集每組中8只大鼠的靜脈血5 mL，4 ℃ 3 500 r/min離心10 min，測定血清Cr、BUN。

1.4.2 腎組織SOD、GSH-Px和MDA

將采集完靜脈血的大鼠處死，取右側腎臟，稱取100 mg腎皮質，添加8.5 g/L NaCl溶液，制成勻漿，4 ℃ 3 500 r/min離心10 min，取上清液，測定SOD、GSH-Px和MDA，并用考馬斯亮蘭法測定總蛋白檢測。

1.4.3 腎臟細胞凋亡指數

將各組剩余的8只大鼠處死，取右側腎臟，切取合適大小的組織塊，經40 g/L多聚甲醛固定，制成蠟塊，4 μm厚度切片，進行TUNEL染色，計算凋亡指數。陽性結果判斷：TUNEL染色后，正常腎細胞的細胞核呈藍色；細胞膜明顯皺縮，細胞核呈棕黃色，且未見炎癥反應，判定為陽性。高倍鏡(400倍)下計數凋亡細胞及總細胞數，并選擇5個視野取其平均值，其中凋亡指數=(總凋亡細胞數/總觀察細胞數)×100%。

1.5 統計學方法

2 結 果

2.1 各組血清Cr、BUN水平對比

見表1。

組 別Cr/(μmol·L-1)BUN/(μmol·L-1)假手術組37.24±5.84*9.96±1.38*模型對照組180.43±28.5985.23±10.80白藜蘆醇40μg/g組89.22±17.61*32.08±5.76*白藜蘆醇20μg/g組110.27±20.39*#40.18±8.33*#F值257.42589.241P值<0.001<0.001

注：與模型對照組對比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 μg/g組對比，#P<0.05。

2.2 各組腎組織SOD、GSH-Px和MDA水平對比

見表2。

組 別SOD/(U·mgport-1)GSH-Px/(U·mgport-1)MDA/(nmol·mgport-1)假手術組215.69±33.21*189.45±19.67*2.16±0.33*模型對照組80.07±15.6170.20±11.329.62±1.54白藜蘆醇40μg/g組142.66±20.54*121.78±17.60*4.29±1.18*白藜蘆醇20μg/g組117.35±17.03*#100.29±15.25*#6.89±1.42*#F值279.447450.61333.743P值<0.001<0.001<0.001

注：與模型對照組對比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 μg/g組對比，#P<0.05。

2.3 各組腎臟細胞凋亡指數對比

見表3。

組 別凋亡指數/%假手術組6.22±1.58*模型對照組41.64±7.22白藜蘆醇40μg/g組19.79±5.37*白藜蘆醇20μg/g組26.90±6.73*#F值75.005P值<0.001

注：與模型對照組對比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 mg/kg組對比，#P<0.05。

3 討 論

本研究從自由基及細胞凋亡兩個方面觀察白藜蘆醇對腎缺血再灌注損傷的影響，在所選指標中，Cr、BUN用于腎臟損傷的嚴重程度評估，SOD、GSH-Px和MDA用于判斷機體清除自由基能力及過氧化程度，凋亡指數用于評估腎臟組織細胞凋亡的發生情況。有研究[3,5]顯示：白藜蘆醇對缺血再灌注損傷的主要保護機制是提高機體自由基清除酶的活性、減輕機體的炎癥反應、阻止細胞凋亡的發生發展、改善缺血再灌注部位的微循環狀態、抗凝作用，減輕鈣超載現象，以及減輕線粒體的破壞程度。本文結果顯示：模型對照組血清Cr、BUN水平低于假手術組(P<0.05)，提示造模成功；白藜蘆醇40，20 μg/g組血清Cr、BUN水平低于模型對照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇能夠減輕腎缺血再灌注損傷損傷；其腎組織SOD、GSH-Px水平高于模型對照組，而MDA水平低于模型對照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇對腎缺血再灌注損傷組織具有抗氧化作用；其腎組織凋亡指數低于模型對照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇具有抗凋亡作用。白藜蘆醇兩劑量組血清Cr、BUN水平，腎組織SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指數對比，差別均有統計學意義(P<0.05)，提示白藜蘆醇的這些作用可能具有劑量依賴性，在一定范圍內劑量越高，效果越明顯。本研究表明：白藜蘆醇能夠通過抗氧化和抗凋亡作用來保護大鼠腎缺血再灌注損傷。

[1]傅耀文，張文嵐，薛立娟.缺血再灌注對腎細胞內鈣水平和細胞凋亡的影響[J].中華泌尿外科雜志,2004,25(12):834-837.

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[3]徐冰，林煥冰，王茜,等.白藜蘆醇苷對腦缺血再灌注模型大鼠的保護作用[J].中國藥房,2013,24(43):4040-4043.

[4]戰仕花，王蘋，尹萬忠.白藜蘆醇對喉癌Hep-2細胞順鉑敏感性的增強作用及其機制[J].吉林大學學報：醫學版,2015,41(2):282-286.

[5]劉輝.白藜蘆醇對大鼠脊髓缺血再灌注損傷組織的保護作用[J].中國實用神經疾病雜志,2014,17(19):99-100.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0053-03 ·實驗研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.27

2015-04-22；

2015-05-06