北京地區不同寄主蔬菜菌核病菌抗藥性比較

喬廣行　李興紅　周瑩　黃金寶　林秀敏　張瑋

摘要：為明確北京地區不同科蔬菜菌核病菌對4種常用殺菌劑（多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲）抗藥性現狀，20—202年在北京郊區縣蔬菜種植地區分別采集84個不同蔬菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）菌株，采用最小濃度抑制法測定84個不同蔬菜菌核病菌對4種殺菌劑的抗藥性。檢測結果表明：供試的84個菌株中，對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性菌株比例分別達到9022%、0000%、3750%和5000%；不同科蔬菜的菌核病菌對不同藥劑的敏感程度不同。根據菌株對4種殺菌劑的抗藥性與敏感性表現分為8種抗性表現型；其中對多菌靈、乙霉威和異菌脲抗藥三重抗藥性菌株所占比例為3386%，對多菌靈與乙霉威抗藥二重抗藥性所占比率為275%；4重抗藥性菌株所占比例為587%；對多菌靈、乙霉威和腐霉利抗藥三重抗藥性菌株所占的比例為27%，其他表現型菌株所占比例均在00%以下。結果表明，北京地區蔬菜菌核病菌對供試的4種殺菌劑均已產生抗藥性，迫切需要選擇新型的殺菌劑或生防制劑防治。

關鍵詞：北京；蔬菜；菌核病菌；殺菌劑；抗藥性

中圖分類號： S4363文獻標志碼： A

文章編號：002-302（204）2-055-03

蔬菜菌核病菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib） de Bary]是非常重要的蔬菜土傳真菌病害，寄主范圍廣，可侵染400多種植物，其中包含重要的蔬菜黃瓜、番茄、茄子、辣椒、生菜、萵筍、茴香等[-2]。隨著保護地蔬菜種植面積的不斷擴大，保護地相對低溫和高濕的環境條件下常有發生，加之保護地復種指數提高，連茬種植，病菌逐年累積，危害也逐年加重。崔文清等2006—2008年對北京通州地區蔬菜菌核病發生進行調查并對不同類型的蔬菜發病情況進行分析，重病田發病率20%～30%，據統計，菌核病造成的保護地蔬菜產量損失一般為0%～30%，嚴重者在80%以上甚至絕收[3]。蔬菜菌核病防控以化學殺菌劑防治為主，輔以農業措施生態調控與生物制劑防治。近年來我國菌核病使用化學殺菌劑防治，防治效果下降，油菜菌核病菌對多菌靈[4-8]、乙霉威[9]、腐霉利[0-]和異菌脲[2-3]抗藥性研究報道較多，但未見不同科蔬菜菌核病菌抗藥性比較研究報道。不同種類蔬菜生長期種植方式的差異以及生長期防治菌核病使用殺菌劑的用藥量與用藥次數不同，使菌核病菌對殺菌劑產生抗藥性頻次產生差異。為了進一步明確目前北京地區不同科蔬菜菌核病菌的抗藥性現狀，作者對北京地區不同科蔬菜菌核病菌的抗藥性進行了監測，以期為指導不同種類蔬菜菌核病的防治、田間病菌抗藥性風險評估及綜合治理提供有價值的理論和實踐依據。

材料與方法

供試菌株

200—202年，在北京市主要蔬菜種植地區隨機采集不同科蔬菜病株上的菌核病菌。采集病株挑取病株上的菌絲于DA培養基上，23℃培養分離和單菌絲純化后保存。從北京地區共采集6個區縣以葫蘆科、茄科、豆科、十字花科、傘形科與菊科蔬菜上84個菌核病菌菌株。

2供試藥劑

98%多菌靈（carbendazim）原藥，江蘇藍豐生物化工股份有限公司生產，預溶于0 mol/L鹽酸中；95%乙霉威（diethofencarb）原藥，江蘇藍豐生物化工股份有限公司生產，預溶于甲醇中；96%腐霉利（procymidone）原藥，浙江禾益農化有限公司生產，97%異菌脲（iprodione）原藥，江蘇快達農化股份有限公司生產，預溶于丙酮中。上述4種藥劑分別配成 0 000 μg/mL 母液，母液儲存于4 ℃冰箱內。

3試驗方法

用最小濃度抑制法（minimum inhibitory concentration，MIC），多菌靈、乙霉威、腐霉利與異菌脲以50 μg/mL設置為鑒別濃度。將待檢測的菌核病菌各菌株在DA平皿上培養 3 d 后取直徑為5 mm的菌餅移至各含藥平皿中，在23℃下培養3 d，在含藥平板上不能或幾乎不能在該鑒別濃度上正常生長的為敏感菌株，能正常生長的為抗性菌株，同時觀察菌絲生長狀況，用十字交叉法量取菌絲的直徑，根據菌絲生長情況，鑒別菌株對藥劑的敏感性。每個藥劑濃度3個重復。統計各采集地敏感與抗性菌株的發生頻率。

