日立7600生化檢測系統檢測天門冬氨酸氨基轉移酶臨床可報告范圍的研究

胡軍紅，謝建紅，陸玲，謝素玉

(清遠市省佛岡縣人民醫院，廣東 清遠511600)

天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)是一種臨床常見的酶類測定項目，在臨床生化檢驗工作中我們經常會遇到超出可測量范圍的酶類項目需要稀釋后才能測定出來。如何才能保證稀釋后測定的結果準確可靠就需要我們對每個酶類檢測項目的臨床可報告范圍進行驗證。本文就日立7600生化分析儀檢測AST的臨床可報告范圍進行了一系列研究，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 儀器與試劑 (1)儀器：日立7600全自動生化分析儀。(2)試劑：寧波美康AST檢測試劑,校準品為羅氏CFAS,質控品為伯樂公司提供。試劑批號：20130821；校準品批號：20130206；質控品批號：27601,27602。

1.1 .2樣本的制備 收集本院患者AST低濃度和高濃度的新鮮血清標本若干份,要求血清清亮，無溶血、無黃疸、無脂血。

1.2 方法

1.2 .1儀器維護及校準 按照說明書進行對儀器進行維護保養，設置好試劑參數，用羅氏公司CFAS多項校準品進行校準，室內質控在控后再檢測樣品。

1.2 .2樣品檢測 (1)最大稀釋度實驗樣品檢測：選取2個濃度稍微高于AST檢測范圍高限1000U/L的標本，用0.9g/dl生理鹽水對這2個樣本分別進行 2、4、8、32、64、128 倍稀釋。兩樣本分別測定 3次，取均值，計算稀釋回收率，稀釋回收率=(實測值均值／理論濃度值)×100%，以重復性CV值小于5%、回收率在90%～110%以內為可接受，確定最大稀釋倍數。(2)功能靈敏度實驗樣品檢測 ：選取低濃度AST的樣本，用0.9g/dl生理鹽水對該樣本進行不同倍數稀釋，使最大稀釋倍數濃度接近于0。在7600儀器上對不同倍數稀釋樣本連續測定20次，計算平均數、標準差及變異系數。查看各樣本的變異系數(CV%)，樣本的變異系數最接近20%所對應的濃度即為功能靈敏度。(3)分析測量范圍樣品檢測：參考EP6-A文件，設定實驗重復性和線性允許誤差分別為5%和10%。收集低AST濃度和高AST濃度的新鮮患者血清標本若干份，將濃度稍微超出廠家聲明的分析測量范圍上線1000U/L的高AST濃度樣本作為分析測量范圍試驗中的高值樣本(H),將低AST濃度標本稀釋為濃度接近功能靈敏度后作為分析測量范圍試驗中的低值樣本(L)。將樣本H與樣本L按照 L，0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H，H的比例配制成6個系列活性濃度樣品，充分混勻，各樣品重復檢測2次。記錄檢測結果。應用SPSSl9.0統計軟件進行重復性誤差和多項式回歸分析。將所得數據擬合為一次多項式模型Y=b0+b1X、二次多項式模型Y=b0+b1X+b2X2和三次多項式模型Y=b0+blX+b2X2+b3X3多項式。用t檢驗判斷擬合二次回歸多項式模型的非線性系數b2及三次回歸多項式模型的非線性系數b2和b3與0的差異是否具有統計學意義。如有則判斷為非線性，否則為線性。

1.2 .3臨床可報告范圍的建立 將功能靈敏度作為臨床可報告范圍的下限，將分析測量范圍的上限乘最大稀釋倍數作為臨床可報告范圍的上限。

2 結果

2.1 AST稀釋回收率實驗結果 濃度值為1 165U／L(標本 1)，l 607 U ／L(標本 2)的兩標本稀釋后測定結果重復性CV%，稀釋倍數在1:128內時，均在5%以內，當稀釋倍數延伸至1:128時，濃度值為1009U/L的標本回收率超出90%～110%的實驗設定范圍，所以其最大稀釋倍數為64倍。檢測數據見表1。

