雪蓮果鐮刀葉斑病病原菌鑒定及殺菌劑室內(nèi)毒力測定

摘要：從感病雪蓮果葉片的病斑上分離得到一種病原菌，根據(jù)病害癥狀特點、病原菌培養(yǎng)性狀、病原菌形態(tài)特征等方面進(jìn)行鑒定，確定該病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp）真菌；藥劑室內(nèi)毒力試驗結(jié)果表明，5種殺菌劑對鐮刀葉斑病病原菌的毒力由高到低依次為20%烯肟·戊唑醇懸浮劑、37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、0%苯醚菌酯懸浮劑、25%丙環(huán)唑乳油和400 g/L氟硅唑乳油，以20%烯肟·戊唑醇懸浮劑的抑菌效果最好，其EC50為099 2 mg/L。

關(guān)鍵詞：雪蓮果；葉斑病；病原菌；殺菌劑；毒力

中圖分類號： S43244文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A[HK]

文章編號：002-302（204）2-079-02[HS）][HT9SS]

收稿日期：204-03-07

基金項目：四川省教育廳青年基金項目（編號：09ZB078）

作者簡介：涂勇（978—），男，四川南充人，碩士，副教授，從事植物病蟲害防治方面的研究。Tel：（0834）2580028；E-mail：tuy-09@63com。

[ZK）]

雪蓮果（Smallanthus sonchifolius）別稱菊薯、雅貢、亞貢，原產(chǎn)于南美洲安第斯山。雪蓮果富含人體所需的20多種氨基酸和鉀、鎂、鋅、硒等多種微量元素及豐富的礦物質(zhì)，它可調(diào)理血液，降低血糖、血脂和膽固醇，預(yù)防和治療高血壓和糖尿病，對老年人心腦血管也有明顯的保健作用[2-3]。近年來雪蓮果通過各種途徑引入我國，目前已經(jīng)在云南、福建、貴州、湖南、湖北等多個省份引種栽培成功[4-6]。然而，雪蓮果自傳入我國以來，與其相關(guān)的研究較少。近年來由于環(huán)境條件的變化和氣候等原因，雪蓮果種植的各個時期鐮刀葉斑病、褐斑病、紫斑病等葉部病害發(fā)生較為嚴(yán)重，且有逐年加重的趨勢，對其生產(chǎn)帶來了較大的危害，但國內(nèi)外學(xué)者對雪蓮果葉部病害尤其是鐮刀葉斑病進(jìn)行系統(tǒng)研究的資料甚少。 因此，我們對雪蓮果鐮刀葉斑病進(jìn)行病原菌鑒定和殺菌劑室內(nèi)毒力測定，以期能篩選出高效、低毒、低殘留的藥劑，為雪蓮果葉部病害的防治工作提供依據(jù)。

材料和方法

病原菌的分離、純化及鑒定

樣本采集及病原菌分離200—203年于西昌學(xué)院農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)院試驗田采集具有典型病害特征的雪蓮果葉片，并對照雪蓮果鐮刀葉斑病的田間癥狀（含葉面、葉尖和葉緣三個部位）特點及危害情況進(jìn)行記錄和描述。參照方中達(dá)的方法[7]對葉片上的病原菌進(jìn)行分離、純化，并經(jīng)單孢分離獲得純培養(yǎng)菌株。

2病原菌形態(tài)特征觀察與鑒定將菌株移于DA培養(yǎng)基上，置于26 ℃培養(yǎng)箱中，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，每日觀察，并且記錄病原菌的培養(yǎng)性狀，并挑取已產(chǎn)孢的菌株制片，利用光學(xué)顯微鏡描述記載孢子形態(tài)及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，測量孢子大小。根據(jù)以上性狀并查閱文獻(xiàn)[8-0]，初步判定病原菌的種類。

