免疫抑制法測(cè)定線粒體型天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的影響因素觀察

趙 欣 姚曉雷

（陜西省第四人民醫(yī)院 陜西 西安 710043）

在人體各組織細(xì)胞中，均能夠檢測(cè)出AST，該物質(zhì)在心肌與肝臟中該物質(zhì)含量更為豐富，因此在臨床上經(jīng)常被用于心臟與肝臟疾病的檢測(cè)。肝細(xì)胞受損者的血清c－AST 在增高的同時(shí)，m－AST 的活性和以往相比也呈現(xiàn)出了上升趨勢(shì)。當(dāng)前測(cè)定m－AST 的方式主要有水解酶和免疫抑制法兩種，結(jié)合實(shí)際情況，本實(shí)驗(yàn)特使用兩種方式對(duì)m－AST 進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2012年1月－2013年1月來我院就診的肝炎患者65例為研究對(duì)象，其中男患者36例，女患者29例，年齡區(qū)間為35－81歲，經(jīng)過診斷，患者為干細(xì)胞壞死，（AST200U／L 以上）。另取同期來我院行健康檢查的健康者65例為對(duì)比組，男37例，女28例，年齡區(qū)間為36－82歲。肝功正常（AST50U／L），兩組受試者性別年齡等一般資料無明顯差異，有可比性。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)器材和試劑：本實(shí)驗(yàn)使用日本日立公司生產(chǎn)的7180型全自動(dòng)生化分析設(shè)備，免疫酶M－AST 試劑盒由寧波普瑞柏生物科技有限公司出品，選擇凍干血清為標(biāo)準(zhǔn)品，無定標(biāo)溯源。酶水解M－AST 試劑盒由寧波普瑞柏生物科技有限公司出品。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法：患者入院后次日清晨取空腹靜脈血5ml，離心分離，室溫下靜置10min后進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 免疫抑制法測(cè)量外加抗c－AST 抗體實(shí)驗(yàn)：取用5ml免疫酶抑制劑R1，加入抗c－AST 抗體（效價(jià)位1∶128）0.0、0.2、0.4、0.8、1.0ml中。最終配制成為新的R1制劑。后重新對(duì)樣本進(jìn)行全面測(cè)定，全面觀測(cè)m－AST 測(cè)定值變化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理：本實(shí)驗(yàn)利用SPSS20.0專業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)中的計(jì)量資料使用T 值檢驗(yàn)的方式進(jìn)行計(jì)算，并利用進(jìn)行表示，當(dāng)P＜0.05時(shí)，數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組人員m－AST 測(cè)定情況：兩組人員測(cè)定情況詳情見表1。

表1 兩組人員m－AST 測(cè)定情況

2.2 免疫抑制法外加抗－c－AST 抗體實(shí)驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為，抗c－AST 抗體數(shù)量增加，m－AST 定值呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。

3 討論

m－AST 存在與人體細(xì)胞中線粒體內(nèi)，該物質(zhì)正常標(biāo)準(zhǔn)為18%［1］，c－AST 的含量充分體現(xiàn)了血清AST 活性，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，線粒體會(huì)發(fā)生崩解現(xiàn)象。進(jìn)而令過量的m－AST 進(jìn)入到血液循環(huán)內(nèi)，令血清中的m－AST 和AST 的活性增加，兩者之間的比例隨之增加。從本次研究結(jié)果中能夠看出，使用免疫抑制法測(cè)定出來的m－AST 的結(jié)果明顯比酶水解法高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。病例組顯著低于酶水解法，P＜0.05.出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能是因?yàn)閏－AST 與抗c－AST 抗體全面結(jié)合之后，并沒有將酶活性完全覆蓋［2］，也不能抑制所有c－AST 的活性。除此之外，數(shù)量極少的該抗體與部分m－AST 會(huì)產(chǎn)生交叉性反應(yīng)，因此，最后的m－AST 結(jié)果為未被完全抑制的c－AST 加上參與反應(yīng)的m－AST 除去被交叉抑制的m－AST。當(dāng)m－AST 濃度不高時(shí)，使用免疫抑制法測(cè)定出來的m－AST 結(jié)果仍然較高，當(dāng)該物質(zhì)濃度達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，使用免疫抑制法測(cè)定出來的最終結(jié)果仍然偏低。

本組實(shí)驗(yàn)中的健康對(duì)照組并沒有線粒體崩解與肝細(xì)胞受損現(xiàn)象，因此m－AST和AST比值與m－AST高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05.本實(shí)驗(yàn)使用免疫抑制法測(cè)定出出來的m－AST 和AST 比值結(jié)果為健康組比病例組高，利用酶水解法測(cè)定出來的最終結(jié)果卻低，這項(xiàng)結(jié)果充分證明，當(dāng)m－AST和AST升高的時(shí)候，利用免疫酶抑制法測(cè)定會(huì)令m－AST的特異性出現(xiàn)下降現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能和抗c－AST含量不足有關(guān)，而c－AST 的活性并沒有完全被抑制，利用加入c－AST抗體實(shí)驗(yàn)所呈現(xiàn)出的結(jié)果可以充分說明抗c－AST 抗體不足的問題。當(dāng)加入該樣本之后，測(cè)定值和之前相比有下降的趨勢(shì)，同時(shí)和抗體加入量有直接關(guān)系。影響m－AST 測(cè)定結(jié)果的重要因素之一是抗c－AST抗體含量，加入抗體的具體含量和在儲(chǔ)存過程中的活性值得進(jìn)一步探究。

綜上所述，在保證足夠抗體含量和穩(wěn)定劑質(zhì)量?jī)?yōu)秀的情況下，對(duì)m－AST 進(jìn)行測(cè)定有著較高的臨床價(jià)值，m－AST／AST 是判斷肝臟病變程度的重要標(biāo)準(zhǔn)。

［1］ 陳春華，趙義剛，宋紅美，史新英，陳淑勉.線粒體天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶在肝臟損害病程中的臨床意義［J］.實(shí)用肝臟病雜志，2009，05：376－379

［2］ 杜宗孝，李富榮，樸文花.線粒體型天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶同工酶對(duì)肝臟疾病診斷價(jià)值的探討［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2013，04：303－304