多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓單個核細胞CUL4A表達及意義

劉蕊，王英曼，張海霞，閆振宇，陳乃耀

(河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院，河北唐山063000)

多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓單個核細胞CUL4A表達及意義

劉蕊，王英曼，張海霞，閆振宇，陳乃耀

(河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院，河北唐山063000)

目的 檢測多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者骨髓單個核細胞中CUL4A mRNA表達，探討其臨床意義。方法 采用實時熒光PCR相對定量法檢測38例MM患者(MM組)和20例非血液腫瘤患者(對照組)骨髓單個核細胞CUL4A mRNA的表達情況。結果 MM組骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量較對照組增加(P<0.05)。MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量與臨床分期、血清β2-MG水平相關(P均<0.05)，與性別、年齡、免疫學分型不相關(P均>0.05)。治療有效的MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達水平低于治療無效患者(P=0.003)。結論 MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA表達上調(diào)可能是促進MM發(fā)展的因素之一，檢測CUL4A可以為MM的診斷及治療提供參考。

多發(fā)性骨髓瘤；泛素連接酶；CUL4A蛋白

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是骨髓中漿細胞惡性增殖性造血系統(tǒng)腫瘤，約占造血系統(tǒng)腫瘤的10%。近年來，MM發(fā)病率有逐年增高的趨勢，但其病因及發(fā)病機制仍未充分闡明，可能是多種因素綜合作用的結果。大量研究表明，乳腺癌、前列腺癌、肺癌及結腸癌細胞中CUL4A水平均升高，并且與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及藥物敏感性等相關。本研究檢測MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA表達，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年1月～2014年1月河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院血液科住院初治MM患者38例(MM組)，均符合WHO關于MM的診斷標準；男28例，女10例；年齡40～74歲，中位年齡55歲。選取同期門診非血液腫瘤患者20例作為對照組，男14例，女6例；年齡38～73歲，中位年齡54歲；巨幼細胞性貧血4例，缺鐵性貧血7例，溶血性貧血4例，特發(fā)性血小板減少性紫癜5例。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 骨髓單個核細胞CUL4A mRNA檢測 兩組均于治療前無菌操作下取骨髓液(肝素抗凝)約3 mL，分離單個核細胞，PBS液洗滌2次，加入Trizol 1 mL，-80 ℃保存。采用實時熒光PCR相對定量法檢測骨髓單個核細胞CUL4A mRNA，步驟參照試劑盒說明書。以對照組的平均表達量為參照量，采用2-ΔΔCt法計算MM組骨髓單個核細胞CUL4A mRNA的相對表達量。

1.2.2 治療方法 MM患者采用VAD治療方案(長春地辛1 mg+表柔比星10 mg+地塞米松40 mg，連用4 d為1個療程，每4周重復)化療，根據(jù)張之南主編的《血液病診斷及療效標準》[1]判斷4個療程后的化療效果，即完全緩解(CR)、接近完全緩解(nCR)、部分緩解(PR)、無變化(SD)、進展(PD)。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。采用中位數(shù)結合范圍表示CUL4A mRNA相對表達量，數(shù)據(jù)比較采用Mann-WhitneyU檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組骨髓單個核細胞CUL4A mRNA表達 MM組骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量為2.216(1.106～11.163)，多于對照組(1)，P<0.05。

2.2 MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量與臨床病理參數(shù)的關系 見表1。

2.3 MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量與療效的關系 38例MM患者完成4個療程化療，CR或nCR 14例、PR 12例、SD 7例、PD 5例。

26例治療有效(CR+nCR+PR)患者的骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量為1.909(1.106～2.955)，12例治療無效(SD+PD)者為4.711(1.448～11.163)，P=0.003。

3 討論

CUL4是最新發(fā)現(xiàn)的一種泛素連接酶(E3)，其異常表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[2]。在原發(fā)性乳腺癌[3]、原發(fā)性惡性胸膜間皮瘤[4]、卵巢癌[5]中均發(fā)現(xiàn)CUL4A過表達。體內(nèi)外實驗均顯示，干擾CUL4A表達能抑制乳腺癌細胞的增殖和生長[6]。另外，肺癌細胞系H2170敲除CUL4A后對順鉑的敏感性增強[7]。關于其作用機制，Abbas等[8～10]研究發(fā)現(xiàn)，CUL4A可降解細胞周期抑制蛋白p21、p27，參與細胞凋亡蛋白p53降解；CUL4A可降解一系列腫瘤抑制蛋白，如Merlin蛋白[11]、mTOR通路抑制因子REDD1[12]等；表明CLUA可能通過參與調(diào)控細胞周期和細胞凋亡相關蛋白的活性，激活或抑制原癌基因及抑癌基因的表達，從而直接或間接影響各種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)，MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA表達量增加，且其表達量隨MM臨床進展而逐漸增高，與Ren等[13]在前列腺癌及李振宇[14]在結腸癌中觀察到的結果一致。岑海燕等[15]研究發(fā)現(xiàn)，MM患者血清β2-MG水平直接反映體內(nèi)腫瘤負荷，與其生存期有關，是影響預后的獨立危險因素。本研究中MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA相對表達量與血清β2-MG水平密切相關，高β2-MG患者CUL4A表達量高于低β2-MG患者。本研究中治療有效的MM患者CUL4A mRNA相對表達量低于治療無效患者，說明CUL4A在骨髓瘤患者中的高表達可能是部分患者對化療不敏感的原因之一，CUL4A有望成為逆轉骨髓瘤耐藥的一個潛在靶點。但CUL4A在MM發(fā)生、發(fā)展中的具體作用和分子機制仍需通過分子生物學實驗進一步研究證實。

綜上所述，MM患者骨髓單個核細胞CUL4A mRNA表達上調(diào)可能是促進MM發(fā)展的因素之一，檢測CUL4A可以為MM的診斷及治療提供參考。

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河北聯(lián)合大學科學研究基金項目(Z201335)。

閆振宇，E-mail: 517556667@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.12.031

R733.3

B

1002-266X(2015)12-0076-02

2014-07-05)