RA患者血清及外周血單核細胞中DcR3的表達及意義

羊文芳

類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)屬自身免疫系統疾病，以關節滑膜慢性炎癥為主要特征，病程相對較長，致殘率較高，嚴重影響患者的生活質量。研究［1］表明細胞因子是引發RA滑膜炎癥與關節損傷的重要介質，其中單核細胞陷阱因子3(decoy receptor 3，DcR3)是一種新型的可溶性腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor，TNFR)家庭成員。DcR3可以有效抑制炎性反應與細胞凋亡，還可以直接調節免疫細胞活性，誘導樹突狀細胞凋亡［2］。本文以我院風濕免疫科收治的62例類風濕關節炎患者為研究對象，通過檢測其血清中的DcR3水平，分析與RA臨床指標的相關性，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院風濕免疫科2012年9月至2013年12月收集的RA患者62例及60例健康人作為研究對象，研究組62例，男18例，女44例;年齡28～75歲，平均年齡(46±12)歲。對照組60例，男23例，女37例;年齡25～75歲，平均年齡(44±13)歲。2組年齡差異無統學意義(P＞0.05)。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準［3］:所有RA患者的診斷均符合1987年美國風濕病協會關于RA的診斷標準;患者主要表現為關節腫脹、疼痛、晨僵等癥狀。

1.2.2 排除標準:合并其他免疫系統疾病如系統性紅斑狼瘡、干燥綜合征、嚴重膝關節功能障礙患者;近期應用抗風濕類治療藥物的患者。

1.3 檢測方法 血沉(ESR)測定儀器為全自動SD-100動態血沉壓積測試儀(北京慧佳美康生物科技有限公司);CRP測定儀器為全血快速CRP測定儀(TD3)，購自北京北瑞達醫藥科技有限公司。采集研究對象的空腹血8 ml，血液凝固后在4 000 r/min的離心機中進行離心10 min，分離血清于－80℃的低溫保存，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)方法檢測2組血清的DcR3，熒光實時聚合酶鏈反應(PCR)檢測T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+)。試劑均選用R＆D公司生產，并按照試劑盒上要求的操作步驟進行操作。

1.4 分組方法及觀察指標 記錄RA患者抽血檢查前的臨床癥狀:關節疼痛數、壓痛數、腫脹數、晨僵時間，檢測血沉(ESR)、C-反應蛋白(CRP)、DcR3、外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+)。并根據DAS28評分法將研究組分為RA低活動組(DAS28評分≤2.6分，28例)，RA活動組(DAS28評分 ＞2.6分，34例)。

1.5 統計學分析 應用SPSS 17.0統計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.12組DcR3及相關指標比較 研究組(RA患者)的DcR3、DcR3mRNA、ESR、CRP均顯著的高于對照組(P＜0.05);研究組的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著低于對照組(P＜0.05)。見表1。

表1 2組DcR3及相關指標比較 ±s

表1 2組DcR3及相關指標比較 ±s

指標 對照組(n=60) 研究組(n=62) t值 P值DcR3(ng/ml)48.4 ±19.7 177.8 ±49.4 16.818 0.000 DcR3mRNA 8.3 ±3.2 23.7 ±7.2 15.179 0.000 ESR(mm/h) 17.4 ±7.2 68.9 ±25.7 14.962 0.000 CRP(mg/L) 7.8 ±2.9 32.8 ±7.5 23.938 0.000 CD3+(%) 82.5 ±9.4 56.3 ±8.6 16.158 0.000 CD4+(%) 50.3 ±6.5 39.8 ±7.2 8.446 0.000 CD4+/CD8+1.57 ±0.18 1.32 ±0.24 6.493 0.000

2.2 RA低活動組與活動組的臨床癥狀及DcR3指標比較 RA活動組的晨僵時間、關節腫脹率、關節壓痛率、cR3、DcR3mRNA、ESR、CRP 均顯著高于 RA 低活動組(P＜0.05);RA 活動組的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著的低于 RA低活動組(P＜0.05)。見表2。

表2 不同RA活動程度分組的臨床癥狀及DcR3比較 ±s

表2 不同RA活動程度分組的臨床癥狀及DcR3比較 ±s

指標 RA低活動組(n=28)RA活動組(n=34)t(χ2)值 P值晨僵時間(h)1.4 ±0.8 1.8 ± 0.6 3.131 0.002關節腫脹數［例(%)］ 16(57.14) 28(82.35) 4.736 0.030關節壓痛數［例(%)］ 17(60.71) 30(88.24) 6.341 0.012 DcR3(ng/ml) 121.4 ±37.6 224.8 ± 51.3 8.876 0.000 DcR3mRNA 11.9 ±7.4 34.5 ± 7.2 12.147 0.000 ESR(mm/h) 29.9 ±18.4 107.8 ± 26.3 13.225 0.000 CRP(mg/L) 18.5 ±6.3 44.8 ± 7.4 14.878 0.000 CD3+(%) 65.8 ±9.1 48.3 ± 8.0 8.056 0.000 CD4+(%) 44.3 ±6.7 35.6 ± 8.1 4.544 0.000 CD4+/CD8+1.42 ±0.32 1.21 ± 0.26 2.852 0.006

