《PCR檢驗實驗室檢查要點指南》概述

北京市醫療器械技術審評中心（100061）鄭婕 馮路 趙陽 王輝

（接11月上）

②標本制備區的功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應包括：a.2℃～8℃冰箱、-20℃以下冰箱。b.高速離心機。c.混勻器。d.水浴箱或加熱模塊。e.微量加樣器。f.紫外消毒設備。g.生物安全柜。h.消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。i.專用工作服和工作鞋(套)。j.專用辦公用品。k.如需處理大分子DNA，應當具有超聲波儀。③擴增區的功能：cDNA合成、DNA擴增及檢測。配套用品一般應包括：a.核酸擴增儀。b.微量加樣器。c.紫外消毒設備。d.消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾芯）。e.專用工作服和工作鞋。f.專用辦公用品。④擴增產物分析區的功能：擴增片段的進一步分析測定。視檢驗方法不同而定，基本配置如下：a.微量加樣器。b.紫外消毒設備。c.消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）。d.專用工作服和工作鞋。e.專用辦公用品。⑤設備的維護保養：應建立設備維護保養規程，計量設備應定期檢定。例如核酸擴增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機應每年進行檢定或校準工作。2.3 現場及文件檢查工作流程及注意事項 完善的硬件條件下，合理的工作流程和工作制度才能進一步保證PCR檢驗工作的順利開展。

①進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→ 擴增產物分析區。②各工作區域必須有明確的標記，不同工作區域內的設備、物品不得混用。③不同工作區域的工作服應加以區分，不得混用（例如可以采用不同顏色）。工作人員離開各工作區域時，不得將本區域工作服帶出。④實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具并防止交叉污染。實驗垃圾屬于醫療廢物的應按《醫療廢物管理條例》相關規定進行處理。⑤工作結束后，應立即對工作區進行清潔及消毒。⑥ 貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區，不能經過擴增檢測區。試劑盒中的陽性對照品及質控品應當保存在標本處理區。試劑應使用分子生物學級別試劑，使用的純化水應高壓滅菌。質檢用于原輔料、半成品、成品檢驗用的PCR反應試劑應有相應的質量標準及操作程序。⑦為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，應蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在傳染危險性的材料，應在生物安全柜內開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。⑧應避免氣溶膠所致的污染，盡量減少在擴增區內的走動，擴增反應管不得在擴增區打開。⑨擴增產物分析區有可能存在某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，應注意實驗人員的安全防護。

2.4 現場及文件檢查人員培訓情況 參與PCR檢驗工作人員應具備相應的專業知識和技能，包括能熟練操作相關設備，明確整個工作的流程，掌握出現污染情況的處理方法以及實驗室質量控制方法和檢測結果的解釋。

檢查員可以通過詢問或要求企業以實際操作的方式對其進行評價，也可以通過查閱生產企業的培訓記錄的適宜性和完整性對其進行綜合評價。

3 結語

本《指南》主要以現行醫療器械和衛生行業的法規、標準以及相關文獻中對于PCR檢驗實驗室的規定為基礎，尤其是以《全國臨床檢驗規程》（第三版）的相關要求為主，部分借鑒了《醫療機構臨床基因擴增管理辦法》（衛辦醫政發〔2010〕194號）、《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》、《臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用》（WS/T 230-2002）等行業標準的相關要求。在檢查要點的制訂過程中我們走訪了全國多家PCR試劑生產企業，并且我們組織了博奧生物、華大基因、中生北控、寶瑞源、鑫諾美迪、泰格瑞、普林耐特、金菩嘉等多家建設有PCR檢測實驗室的企業進行了研討以及相應指標的驗證，針對驗證結果請教臨床檢驗領域的專家進行了核實與相應指導，還在北京市食品藥品監督管理局網站上公開征求了意見，以求能夠客觀、科學、合理的設定相關要求。

此文件的出臺旨在指導北京市醫療器械現場檢查人員的PCR檢驗工作。同時，為PCR類體外診斷試劑產品生產企業在PCR檢驗實驗室的設計建造和管理要求提供參考，促進產品安全有效上市。