表1 AST稀釋回收率結果(%)

2.2 功能靈敏度實驗結果 從表中數據可以看出樣本號3的CV值最接近20%，故本實驗室7600生化檢測系統檢測AST的功能靈敏度可確認為2.9U／L。 見表 2。

表2 AST功能靈敏度試驗結果

2.3 分析測量范圍實驗結果 應用CLSI的EP6-A文件對AST的分析測量范圍進行驗證，6個系列濃度樣本AST的重復測定，每個濃度2次測量結果的重復測量誤差遠遠小于設定的允許不精密度5%，重復測定誤差符合實驗要求。測定數據進行多項式回歸分析，結果見表3。從表3可知二次多項式與三次多項式雖有較小的回歸標準誤，但在α=0.05水平時無有統計意義的顯著性系數(P>0.05,表次t=1.91,小于查表的2.262，三次t=1.64及t=-1.33小于查表的2.306)，所以AST為一次線性，線性方程為Y=209.21X-209.67。本次實驗證實AST檢測方法在3~1057.5U/L范圍成直線線性，由于低濃度AST不具有重要的臨床意義，本范圍涵蓋了廠家提供的0~1000U/L的線性范圍。

2.4 臨床可報告范圍實驗結果 根據稀釋回收率結果實驗結果確定AST的最大稀釋度為1：64，功能靈敏度為2.9U/L，分析測量范圍為3~1057.5U/L，所以本實驗室日立7600測定AST的臨床可報告范圍為2.9~67680U/L。

表3 AST多項式回歸分析結果

3 討論

ISO 15189醫學實驗室質量和能力認可準則、CAP認證標準以及CLIA’88都對醫學實驗室在引進或改變檢測系統時需要進行性能評價作出了規定[1],要求各實驗室定期對包括精密度、準確度、分析測量范圍、臨床可報告范圍及參考區間在內的檢測系統性能進行評價[2]。

臨床可報告范圍 (clinical reportable range,CRR)是指對臨床、診斷有意義的待測物濃度范圍。此范圍如果超出了AMR(分析測量范圍)，可將樣本通過稀釋、濃縮等預處理使待測物濃度處于分析測量范圍內，最后乘以稀釋或濃縮的倍數。AMR是指患者標本不經稀釋或濃縮等任何處理由檢驗方法或檢測系統得到可靠測量結果的范圍[3],AMR評價的方法主要有目測法,平均斜率法和CLSI評價方案[4],在本次AST的AMR驗證實驗中我們采用了CLSI的EP6-A[5]多項式回歸分析方法,從統計學理論得出各濃度點的最適多項式為一次多項式，AST在3~1057.5U/L范圍內成一次線性，由于低濃度AST沒有重要的臨床意義，我們可以認為AST濃度在0~1057.5U/L范圍內成一次線性，這就涵蓋了廠家提供的0~1000的線性范圍。

在本次驗證AST的臨床可報告范圍實驗中由于在功能靈敏度實驗和分析測量范圍實驗都需對標本進行稀釋處理，所以在實驗設計時，我們先做了稀釋回收率實驗然后再做其他實驗，保證標本的稀釋倍數在最大稀釋度范圍內，以確保標本稀釋后測定結果的準確性[6，7]。通過最大稀釋度實驗，功能靈敏度實驗及分析測量范圍實驗結果我們確定了日立7600生化分析儀測定AST的最大稀釋度為1：64，臨床可報告范圍為2.9~67680U/L。

在我們的日常臨床檢驗工作中我們經常會碰到高濃度的標本需要我們稀釋后才能準確測定，但高濃度標本經稀釋后由于基質效應或其他原因可能會對測定結果的準確性造成影響，如何處理高濃度的標本才能得到準確的結果，如何保證稀釋程序的規范，這就要求我們對每個檢驗項目的臨床可報告范圍進行驗證。

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