直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用探討

賀春連 (湖南省隆回縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南 隆回 422200)

抗菌藥物的發(fā)明和應(yīng)用，使得感染性疾病的治療進(jìn)入了一個(gè)劃時(shí)代的階段［1－2］，但是近年來(lái)，由于抗生素的廣泛和不規(guī)范使用，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性不斷提高，新的抗菌藥物的研發(fā)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)跟不上細(xì)菌耐藥性的發(fā)展速度［3］，細(xì)菌的耐藥性已成為臨床上治療感染性疾病的棘手問(wèn)題，而且增加了患者的醫(yī)療費(fèi)用。因此，如何選擇合適的、快速有效的細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法，對(duì)于正確掌握細(xì)菌耐藥性的發(fā)展趨勢(shì)，指導(dǎo)臨床合理用藥及制定防治策略非常重要，對(duì)于挽救患者生命具有重要的意義。目前，臨床檢驗(yàn)中常用的細(xì)菌鑒定方法有:鏡檢法、直接藥敏試驗(yàn)法、常規(guī)檢驗(yàn)法、血清凝集試驗(yàn)法等［4］，我科自2013年4月～2014年4月，隨機(jī)選擇420份血液標(biāo)本對(duì)直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法進(jìn)行了應(yīng)用探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:本研究血液培養(yǎng)的標(biāo)本均來(lái)自我院2013年4月～2014年4月間，因發(fā)熱并(或)伴有全身感染癥狀在我院住院治療，且均排除血液系統(tǒng)疾病和凝血功能障礙的患者，隨機(jī)選擇420例患者，在無(wú)菌條件下，于發(fā)熱初初期或高峰期抽取血培養(yǎng)標(biāo)本，毎例患者采集靜脈血20 ml，冷藏后盡快送檢。

1.2 方法:將每份樣本同時(shí)分別應(yīng)用常規(guī)檢測(cè)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)和通過(guò)Bactec9240生化自動(dòng)血培養(yǎng)儀直接進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)，并分成相應(yīng)的常規(guī)細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)組(常規(guī)檢測(cè)法組)和直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)組(直接法組)，然后根據(jù)兩組試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)和分析。

1.2.1 直接法組:將臨床血培養(yǎng)標(biāo)本接種置Bactec9240型生化自動(dòng)血培養(yǎng)儀對(duì)其進(jìn)行自動(dòng)培養(yǎng)及檢測(cè)，當(dāng)培養(yǎng)儀自動(dòng)報(bào)警時(shí)，提示血液樣本檢測(cè)呈陽(yáng)性，有細(xì)菌生長(zhǎng)，然后用無(wú)菌注射器快速抽取10 ml陽(yáng)性樣品，注入無(wú)菌試管，以1 500 r/min，離心5～10 min，收集上清液，再以3 000 r/min，離心15～20 min，最后取其沉淀，用無(wú)菌生理鹽水洗滌兩次后收集細(xì)菌懸液，取20μl懸液涂片，行革蘭染色后鏡檢:①如果鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)且鏡下細(xì)菌呈鏈狀，則使用濃度為MH+5%的羊血板作初步藥敏試驗(yàn);②根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇合適的觸酶或氧化酶且將菌液濃度調(diào)整至6.9×108cfu/L后，將其接種至NCH21或PC11綜合板上，用微生物分析儀對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)。其他一般接種選用MH平板，且向平板內(nèi)接種1～2滴懸液，并用無(wú)菌拭子均勻涂抹于平板上，貼上藥敏紙片。根據(jù)2005NCCLSI標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)陽(yáng)性樣品的敏感性、中度敏感性、耐藥性進(jìn)行判斷［5］。記錄最終檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告所需時(shí)間。

1.2.2 常規(guī)檢測(cè)法組:將所選陽(yáng)性血液樣本分別接種在巧克力平板、麥康凱平板及血平板上，在溫度為35℃、濃度為5%的二氧化碳下孵育18～24 h后，取出菌落涂片，對(duì)其進(jìn)行革蘭染色鏡檢，然后根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇相應(yīng)的觸酶或氧化酶進(jìn)行試驗(yàn)，使用URITEST－3000生物鑒定儀對(duì)其進(jìn)行鑒定，及進(jìn)行藥敏試驗(yàn)［2］。記錄最終檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告所需時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.00軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用u檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法藥敏試驗(yàn)符合率:兩種檢測(cè)方法藥敏試驗(yàn)結(jié)果示:兩種方法對(duì)所有陽(yáng)性標(biāo)本細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果的符合率較高，其中，對(duì)革蘭陰性菌桿菌:敏感、中度敏感、耐藥的符合率分別為94.7%，91.3%，96.3%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);對(duì)革蘭陽(yáng)性菌球菌:敏感、中度敏感、耐藥的符合率分別為96.7%，93.6%，98.9%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