3病原菌的科赫氏法則驗證用所得的菌株配成孢子懸浮液，濃度為5×04孢子/mL，采用刺傷和無傷接離體葉片接種法，把孢子懸浮液涂抹于雪蓮果的健康葉片上，以等量無菌水涂抹的葉片作為對照，然后將已接種的雪蓮果葉片放入含充分濕潤的無菌紙大培養(yǎng)皿中，置于26 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)保濕培養(yǎng)。每個處理3次重復(fù)，觀察和記錄結(jié)果，比較其發(fā)病癥狀與初次分離時的癥狀是否一致，并將發(fā)病葉片進(jìn)行再次分離，培養(yǎng)獲得的病原菌與原分離菌株進(jìn)行比較觀察，鑒定致病菌株的一致性。

2不同藥劑對雪蓮果鐮刀葉斑病病原菌的室內(nèi)毒力測定

2供試藥劑供試藥劑見表。

[FK（W7][HT6H][Z]表供試藥劑[HTSS][STBZ]

[H5][BG（！][BHDFG2，WK4，WK5W]藥劑生產(chǎn)廠家

[BHDG2，WK4ZQ，WK5ZQ0W]20%烯肟·戊唑醇懸浮劑沈陽科創(chuàng)化學(xué)品有限公司

[BHDW]400 mg/L氟硅唑乳油上海杜邦農(nóng)化有限公司

[BH]0%苯醚菌酯懸浮劑浙江禾田化工有限公司

[BH]37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑[3]上海滬聯(lián)生物藥業(yè)（夏邑）有限公司

[BH]25%丙環(huán)唑乳油江蘇豐登農(nóng)藥有限公司[H][BG）F][FK）]

22室內(nèi)毒力測定方法

采用生長速率法[-3]對雪蓮果鐮刀葉斑病病原菌進(jìn)行殺菌劑室內(nèi)毒力測定，分別將20%烯肟·戊唑醇懸浮劑稀釋成00、005、00、050、00、2000、0000 mg/L；400 g/L氟硅唑乳油稀釋成00、00、050、00、2000、5000、20000 mg/L；0%苯醚菌酯懸浮劑稀釋成00、005、050、00、2000、5000、20000 mg/L；37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑稀釋成00、005、00、050、00、2000、0000 mg/L；25%丙環(huán)唑乳油稀釋成005、00、050、00、500、000、2000 mg/L。藥劑各濃度配制時均比設(shè)計濃度擴(kuò)大50倍進(jìn)行配制，待培養(yǎng)基溶化后，用移液管吸取不同濃度藥液 mL注入49 mL DA中，得到50 mL含藥培養(yǎng)基溶液，趁熱將其搖勻后倒入滅菌培養(yǎng)皿中，冷卻備用。每個濃度3次重復(fù)，以 mL無菌水加入49 mL DA制作的培養(yǎng)基作為對照。在無菌條件下，將已活化的直徑為4 mm的菌絲塊分別接種于含藥的培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基正中央，每個培養(yǎng)皿接菌餅塊，置于26 ℃的恒溫下培養(yǎng)5 d，用“十”字交叉法測量菌落直徑（cm）。同時計算供試藥劑不同濃度對病菌的抑制率，通過最小二乘法求出各單劑的毒力回歸方程，對方程進(jìn)行顯著性分析，再求出EC50、EC90。

[HS2][4]抑菌率=[SX（]對照組菌落平均直徑-處理組菌落平均直徑對照組菌落平均直徑[SX）]×00%。

2結(jié)果與分析

2病原菌鑒定

2癥狀描述endprint

該病主要危害雪蓮果葉片，葉尖、葉緣和葉面均可發(fā)病，初期病部為褐色圓形或不規(guī)則小斑點，后期逐漸蔓延擴(kuò)大為深褐色不規(guī)則形病斑，嚴(yán)重時形成穿孔，并逐漸開始向周圍擴(kuò)散（圖）。