[Z]抗藥性頻率=抗藥性菌株數/總測定菌株數×00%。

2結果與分析

2不同科蔬菜菌核病菌抗性頻率分布

20—202年從北京7個科蔬菜的菌核病菌84個菌株，[2]采用最小濃度抑制法（MIC）檢測這些菌株對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的抗藥性。結果（表）表明，在84個供試菌株中，多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲產生抗藥性菌株的頻率分別為：9022%、0000%、3750%與5000%，其中對腐霉利產生抗藥性的比例最小。由圖可知，不同科蔬菜對4種殺菌劑抗藥性頻率存在差異，結果表明北京地區不同科蔬菜的菌核病菌對多菌靈、乙霉威和異菌脲的抗藥性水平較高。

22不同科蔬菜菌核病菌對4種殺菌劑抗藥性表現型

供試的84個蔬菜菌核病菌菌株，依據它們對多菌靈（car）、乙霉威（die）、腐霉利（pro）和異菌脲（ipr）這4種殺菌劑的抗感程度，可以分為8種抗藥性表現型（表2）。其中多菌靈、乙霉威和異菌脲表現抗藥性但對腐霉利表現敏感的菌株56個，所占比例為3043%；對多菌靈和乙霉威表現抗藥性而對腐霉利與異菌脲表現敏感的菌株5個，所占比例為2772%；對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲均表現抗藥性的菌株28個，所占比例為522%；對多菌靈、乙霉威、腐霉利表現抗藥性而對異菌脲表現敏感的菌株3個，所占比例為685%，其他表型的菌株數均在0個以下，所占比例較低。

3不同科蔬菜的菌核病菌對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲4種殺菌劑抗藥性表現型

202年采用最小濃度抑制（MIC）法測定了不同科蔬菜菌核病菌菌株對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的抗藥性，結果表明，不同科蔬菜的菌核病菌對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的產生抗藥性的菌株所占的比例分別為9022%、0000%、3750%與50%。試驗結果（表、圖）表明，北京地區不同科蔬菜菌核病菌對多菌靈、乙霉威抗藥性較嚴重，應用這2種藥劑防治蔬菜菌核病意義不大，其次對異菌脲抗藥性水平較高。但北京不同科蔬菜抗藥性水平存在差異，其中源自豆科蔬菜的菌核病菌菌株對多菌靈抗藥性頻率相對較低，達6667%；源自十字花科蔬菜的菌核病菌菌株對腐霉利抗藥性頻率相對較高，達到7000%；而源自菊科與茄科蔬菜的菌核病菌菌株對異菌脲的抗藥性水平相對較高，所占比例分別為6742%與5789%，田間使用腐霉利與異菌脲應考慮不同科蔬菜菌核病菌抗藥性水平，注意限制多菌靈與乙霉威2種藥劑使用，腐霉利與異菌脲2種藥劑使用要根據蔬菜的種類注意與其他不同作用方式的藥劑輪換使用，適當減少存在抗藥性風險的殺菌劑在個生長季節的使用量與使用次數，以延緩異菌脲與腐霉利抗藥性進一步增加。

32不同科蔬菜的菌核病菌對殺菌劑多重抗藥性

菌核病菌對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性在油菜、大豆和向日葵等大田作物均有報道，但是也多數是對單種或2種殺菌劑抗藥性的研究，而對蔬菜菌核病菌菌株的多重抗藥性的報道較少。本研究202年測定了84個不同科蔬菜的菌核病菌對多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性，沒有檢測到對這4種殺菌劑都敏感的菌株。4重抗藥性菌株28個，所占比例為522%；對多菌靈、乙霉威和異菌脲3重抗藥性菌株56個，所占比例為3043%；對多菌靈、乙霉威和腐霉利3重抗藥性菌株3個，所占比例為685%；對多菌靈與乙霉威2種藥劑2重抗藥性菌株5個，所占比例為272%；對多菌靈與乙霉威2種藥劑產生抗藥性菌核病菌的抗性普遍較強，而對多菌靈與乙霉威2種藥劑具有交互抗性的菌株8個，所占比例為979%，田間應盡量減少這2種藥劑的使用。菊科蔬菜菌核病菌對異菌脲抗藥性相對較重，所占比例為6742%。田間使用，應注意確定防治適期并與其他不同作用方式新型藥劑如啶酰菌胺[4- 5]、咯菌腈[6]、咪鮮胺[7]與申嗪霉素[8]等輪換使用，目前國內正式登記生物防治制劑只有噬菌核酶2億活孢子/g可濕性粉劑[9]，但有研究報道認為生物防治制劑盾殼霉[20]、枯草芽孢桿菌[2]、放線菌[22]與粘帚霉[23]對菌核病菌有較好的防治效果，生產上還可輔以合理的農業管理措施如溫湯浸種、及時清除病殘體、溫濕度控制等，發病嚴重的注意水旱輪作以及與非寄主植物輪作等，以達到延緩病菌對常規殺菌劑藥劑的抗藥性。

