宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白的表達及意義

班振英，曾憲旭，張威，黨秋紅，張歡歡，杜艷敏(鄭州大學第三附屬醫院，鄭州450052)

宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白的表達及意義

班振英，曾憲旭，張威，黨秋紅，張歡歡，杜艷敏
(鄭州大學第三附屬醫院，鄭州450052)

摘要:目的觀察畸胎瘤衍生生長因子(Cripto-1)在宮頸鱗癌組織中的表達變化，探討其在腫瘤發生、發展過程中的作用。方法采用免疫組化法檢測60例宮頸鱗癌組織、60例宮頸上皮內瘤變組織及24例正常宮頸組織中Cripto-1蛋白的表達，并分析宮頸癌組織中Cripto-1蛋白表達與臨床病理參數及上皮-間質轉化標記物(N-鈣黏蛋白、波形蛋白、E-鈣黏蛋白)的相關性。結果正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變組織、宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率逐漸升高，且三者比較差異均有統計學意義(P均＜0.05)。宮頸鱗癌不同臨床分期及有無淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白表達陽性率比較均有統計學差異(P均＜0.05) ;宮頸鱗癌患者Cripto-1蛋白表達陽性與N-鈣黏蛋白、波形蛋白表達均呈正相關(r分別為0.561、0.328，P均＜0.05)，與E-鈣黏蛋白表達呈負相關(r=－0.468，P ＜0.05)。結論Cripto-1蛋白表達與宮頸鱗癌的發生、發展密切相關，通過上調Cripto-1蛋白表達調控上皮-間質轉化以促進腫瘤的侵襲、轉移。

關鍵詞:宮頸腫瘤;畸胎瘤衍生生長因子;上皮-間質轉化

Cripto-1基因又稱畸胎瘤衍生生長因子，是表皮生長因子家族成員之一，其編碼的Cripto-1蛋白在早期胚胎發生過程中起重要作用。Cripto-1基因作為多種腫瘤的癌基因生長因子，可促進腫瘤增殖、遷移，誘導上皮-間質轉化(EMT)［1］。EMT是失去上皮細胞極性、細胞與細胞接觸能力以及重塑細胞骨架的過程，其特征是失去上皮細胞的標志如E-鈣黏蛋白(E-cadherin)，而獲得間質細胞的標志如N-鈣黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)等，EMT在腫瘤發生、發展過程中發揮重要作用［2］。2012年1月～2014年6月，本研究對宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白表達進行檢測，以探討Cripto-1在宮頸鱗癌發生、發展過程中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取鄭州大學第三附屬醫院切除的病理學資料完整的存檔蠟塊標本144例，均經病理學檢查確診。①宮頸鱗癌組織60例，患者年齡32～65(47.14±6.25)歲，均為初治病例，術前均未接受過放療、化療或內分泌等輔助治療;根據國際婦產科聯盟(FIGO 2009)臨床分期標準分期，Ⅰ～Ⅱa期38例、Ⅱb期22例;根據2003年國際婦科病理學會組織學分級標準分級，高或中度分化(組織學Ⅰ、Ⅱ級) 37例，低度分化或未分化(組織學Ⅲ級) 23例;有淋巴結轉移25例，無淋巴結轉移35例。②宮頸上皮內瘤變(CIN)組織60例，患者年齡21～59(42.38±9.62)歲。③因子宮肌瘤切除的正常宮頸組織24例，患者年齡26～52(38.45±4.32)歲。三類患者年齡比較無統計學差異。

1.2檢測方法采用免疫組化SP法對不同宮頸組織中Cripto-1蛋白及宮頸鱗癌組織中E-cadherin、N-cadherin、vimentin進行檢測。Cripto-1多克隆抗體購自美國Santa cruz公司，E-cadherin、N-cadherin、vimentin單抗及免疫組化SP試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發公司。所有組織蠟塊每例連續切片4張(厚4 μm)，行常規HE染色及免疫組化SP法染色，嚴格按照說明書進行操作。隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數不少于200個細胞，按陽性細胞所占百分比及著色深淺進行結果判定。分別由兩位病理科醫師進行評分，取其平均值。著色強度:無色計0分、淺黃色計1分、黃色及更深顏色計2分，陽性細胞百分比≤50% 計0分、51%～75%計1分、＞75%計2分，兩項得分相乘≥2為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計數資料以百分比表示，比較采用χ2檢驗;不同蛋白表達的相關性采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同宮頸組織中Cripto-1蛋白的表達Cripto-1蛋白陽性著色主要位于上皮細胞胞質，可見少量胞膜著色。正常宮頸組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率分別為8.3% (2/24)、33.3% (20/60)、60.0% (36/60)，三者間Cripto-1蛋白陽性表達率比較差異均有統計學意義(P均＜0.05)。

2.2宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率與臨床病理參數的關系組織學Ⅰ、Ⅱ級和組織學Ⅲ級患者Cripto-1蛋白陽性表達率分別為54.1%(20/37)和69.6%(16/23)，不同組織學分級患者Cripto-1蛋白陽性表達率比較無統計學差異(P＞0.05)。Ⅰ～Ⅱa期患者Cripto-1蛋白陽性表達率為50.0% (19/38)，Ⅱb期患者Cripto-1蛋白陽性表達率為77.3%(17/22) ;有淋巴結轉移的患者Cripto-1蛋白陽性表達率為80.0% (20/25)，不伴有淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白陽性表達率為45.7% (16/35)。不同臨床分期及有無淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白陽性表達率比較有統計學差異(P均＜0.05)。