2.2 兩種檢測(cè)方法最終檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告所需時(shí)間:直接法為10±2.3 h，常規(guī)檢測(cè)法為72±13.6 h，直接法所需時(shí)間明顯短于常規(guī)檢測(cè)法，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩組藥敏試驗(yàn)符合率及獲取檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)間比較(例)

2.3 兩種檢測(cè)方法菌種鑒定檢出符合率:420例血培養(yǎng)標(biāo)本經(jīng)血培養(yǎng)儀報(bào)警為陽(yáng)性的169例，其中經(jīng)常規(guī)藥敏試驗(yàn)組鑒定出革蘭陽(yáng)性菌桿菌130株，革蘭陽(yáng)性菌球菌39株，直接藥敏試驗(yàn)組鑒定出革蘭陽(yáng)性菌桿菌112株，革蘭陽(yáng)性菌球菌29株。兩種方法菌種鑒定總符合率為85.3%，其中腸桿菌科鑒定符合率為86.3%，革蘭陽(yáng)性菌球菌符合率76.9%，見表2。

表2 兩種檢測(cè)方法菌種鑒定符合率比較(%)

3 討論

菌血癥和敗血癥是臨床上嚴(yán)重危及患者生命的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，患者病死率可達(dá)28%，特別是在近年來(lái)，抗菌藥物的不規(guī)范使用，細(xì)菌耐藥性不斷提高的情況下，這一比率成增高趨勢(shì)。臨床檢驗(yàn)中，常規(guī)檢驗(yàn)法檢測(cè)陽(yáng)性血液標(biāo)本較為準(zhǔn)確，但其細(xì)菌鑒定速度及藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告時(shí)間均較慢［6］，通常，臨床醫(yī)生獲取一份完整的報(bào)告需要3～4 d時(shí)間［7－9］，這不利于指導(dǎo)臨床醫(yī)生盡早選擇合理的藥物對(duì)感染性疾病進(jìn)行治療，因此，對(duì)細(xì)菌菌種進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的鑒定與藥敏試驗(yàn)是臨床診斷和治療的關(guān)鍵［7］，對(duì)于盡早指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素亦具有重要意義。本研究采用Bectec9240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)血液標(biāo)本自動(dòng)培養(yǎng)，直接進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)，其原理:利用熒光探測(cè)技術(shù)連續(xù)測(cè)定封閉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)微生物代謝引起的氧或二氧化碳濃度變化，來(lái)檢測(cè)微生物增殖情況，以判斷是否感染細(xì)菌、真菌及分支桿菌［10］，與常規(guī)檢驗(yàn)法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)相比，直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法省略了分離培養(yǎng)步驟，操作方便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，本研究結(jié)果顯示，隨機(jī)選擇的420份血液樣本中，共檢測(cè)出169份陽(yáng)性血液標(biāo)本，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌桿菌和革蘭陽(yáng)性菌球菌分別應(yīng)用直接和常規(guī)細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定，其總一致率為85.3%，兩種方法菌種鑒定符合率均較高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在對(duì)陽(yáng)性血液標(biāo)本的藥敏試驗(yàn)中，兩種方法的藥物敏感，中度耐藥，耐藥符合率亦較高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法的平均檢測(cè)結(jié)果報(bào)告時(shí)間為(10±2.3)h，與常規(guī)檢測(cè)法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)報(bào)告時(shí)間(72±13.6)h相比，時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，這與此前相關(guān)報(bào)道:與常規(guī)方法比較，在時(shí)間上提前了24～48 h［11］基本一致。

綜合上述，通過(guò)Bectec9240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行的直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)，與常規(guī)檢測(cè)法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)一樣，其檢測(cè)結(jié)果具有可靠的準(zhǔn)確性，但直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法更加方便快捷，有效地縮短了臨床醫(yī)生獲取檢驗(yàn)報(bào)告的時(shí)間，使臨床醫(yī)生可盡早根據(jù)檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)或修正給藥方案，合理應(yīng)用抗菌藥物，延緩耐藥性的出現(xiàn)和發(fā)展，為患者盡早進(jìn)行有效的治療贏得了時(shí)間，因此，可以認(rèn)為直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法在臨床檢驗(yàn)中是一種可靠、有效的，值得推廣的細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法。

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