比較兩種核酸檢測系統檢測能力的結果分析

莊養林，熊麗紅

(江西省血液中心檢驗科，南昌330000)

由于窗口期感染、隱匿性感染等原因，ELISA法檢測獻血者血液中的抗體或抗原存在一定的局限性，輸血殘余感染風險也時有發生[1-8]。因此從2010年開始，我國在15所采供血機構開展核酸檢測(NAT)試點工作，我單位2010年成為首批試點單位后，并于當年引進羅氏Cobas s 201核酸檢測系統，目前已平穩運行4年有余，為更好地推動核酸檢測工作，我單位于2013年4月引進諾華TIGRIS全自動核酸檢測分析系統，該系統也平穩運行1年。由于這兩個檢測系統的檢測模式不同，實際檢測效果也有所不同，在引進諾華核酸檢測系統的初期，為全面評估兩種核酸檢測系統的檢測能力，對此我們也做了相關的比較工作。

1 對象與方法

1.1 標本來源 選自2013年7月24日-2013年10月16日南昌市無償獻血者標本262例，所有標本均用帶分離膠的5ml進口無菌乙二胺四乙酸抗凝管留取血樣 (美國BD公司)，4℃低溫離心機離心(3000r/min，15 min)使血漿分層，2~8℃保存，24h內進行核酸檢測；2014年衛生部核酸室間質評(NCCL)標本10例。

1.2 儀器 羅氏公司Cobas s 201核酸檢測系統，諾華公司TIGRIS全自動核酸檢測分析系統，瑞士Hamlton全自動STAR加樣儀，瑞士Hamilton FAME全自動酶免分析儀，西門子DIMENSION XPAND全自動生化分析儀，XANTUS全自動加樣與血型分析儀及長沙湘麓DL-6M大容量低溫離心機。

1.3主要試劑 (1)常規血清學篩查酶免試劑盒：HBsAg酶免試劑 (廈門英科新創科技有限公司，批號：2012125133)，抗-HCV酶免試劑(北京萬泰生物藥 業 股 份 有 限 公 司 ， 批 號 ：C20130102、C20130406)，抗-HIV酶免試劑(廈門英科新創科技有限公司，批號：2013026605)，抗-TP酶免試劑(北京華大吉比愛生物技術有限公司，批號：20130206、20130516；北京金豪制藥股份有限公司，批號：2012111033、2013041008)；(2)核酸檢測試劑盒：COBASTaqScreen MPX test核酸檢測試劑盒(瑞士 Roche 公司，批號：R01528、R07643)，該試劑可同時定性檢測人類血漿中的HIV-1,2 RNA、HCV RNA 和 HBV DNA；Procleix ULTRIO Assay核酸檢測試劑盒 (Novartis公司，批號：36247751509149)該試劑可同時定性檢測人類血漿中的HIV-1 RNA、HCV RNA 和HBV DNA。

1.4 實驗方法 先進行常規一遍HBsAg、抗-HCV、抗-HIV，兩遍抗-TP和ALT檢測，篩選出ELISA及ALT合格獻血者標本及不合格標本，然后將262例標本進行羅氏6人份混樣檢測及諾華單人份檢測，NCCL核酸室間質評標本與獻血者標本同批進行檢測。(1)進行羅氏6人份混樣核酸檢測時，初混無反應性標本判為NAT檢測陰性，初混有反應性時，進行下一步拆分檢測工作：其一，拆分有反應性標本判為NAT陽性標本；其二，拆分無反應性標本判為NAT檢測陰性。(2)運用諾華單人份檢測時，無反應性標本判為NAT陰性，有反應性標本判為NAT陽性。(3)ELISA檢測陰性而羅氏拆分檢測NAT陽性標本或諾華檢測NAT陽性的標本進行下一步HBV、HCV及HIV鑒別實驗。