22病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征

將該病原菌移于DA培養(yǎng)基上，于26 ℃的恒溫箱中人工培養(yǎng)7 d后，菌落直徑達(dá)到64～70 cm。氣生菌絲羊絨狀、淡粉色，易產(chǎn)生軍綠色黏孢團(tuán)型分生孢子座（圖2）。無性生殖產(chǎn)生分生孢子，大型分生孢子為鐮刀形，0～2個分隔，多數(shù)分隔不明顯，大小為（469～265） μm×（29～254） μm（圖3）；未發(fā)現(xiàn)小型分生孢子。厚垣孢子球形，表面光滑，單生或串生。

[CM（26]23病原菌科赫氏法則鑒定結(jié)果

通過離體接種法觀察[CM）]

[FK（W][TTY2tif][FK）]

[FK（W][TTY3tif][FK）]

發(fā)現(xiàn)，刺傷接種的葉片發(fā)病癥狀特點與自然發(fā)病葉片癥狀基本相同，清水對照不發(fā)病。從接種的病組織中分離的病原菌與自然發(fā)病病組織中分離的病原菌形態(tài)基本一致。

根據(jù)病原菌形態(tài)特點、培養(yǎng)性狀及科赫氏法則鑒定結(jié)果，并參考相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)為從西昌地區(qū)雪蓮果葉片上分離得到的病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp）真菌。

22不同藥劑對病原菌的室內(nèi)毒力

由表2可知，5種殺菌劑的毒力回歸方程均存在極顯著的直線回歸關(guān)系，5種殺菌劑對雪蓮果鐮刀葉斑病病原菌菌落的生長均具有較強(qiáng)的抑制作用。其中以20%烯肟·戊唑醇懸浮劑的抑菌效果最好，其EC50為099 2 mg/L，EC90也僅為33829 8 mg/L；其次為37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，EC50為0230 5 mg/L；400 g/L氟硅唑乳油的效果在供試藥劑中相對較差，其EC50為0933 9 mg/L。[FL）]

[FK（W9][HT6H][Z]表25種殺菌劑對雪蓮果鐮刀葉斑病菌的毒力回歸方程[HTSS][STBZ]

[H5][BG（！][BHDFG3，WK4。2，WK8。4W]藥劑名稱毒力回歸方程t檢驗相關(guān)系數(shù)EC50（mg/L）EC90（mg/L）

[BHDG2，WK4ZQ，WK4ZQ2，WK8。4DWW]20%烯肟·戊唑醇懸浮劑y[DD（-][HT6]^[DD）]=0574 7x5402 722530 2[KG-3]0995 099 233829 8

[BHDW]400 g/L氟硅唑乳油y[DD（-][HT6]^[DD）]=0622 x508 55022 3[KG-3]0989 0933 907250 7

[BH]0%苯醚菌酯懸浮劑y[DD（-][HT6]^[DD）]=037 2x525 225606 0[KG-3]0989 30460 0 304067 3

[BH]37%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑y[DD（-][HT6]^[DD）]=0467 7x5298 262 8[KG-3]0984 50230 526706 8

[BH]25%丙環(huán)唑乳油y[DD（-][HT6]^[DD）]=0938 8x563 34308 8[KG-3]0997 90670 35538 2[H][BG）F]

注：[KG-3]表示t檢驗達(dá)極顯著水平。[FK）]

[FL（2K2]3結(jié)論

通過對雪蓮果鐮刀葉斑病癥狀的觀察，病原菌的培養(yǎng)性狀、病原菌的產(chǎn)孢特性、孢子特點以及科赫氏法則證病，鑒定從病葉上所分離得到的病原菌為鐮刀菌屬（Fusarium sp）真菌，將其定為雪蓮果鐮刀葉斑病；采用低毒殺菌劑對其進(jìn)行室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，5種供試藥劑的抑菌效果均較好，以20%烯肟·戊唑醇懸浮劑最佳，其EC50 僅為099 2 mg/L，EC90 為33829 8 mg/L。由于此試驗僅在室內(nèi)對雪蓮果鐮刀葉斑病病原菌進(jìn)行毒力測定，20%烯肟·戊唑醇（SC）的田間防治效果以及是否具有促生作用和增產(chǎn)效果，有待進(jìn)一步驗證。

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