2.3宮頸鱗癌組織Cripto-1蛋白與E-cadherin、N-cadherin、vimentin表達的相關性E-cadherin、N-cadherin、vimentin陽性著色分別位于細胞膜、細胞膜和細胞質，其陽性表達率分別為55.0% (33/60)、65.0% (39/60)、31.7% (19/60)。Cripto-1蛋白表達與N-cadherin、vimentin表達呈正相關(r分別為0.561、0.328，P均＜0.05)，與E-cadherin表達呈負相關(r=－0.468，P＜0.05)。

3　討論

多項研究發現，Cripto-1蛋白在惡性腫瘤(胃癌、結腸癌、肺癌、乳腺癌、皮膚黑色素瘤及口腔鱗狀細胞癌等)組織中過表達，而在正常組織中不表達或低表達［3～5］，Cripto-1可能是一種新的腫瘤特異性標志［6］。Bianco等［7］將人的Cripto-1基因轉染至小鼠體內使其過表達，發現小鼠轉染細胞的增殖率升高、克隆能力增強、生長失去抑制;敲除乳腺CID9系的Cripto-1基因，細胞生長率下降、凋亡率增加，提示Cripto-1可能和腫瘤的早期發生關系密切。

本研究結果顯示，Cripto-1蛋白在正常宮頸組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達呈遞增趨勢，且三者陽性表達率比較差異均有統計學意義。這與徐嶸嶸等［8］的研究結果一致。提示Cripto-1可能在宮頸鱗癌的發生過程中發揮作用，檢測其表達水平可能為宮頸癌的早期診斷提供參考。

Cripto-1不僅與腫瘤的發生有關，還與腫瘤的侵襲、轉移有關。Strizzi等［9］通過轉基因技術發現Cripto-1不僅能促進乳腺癌的發生，而且還誘發腫瘤細胞低表達E-cadherin，高表達纖維連接素、N-cadherin等。Cripto-1在體外鼠乳房上皮細胞和體內鼠乳房腫瘤細胞中均可通過調控EMT的發生而促進腫瘤侵襲、轉移。Zhong等［10］研究發現，Cripto-1蛋白在腫瘤細胞中高表達，而E-cadherin在腫瘤細胞中呈完全性或不完全性表達缺失;并且Cripto-1過表達及E-cadherin表達缺失均與淋巴結轉移及腫瘤TNM分期有關。提示Cripto-1可能在胃癌的侵襲、轉移中起重要作用。本研究中Cripto-1蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達與腫瘤的病理組織學分級無關，與患者臨床分期及有無淋巴結轉移有關。提示Cripto-1檢測對子宮頸病變的惡性程度及預后判斷有一定的參考價值。本研究對宮頸鱗癌組織中EMT相關標記物的表達情況進行檢測，并對Cripto-1與EMT標記物間的相關性進行分析。結果顯示，宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白表達與N-cadherin、vimentin表達呈正相關，與E-cadherin表達呈負相關。提示Cripto-1可能通過調控間質和上皮細胞標記物的表達而促進EMT的發生，從而在宮頸癌的侵襲、轉移過程中發揮重要作用。

綜上所述，Cripto-1在宮頸鱗癌的發生、侵襲、轉移過程中均發揮重要作用，檢測Cripto-1可為腫瘤的早期診斷及預后判斷提供參考。EMT的發生是多種基因和蛋白共同作用的復雜過程，Cripto-1可能通過調控EMT共同參與腫瘤的侵襲、轉移，但具體機制尚有待進一步研究。

參考文獻:

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［9］Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Epithelial mesenchymal transition is a characteristic of hyperplasias and tumors in mammary gland from MMTV-Cripto-1 transgenic mice［J］.J Cell Physiol，2004，201(2) : 266-276.

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Expression of Cripto-1 in cervical squamous cell carcinoma and its significance

BAN Zhen-Ying，ZENG Xian-Xu，ZHANG Wei，DANG Qiu-hong，ZHANG Huan-huan，DU Yan-min
(The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of Cripto-1 in the cervical squamous cell carcinoma and to explore the effects on the tumor occurrence and development process.Methods Immunohistochemistry was used to examine the expression levels of Cripto-1 in 60 cases of cervical squamous cell carcinoma，60 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 24 cases of normal cervical epithelia.The correlations of Cripto-1 expression with the clinical pathologic parameters and the epithelial-mesenchymal transformation (EMT) markers (N-cadherin，Vimentin and E-cadherin) were also analyzed.ResultsThe expression levels of Cripto-1 protein were gradually increased in the normal cervical epithelia，cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma; and significant difference was found among these three groups (all P＜0.05).The positive expression rate of Cripto-1 also showed significant differences in the cervical squamous cell carcinoma with or without lymph node metastasis and different clinical stages (all P＜0.05).The positive expression of Cripto-1 was positively correlated with N-cadherin and Vimentin (r=0.561，r=0.328，respectively; all P＜0.05)，while it was negatively correlated with E-cadherin (r=－0.468，P＜0.05).ConclusionThe expression of Cripto-1 is closely related to the carcinogenesis and development of cervical squamous cell carcinoma，and may promote the invasion and metastasis of carcinoma by up-regulating the Cripto-1 expression to regulate the EMT.

Key words:uterine cervical neoplasms; Cripto-1; epithelial-mesenchymal transformation

(收稿日期:2015-02-03)

作者簡介:第一班振英(1981-)，女，主治醫師，碩士，主要從事婦科腫瘤病理研究。E-mail: banzhenying@ hotmail.com

基金項目:河南省科技廳基礎研究重點項目(142300410205)。

文章編號:1002-266X(2015)21-0007-03

文獻標志碼:A

中圖分類號:R737.33

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.003