HLC-723G8全自動糖化血紅蛋白分析儀常見干擾因素分析

楊開洪，梁知銳，曾慶棧

(陽江市中醫醫院檢驗科，廣東 陽 江529500)

糖化血紅蛋白(HbA1c)可以反映過去8~10周的平均血糖水平，因此是評價糖尿病患者血糖控制情況一項良好的指標。HLC-723G8是日本東曹株式會社(TOSOH CORPORATION)生產的一款簡單快捷、高性能的糖化血紅蛋白分析儀，它采用離子交換高效液相色譜法(HPLC)原理，利用其電荷差異通過陽離子交換住對血紅蛋白類物質進行分離，對HbA1c等血紅蛋白各成分以一個樣本1分鐘的高速，按共計6個組分進行分離測定，它利用3種不同鹽濃度的緩沖液進行梯度洗脫的方法進行分離，最后根據血紅蛋白各成分比例獲得HbA1c的比例。離子交換HPLC一直以來以其良好的準確性、穩定性在臨床上得到廣泛的應用，并被認為是測定HbA1c的國際標準化方法[1,2]。盡管如此，在HLC-723G8的日常使用中，常會有一些因素導致HbA1c測定結果不可靠或者根本無法測出。本文就影響HLC-723G8測定HbA1c的常見干擾因素進行分析探討，供同行參考。

1 變異血紅蛋白

1.1 地中海貧血標本 2014年9月，本實驗室檢測到1例HbA1c結果為0.0%的患者，同時血常規結果發現其血紅蛋白濃度、平均紅細胞體積、平均紅細胞血紅蛋白含量均降低，基因檢測確診為地中海貧血，用親和層析法(NycoCardR)復查，標準化后HbA1c結果為5.6%[3]，因此懷疑為地中海貧血樣本對HLC-723G8測定結果影響所致。索明環等[4]采用陽離子交換HPLC檢測3例地中海貧血患者均獲得異常的HbA1c圖譜，3例結果均為異常。謝裕達等[5]在進行地中海貧血孕婦妊娠糖尿病篩查時也發現HbA1c值受地中海貧血影響較大。地中海貧血是一組遺傳性溶血性貧血疾病，它是由于基因缺陷導致血紅蛋白α鏈或者β鏈存在突變或者缺失[6]，血紅蛋白各成分表面的電荷量產生繼發性改變，從而使離子交換色譜分離時間提前或者延遲，此時HbA1c常不能單獨形成分離峰，因此其檢測結果為0.0%。

1.2 高血紅蛋白F(HbF)標本 研究表明當樣本HbF濃度<8.75%時，離子交換HPLC法的測定結果與理論值無差異；當樣本HbF濃度為17.50%～23.00%時，其測定結果要明顯低于HbA1c理論值；當HbF濃度達35.0%～70.0%時，離子交換HPLC法根本無法檢測出HbA1c[7]。張艷芳等[8]報道2例遺傳性持續性胎兒血紅蛋白增多癥患者測定HbA1c時，其中1例血紅蛋白電泳檢測結果HbF占100%，而其采用離子交換HPLC測定HbA1c時未檢測出結果，表明HbF對HbA1c檢測產生了嚴重干擾。張靜等[9]在綜述HbA1c檢測的影響因素時也表示HbF、HbS會對其檢測產生一定的誤差。HbF是由α鏈和γ鏈構成的胎兒性Hb，新生兒參考區間約31%～96%。新生兒臍帶血中含有大量HbF，大約占血紅蛋白總量的70%～90%，它的等電點和HbA1c比較接近，在檢測過程中HbA1c峰大部分疊加在HbF峰中，導致HbA1c值顯著偏低或根本檢測不出。