3 討論

RA是一種慢性、以炎性滑膜炎為主的系統性疾?。?］。RA一般發病年齡在20～50歲，且女性多于男性，一般容易侵犯小關節如手、腕、足等關節，其病變位于患者的滑膜，累及關節軟骨、韌帶、肌腱以及全身組織，引發關節腫痛，繼而破壞軟骨、關節間隙狹窄，主要是呈對稱性、晨僵及關節腫脹疼痛，晚期會造成關節畸形、功能活動障礙，最終導致不同程度的殘疾，嚴重影響患者的身體健康［5］。RA發病過程中關節局部炎性介質、細胞因子等吸引并活化來自外周血炎性細胞，且可以有效觸發滑膜細胞增殖與活化。DcR3在腫瘤細胞與惡性腫瘤組織中具有較高表達，通過抑制凋亡作用于腫瘤細胞免疫逃逸。在RA滑膜細胞在局部表現出腫瘤生物學行為，損壞關節軟骨、肌腱與韌帶，導致滑膜細胞凋亡異常，促進RA發生［6］。DcR3是一種新發現的腫瘤壞死因子誘騙受體，屬于分泌性蛋白，可以與TLIA、LIGHT等多種腫瘤壞死因子(TNF)家族成員相結合，但由于缺乏胞內區或胞內死亡區不完整，而不能傳導凋亡信號，進而有效抑制細胞凋亡［7］。DcR3在細胞的生長、分化與死亡以及免疫調節中具有重要作用，且與RA疾病具有密切聯系［8］。本研究結果顯示，研究組患者的 DcR3、DcR3mRNA、ESR、CRP均顯著性高于對照組(P＜0.05)。研究組的 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+等外周血T淋巴細胞亞群均顯著的低于對照組(P＜0.05)。

Bamias等［7］研究結果顯示RA患者血清中DcR3濃度顯著性高于正常人群的對照組。且RA患者血清與關節腔積液中的濃度顯著性高于骨性關節炎與健康對照組。這表明了RA發病機制中DcR3起到了重要作用［9］。本研究結果顯示，RA活動組的晨僵時間、關節腫脹率、關節壓痛率、cR3、DcR3mRNA、ESR、CRP 均顯著高于 RA低活動組(P＜0.05)。且患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著的低于RA低活動組(P＜0.05)。表明RA患者外周血單核細胞及血清中DcR3水平顯著的高于正常人群，且與ESR、CRP升高、T淋巴細胞亞群水平降低具有密切聯系，這一結果和相關文獻報道的數據［10］相一致。因此，我們認為，單核細胞中DcR3參與了風濕性關節炎的發病機制，但是通過抑制細胞凋亡，調節免疫應答，促進了RA發病進程，還是RA全身免疫反應中存在的保護性應答仍不明確，需要進一步研究分析。

綜上所述，RA患者外周血單核細胞及血清中DcR3水平顯著的高于正常人群，并且RA活動期患者的DcR3水平顯著的高于低活動期患者，并且可能與ESR、CRP升高、T淋巴細胞亞群水平降低有一定關系性。DcR3在RA發病中的作用為其發病機制提供了有價值線索，且對疾病的進一步治療提供重要參考依據。

1 孫可歆，趙臣，李艷，等.RA患者外周血DcR3表達水平與疾病活動性相關分析.中國實驗診斷學，2012，11:2069-2072.

2 陳安平，袁國華，向陽，等.陷阱因子3在類風濕關節炎患者血清及外周血單核細胞中的表達研究.中華風濕病學雜志，2012，16:47-49.

3 Shinya M，Yasushi H，Takayuki M，et al.Decoy receptor 3 expressed in rheumatoid synovial fibroblasts protects the cells against Fas-induced apoptosis.Arthritis and rheumatism，2007，56:1067-1075.

4 賈汝琳，趙靜，孫曉麟，等.類風濕關節炎患者血清中誘騙受體3的檢測及臨床意義.中華風濕病學雜志，2013，17:20-22.

5 朱雷，賈汝琳，楊冬月，等.聯合檢測IgG/IgA型抗環瓜氨酸肽抗體對類風濕關節炎的診斷意義.中華風濕病學雜志，2013，17:522-525.

6 趙靜，孫曉麟，賈汝琳，等.類風濕關節炎患者血清中腫瘤壞死因子樣配體1A的測定及臨床意義.中華風濕病學雜志，2011，15:608-610.

7 Bamias G，Siakavellas SI，Stamatelopoulos KS，et al.Circulating levels of TNF-like cytokine 1A(TL1A)and its decoy receptor 3(DcR3)in rheumatoid arthritis.Clinical Immunology，2008，129:249-255.

8 陳安平，袁國華，羅雄燕，等.類風濕關節炎滑膜組織及關節液中DcR3表達的研究.中國免疫學雜志，2013，29:825-828.

9 范利峰，陳漢玉，翁庚民.早期RA的篩查及早期干預治療的臨床研究.河北醫藥，2013，35:185-186.

10 孫可歆，李春輝，郭素紅，等.類風濕性關節炎患者外周血單個核細胞DcR3基因表達水平的分析.中國現代藥物應用，2013，25:1-2.