植物病原菌對殺菌劑的抗性風險是由藥劑和病原菌共同決定的，如藥劑的選擇壓力和作用機制、病原菌自身的抗藥性頻率、抗藥性突變體的適合度和交互抗性等[24]。在蔬菜菌核病防治研究中沒有明確菌核病菌對這些新殺菌劑抗性風險情況下，在農業生產過程中，各地要根據當地的生產水平和實際情況，科學、合理地指導施藥，避免長期、單一地使用某一種藥劑或某一類型的藥劑，有條件的地區，要定期做好田間病菌抗藥性的監測工作，并配合不同作用機理的藥劑合理搭配使用，減少因防治不當而帶來的蔬菜品質下降和產量損失。在應用中應該遵循殺菌劑使用準則，與其他不同作用機制的殺菌劑輪換使用或交替使用，以延緩病菌抗藥性的產生。

[HS2][HT85H]參考文獻：[HT8SS]

[ZK（#]Gj B，Hall R Index of plant hosts of Sclerotinia sclerotiorum Canadian ournal of lant athology， 994， 6（2）： 93-08

[2]鄭建秋，師迎春，胡鐵軍 蔬菜菌核病的識別與防治 中國蔬菜，2005（2）：53-54

[3]崔文清，金紅云，牛木森，等 保護地蔬菜菌核病的發生調查與防治 中國植保導刊，2009，29（2）：24-26

[4]潘以樓，汪智淵，吳漢章 油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）對多菌靈的抗藥性及其穩定性 江蘇農業學報，997，3（）：33-36

[5]石志琦，周明國，葉鐘音，等 油菜菌核病菌對多菌靈的抗藥性監測 江蘇農業學報，2000，6（4）：226-229

[6]齊永霞，陳方新，蘇賢巖，等 安徽省油菜菌核病菌對多菌靈的抗藥性監測 中國農學通報，2006，22（9）：37-373

[7]李偉，李偉，周益軍，等 江蘇省油菜菌核病菌對多菌靈的敏感性 中國油料作物學報，2007，29（）：63-68

[8]匡靜，王建新，周明國 江蘇省油菜菌核病菌對多菌靈和菌核凈的抗藥性監測 中國農學通報，20，27（5）：285-29

[9]楊敬輝，潘以樓，朱桂梅，等 油菜菌核病菌對多菌靈和乙霉威的交互抗性 安徽農業科學，2002，30（6）：85-852[ZK）]

[0][ZK（#]陳夕軍，曹敏娟，王艷，等 油菜菌核病菌對腐霉利的抗性誘變及抗藥菌株的生物學特性 中國油料作物學報，2009，3（4）：503-508

陳方新，齊永霞，高智謀油菜菌核病菌對速克靈的抗藥性風險研究 激光生物學報，202，2（2）：45-49

[2]Liu X，Yin Y N，Yan L Y，et al Sensitivity to iprodione and boscalid of Sclerotinia sclerotiorum isolates collected from rapeseed in China esticide Biochemistry and hysiology， 2009， 95（2）： 06-2[H9mm]

[3]齊永霞，陳方新，高智謀 油菜菌核病菌對撲海因和菌核凈敏感基線的建立及交互抗藥性分析 安徽農業大學學報，200，37（）：63-66

[4]朱春紅 50%凱澤水分散粒劑防治油菜菌核病田間藥效評價 現代農業科技， 200（23）： 56-58[H85mm]

[5]顧炳朝，朱桂梅，岳緒國，等 啶酰菌胺對油菜菌核病的作用方式及其田間防效 江西農業學報，202，24（2）：4-7

[6]任利平 咯菌腈等不同殺菌劑防治油菜菌核病試驗初報 青海農林科技，2009（2）：5-6

[7]任莉，陳坤榮，王成玉，等 咪鮮胺錳鹽防治油菜菌核病的潛力研究 中國農業科學，200，43（20）：483-49

[8]鄭文君，徐曙，周明國 申嗪霉素對油菜菌核病菌生物學活性的初步研究 農藥學學報，20，3（）：28-32

[9]孫光忠，彭超美，劉元明，等 微生物殺菌劑噬菌核霉防治油菜菌核病試驗研究 農藥科學與管理，203，34（2）：62-64

[20]師俊玲，堵國成，陳堅 盾殼霉在油菜菌核病菌生物防治中的應用 中國生物工程雜志，2003，23（4）：27-3

[2]侯毅平，章四平，王建新，等 枯草芽胞桿菌N-8對油菜菌核病的防治效果及其定殖動態 植物病理學報，203，43（4）：4-47

[22]韓立榮，張華姣，高保衛，等 放線菌-3-對油菜菌核病的防治作用與菌株鑒定 植物保護學報，202，39（2）：97-02

[23]張擁華，李世東，王桂琴，等 粘帚霉可濕性粉劑防治大豆菌核病試驗 植物保護，2007，33（5）：4-42

[24]王文橋，馬志強，張小風，等 植物病原菌對殺菌劑抗性風險評估 農藥學學報，200，3（）：6-