1.3 血紅蛋白 D(HbD)、血紅蛋白 C(HbC)、血紅蛋白S(HbS)異常升高的標本 東曹(上海)生物科技有限公司的 《HLC-723G8產品介紹》中指出：⑴當HbD、HbS、HbC 以雜合形式存在(如 HbAS)時，采用HLC-723G8全自動糖化血紅蛋白分析儀變異模式進行測定不影響測定結果。⑵當HbD、HbS、HbC以純合形式或者雙雜合形式存在時(如HbSS、HbSC)，HbA1c測定則無法運行。⑶其他變異血紅蛋白的影響：血紅蛋白E(HbE)病是地中海貧血中一種特殊類型，檢測HbA1c時特別需要注意HbE會在HbA1c峰前出現一個小峰。

2 尿毒癥患者標本

尿毒癥患者由于腎功能嚴重受損常繼發腎性貧血，患者體內有過多的尿素(BUN)等含氮代謝廢物及毒物在體內蓄積，尿素在體內可自發地分離形成氨和氰酸鹽，氰酸鹽經質子化作用后形成異氰酸，血紅蛋白鏈端的纈氨酸可與異氰酸發生特異性的結合反應，形成穩定的氨基甲酰血紅蛋白(CarHb)，其含量常以氨基甲酰纈氨酸(CV)表示。近來發現氮質血癥與氨基甲酰血紅蛋白關系密切，而受到許多學者的重視[10,11]。氨基甲酰血紅蛋白與HbA1c一樣在溶液中都帶較強正電荷，所以在采用基于電荷分離原理的分析方法中(如電泳、離子交換層析法)，HbA1c測定結果易受氨基甲酰血紅蛋白的影響，導致HbA1c結果偏高[12,13]。

3 高乙醇標本

當血漿乙醇濃度大于25mg/dl時會對離子交換HPLC法測定HbA1c產生一定的干擾。乙醇可促進氧與血紅蛋白特異性結合，進而改變血紅蛋白的分子構象，影響血紅蛋白的攜氧能力。血紅蛋白拉曼光譜的結果表明：當乙醇濃度大于25mg/dl時，隨著乙醇濃度的增加，血液中氧合血紅蛋白占總血紅蛋白的比例隨之增加，血紅蛋白釋氧能力減弱，當乙醇濃度為500mg/dl時，氧合血紅蛋白達到最多[14]。離子交換HPLC法測定HbA1c是通過計算HbA1c占總血紅蛋白的比值，隨著乙醇濃度的增加氧合血紅蛋白的含量增加，HbA1c所占的比例逐漸變少，所以不能真正反映個體HbA1c的水平，導致測定結果的不準確。此外，HbA1c的生成與紅細胞生存時間有關，而酗酒可引起紅細胞壽命降低并能干擾紅細胞的生成，縮短紅細胞壽命會降低HbA1c水平[15,16]，因此乙醇也可間接降低HbA1c水平。

4 嚴重脂濁標本

東曹(上海)生物科技有限公司的《HLC-723G8產品介紹》中指出，當血液濁度大于2500Formazin濁度單位時，離子交換HPLC法測定HbA1c值也會產生干擾。脂濁產生的原因包括原發性高脂血癥、繼發性高脂血癥、餐后以及輸注脂肪乳后等，脂濁標本是由于血液中甘油三脂等含量過高導致血液外觀呈脂白色渾濁。各種脂蛋白因所帶電荷的不同，在用離子HPLC法檢測時也會對其進行分離，所以當嚴重脂濁標本各種脂蛋白含量達到一定值時 (濁度大于2500Formazin)，在離子HPLC法測定HbA1c時含量不同的脂蛋白也會同時進行分離并在圖譜相應位置疊加，影響電泳圖譜中血紅蛋白各成分的含量，從而對HbA1c測定結果產生不定向干擾。

HLC-723G8全自動糖化血紅蛋白分析儀具有精密度高、相關性好、攜帶污染小、測試速度快、操作簡便等優點而被廣泛使用于臨床[17]，但由于其采用離子交換HPLC法，凡是影響該方法的因素均會對儀器產生一定的影響，實際使用中不能完全排除特殊標本對檢測結果的影響，只有充分了解儀器性能、總結分析影響其測定結果的各種樣本干擾因素，才能獲得可靠的分析結果。

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