2 結果

2.1 262例血液標本ELISA檢測結果 262例無償獻血者血液標本中經ELISA檢測陰性為245例，陽性為17例。

2.2 245例血液標本兩種核酸檢測系統檢測結果245例ELISA陰性獻血者標本兩種核酸檢測系統檢測結果情況，詳見下表1。

表1 245例ELISA合格獻血者標本兩種檢測系統NAT檢測結果

2.3 17例ELISA不合格標本及10例NCCL核酸室間質評標本兩種檢測系統NAT檢測情況，詳見表2。

表2 17例ELISA不合格標本及10例NCCL核酸室間質評標本兩種檢測系統NAT檢測情況

2.4 ELISA陰性標本而羅氏拆分檢測NAT陽性標本或諾華檢測NAT陽性鑒別情況 245例ELISA檢測陰性的標本中，羅氏和諾華各檢出1例和4例NAT陽性標本。通過鑒別實驗，羅氏的1例NAT陽性標本未能鑒別，諾華的4例NAT陽性標本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。

3 討論

在本文中，245例ELISA檢測陰性獻血者的標本中，羅氏系統檢出1例NAT陽性標本(此例標本諾華NAT檢測也為陽性)，而諾華系統則檢出4例NAT陽性的標本，后通過鑒別實驗顯示，羅氏的1例NAT陽性標本未能鑒別，諾華的4例NAT陽性標本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。此項結果也從一方面體現了混樣檢測與單人份檢測的差別：混樣檢測由于吸取檢測的量較單人份檢測少，當病毒載量比較低時，混樣檢測就有可能檢測不出，這與國內外的研究[9-11]結果也比較一致，有單人份檢出率 (1:9862)及8人份混樣檢測率(1:5l011)；還有單人份檢測率 (26:7613)及16人份混樣檢測率(27:16064)。因此，諾華系統采用單人份檢測方式在病毒載量比較低時實施血液核酸篩查可能有一定的優勢，諾華1人份標本吸取的量為500μl，羅氏為167μl，相對而言諾華檢測到病毒的概率大一些。從另一方面講，由于沒能做追蹤實驗，無法確證諾華其余3例NAT檢測陽性的這部分標本中是否存在病毒。因此，諾華未能鑒別的3例NAT陽性的標本也有可能是假陽性，從節約血液資源上講，這部分血液經NAT檢測有可能因實驗的假陽性而造成血液資源的浪費，從而影響無償獻血者的獻血積極性。此外，在本實驗出現了羅氏與諾華NAT檢測同為陽性的1例標本中，鑒別實驗卻未能鑒別，因條件所限，我們沒能進一步追蹤檢測，因此是實驗假陽性還是病毒載量過低導致未能鑒別就不得而知。

在11例HBsAg陽性標本的NAT檢測結果顯示，羅氏和諾華系統分別有5例和3例檢出NAT陽性，其中同為陽性的有3例，5份抗-HCV陽性的標本中兩者都有3例NAT檢出。此項實驗結果顯示在ELISA陽性的標本運用NAT檢測中，羅氏系統較諾華系統有較高的檢出率。因為11例HBsAg陽性標本我們未進行確證及鑒別實驗，因此不能排除有ELISA實驗假陽性的部分，但是可能也與HBV在血液中的存在形式有關，有可能是以小球形顆粒或管狀顆粒的形式存在，致NAT檢測不出。因此此項實驗結果也表明，在日常的血篩工作中，不能有依賴NAT檢測結果的思想，因為NAT技術和血清學檢測的病毒標志物不同，NAT可以作為血清學的補充，但不能完全替代。在10份NCCL核酸室間質評標本中，兩種核酸檢測系統也全部正確檢出，這表明這兩種核酸檢測系統均能較好地勝任日常核酸檢測工作。

從日常檢測工作流程上看，諾華的應用不如羅氏簡便，具體體現在：對設備維護的要求較高、維護時間長、加載試劑及耗材費時；實驗運行中工作人員即使發現可當時解決的問題也無法人為糾正。但是從檢測及出具檢驗報告時間上看，羅氏系統可能會長于諾華系統，因為羅氏為6人份混樣檢測，檢測前需進行標本6人份混樣，而且為減少拆分檢測，羅氏系統檢測一般需要等ELISA檢測結束后挑取ELISA陰性的標本才能進行，而諾華系統則與ELISA檢測同步進行，單人份直接加樣檢測，減少了出具報告時間。再者，ELISA陰性的標本進行羅氏系統檢測時如果初混有反應性，則需要進行拆分檢測，又增加了工作量，出具報告的時間則又會相應延長，不利于應急標本的檢測，而諾華是單人份檢測則不存在這種情況。總之，兩種核酸檢測系統在日常血篩檢測工作中各有優勢和劣勢，但均能較好地勝任日常的核酸檢測工作。

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