Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮的可行性分析

桂勇 ，廖朝青 ，夏琴

(新余市中醫(yī)院，1、檢驗科；2、乳腺病科，江西 新余,338025；3、分宜縣農(nóng)醫(yī)局，江西 分宜，336600)

化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在臨床應(yīng)用廣泛,可對血清腫瘤標(biāo)志物、微量蛋白、性激素、甲狀腺激素等多個項目進行測定，具有結(jié)果快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、特異性好、對環(huán)境無污染可代替放射免疫(RIA)等優(yōu)點[1-7]。近年來國內(nèi)曾有學(xué)者嘗試用放射免疫、高效液相色譜(HPLC)、時間分辨熒光免疫(TRFIA)等多種方法測定尿液中的睪酮含量,并作了探討和報道[8-10]。本實驗對應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮作實驗評價,供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1混合尿液 由多份健康未成年男性的尿液混合而成,酸堿度(pH)7.8,睪酮濃度0.50nmol/L。

1.1 .2混合血清 由多份健康未成年男性的血清混合而成,睪酮濃度1.50nmol/L。

1.1 .3 高濃度睪酮尿液 取臨床睪酮濃度為380.50nmol/L的尿液標(biāo)本，代替睪酮凍干標(biāo)準(zhǔn)品，以制備不同睪酮濃度的尿液標(biāo)本。

1.1 .4 睪酮凍干標(biāo)準(zhǔn)品 睪酮濃度分別為1.74、5.20、13.88、27.76、55.52nmol/L， 由 Beckman-Coulter公司提供，用于制備睪酮標(biāo)準(zhǔn)液。

1.1 .5尿隱血陽性、尿糖陽性、尿蛋白陽性、高白細(xì)胞尿液樣品 血尿(Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白細(xì)胞(WBC>10個/HP)尿液。

1.2 檢測方法 所有測定均使用Beckman-Coulter-Access2型全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑由Beckman-Coulter公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用相關(guān)分析和t檢驗，以P<0.05為兩樣本呈相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r的絕對值愈接近于1，相關(guān)愈密切；愈接近于0，相關(guān)愈不密切。

2 結(jié)果

2.1 精密度 取高濃度睪酮尿液,用混合尿液稀釋成低(稀釋 1：100,預(yù)計 3.82nmol/L)、中(稀釋 1：20,預(yù)計 18.60nmol/L)、高(稀釋 1:10，預(yù)計 35.04nmol/L)三種濃度睪酮尿液標(biāo)本各1管,低、高濃度標(biāo)本各測20次,測得睪酮濃度分別為3.80±0.13nmol/L和34.50±0.86nmol/L,批內(nèi)變異系數(shù)CV分別為3.50%和2.50%。取中濃度睪酮尿液標(biāo)本,分裝30支小試管后置-25℃低溫貯存,每天取出1支測試,連測30天,睪酮濃度為18.45±0.86nmol/L,批間變異系數(shù)CV為4.65%。

2.2 準(zhǔn)確度 (回收試驗)在0.9m l睪酮濃度為0.50nmol/L的混合尿液中加入0.1ml睪酮標(biāo)準(zhǔn)液。測定標(biāo)本中睪酮濃度，以回收濃度/加入濃度計算百分回收率，結(jié)果見表1。

表1 尿液睪酮回收試驗

2.3 線性范圍 取高濃度睪酮尿液,用混合尿液從1:4倍起稀釋成76.50~0.50nmol/L不同濃度系列的尿液睪酮濃度，其線性范圍0.80~54.78nmol/L，比血清標(biāo)本的線性范圍0.35~55.52nmol/L略小。

2.4 同一濃度睪酮在血清和尿液中測得值的比較取高濃度睪酮凍干標(biāo)準(zhǔn)品,用混合尿液稀釋成系列濃度的40份尿液標(biāo)本，測得的睪酮濃度值為Y，用混合血清稀釋成相應(yīng)濃度的系列標(biāo)本40份，測得的睪酮濃度值為X。回歸方程為Y=0.96X+0.32，相關(guān)系數(shù)r=0.9918,t=47.91,P<0.001。

2.5 尿隱血陽性、尿糖陽性、尿蛋白陽性、高白細(xì)胞尿液樣品對睪酮測定的干擾觀察 取高濃度睪酮凍干標(biāo)準(zhǔn)品,分別用血尿 (Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白細(xì)胞(WBC>10個/HP)尿液樣品離心后尿液從1：1倍起稀釋成不同濃度系列的尿液睪酮溶液各10管，每管各測4次，取均值，測定值為Y，理論值為X，回歸方程分別為 Y=0.95X+0.35，r=0.9725,t=11.80,P<0.001；Y=0.96X+0.30，r=0.9740,t=12.18,P<0.001；Y=0.97X+0.33，r=0.9856,t=16.43,P<0.001；Y=0.96X+0.42，r=0.9811,t=14.30,P<0.001。

3 討論

在臨床上睪酮測定一般都用血清或血漿標(biāo)本,在臨床工作中經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)多囊卵巢綜合征患者,血清睪酮水平與臨床癥狀并不完全吻合。這可能與血清睪酮測定方法及抽血時間點的選擇有關(guān),測定血清或血漿中的睪酮易受性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和白蛋白等的影響,同時睪酮分泌呈脈沖式釋放,尤以夜間顯著,睪酮分泌常伴隨于促黃體生成素(LH)脈沖釋放約30min后,故血睪酮水平在夜間睡眠后升高,因此測定24h尿睪酮含量較常規(guī)性日間一次采血測睪酮更為合理而有意義[9]。

實驗結(jié)果提示應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮與測定同水平的血清睪酮相關(guān)性良好，抗干擾能力強，精密度較好，但準(zhǔn)確度稍差，線性范圍較小，當(dāng)尿液睪酮含量大于54.78nmol/L時需要對尿液標(biāo)本進行稀釋后再進行測定。其主要原因是尿液與血清基質(zhì)存在差異所致。臨床個體因生理、病理情況不同尿液差異很大，即使同一受試對象的尿液在不同的晝夜、時間段也會有一些差別。尿量、pH值等受采樣時患者的飲食、服藥情況影響較大。基質(zhì)的差異既影響堿性磷酸酶催化發(fā)光劑的活性，又影響到免疫反應(yīng)中抗原抗體的結(jié)合，使結(jié)果出現(xiàn)偏差，并且偏離的趨勢和幅度并不一致[11]。

綜上所述，應(yīng)用Access化學(xué)發(fā)光儀測定尿液睪酮可行，但須與血清同時進行測定結(jié)果更有參考價值。

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