尿鎂試劑盒線性范圍的驗證研究

龍偉清，高玲，馮品寧

(中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)部，廣東 廣州510080)

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織頒布的 《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》(ISO15189)和中國《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》均要求，實驗室必須對引進或改變的檢測系統(tǒng)或方法的主要性能進行驗證或評價，證實其能夠達(dá)到臨床檢測所要求的標(biāo)準(zhǔn)后方可用于臨床檢測[1]。鎂離子是細(xì)胞內(nèi)液的主要陽離子，是許多酶系統(tǒng)的輔基，人血清中鎂離子濃度維持恒定在很窄的范圍內(nèi)(0.65～1.05mmol/L)，其血清濃度水平調(diào)節(jié)主要通過腎臟，尤其是通過髓袢升支實現(xiàn)。尿液中鎂離子濃度的檢測對許多疾病的診斷及預(yù)后監(jiān)測有一定的臨床價值[2]。本研究主要參考美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)發(fā)布的EP6-A2文件《定量檢驗程序的線性評價：統(tǒng)計方法—批準(zhǔn)指南》對日立7180全自動生化分析儀檢測尿液中鎂離子的分析測量范圍進行驗證，以便于該項目的常規(guī)開展。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1儀器與試劑 日立7180全自動生化分析儀；羅氏鎂離子生化試劑盒(批號：159927)；定標(biāo)物cfas(批號：161452-03)，靶值 1.06mmol/l；質(zhì)控物 RANDOX(批 號 ：566UC，580UC)；Eppendorf 精 度 移 液槍。

1.1 .2標(biāo)本 收集中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診患者的新鮮尿液標(biāo)本，要求高值標(biāo)本(H)、低值標(biāo)本(L)鎂離子濃度分別超出試劑盒線性范圍上限、下限的20%[3]；注意混濁標(biāo)本需離心取上清。

1.2 方法

1.2 .1 標(biāo)本的配制 將H和L按照H、0.8H+0.2L、0.6H+0.4L、0.4H+0.6L、0.2H+0.8L、L 的配比關(guān)系進行配制，得到6個實驗標(biāo)本。

1.2 .2標(biāo)本的檢測 要求日立7180全自動生化分析儀經(jīng)過校準(zhǔn)并且質(zhì)控在控，用羅氏鎂離子試劑盒對6個實驗標(biāo)本進行檢測，每個標(biāo)本重復(fù)測定2次，記錄檢測結(jié)果。各項操作應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行相應(yīng)操作規(guī)程，要求在當(dāng)天完成檢測。

1.2 .3數(shù)據(jù)處理 設(shè)定本實驗?zāi)蜴V測定的CVr、DLi分別為3.00%、5.00%。根據(jù)所有實驗數(shù)據(jù)計算CVr，判斷不精密度是否符合實驗要求。在不精密度符合實驗要求的條件下，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行多項式回歸分析，分別擬合為Y=b1X+b0、Y=b2X2+b1X+b0、Y=b3X3+b2X2+b1X+b0，式中bi為回歸系數(shù)。用t檢驗判斷二次回歸多項式非線性系數(shù)b2、三次回歸多項式非線性系數(shù)b2和b3與0的差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。如果差異有統(tǒng)計學(xué)意義，則判斷為非線性，并確定最適多項式，否則為線性。當(dāng)判斷為非線性時，計算DLi=p(Xi)-(b1X+b0)，p(Xi)為最適多項式預(yù)期值。如果所有濃度點的DLi均≤5.00%，這說明非線性度可以接受，尿鎂在實驗樣本濃度范圍內(nèi)呈線性。反之，如果有一個濃度點的DLi＞5.00%，則可以先舍去這個濃度點，對剩余數(shù)據(jù)進行多項式回歸分析，直至所有濃度點的DLi均≤5.00%[4]。

2 結(jié)果

2.1 實驗標(biāo)本檢測結(jié)果 見表1。

表1 系列濃度實驗標(biāo)本檢測結(jié)果(mm ol/L)

對表1數(shù)據(jù)進行不精密度分析，根據(jù)公式：

Ri1為第i個實驗標(biāo)本測量結(jié)果1與該樣本兩次結(jié)果測量均值的百分比，Ri2為第i個實驗標(biāo)本測量結(jié)果2與該樣本兩次結(jié)果測量均值的百分比，L為實驗標(biāo)本總數(shù)，2為重復(fù)測定次數(shù)。計算得到實驗樣本重復(fù)測定CVr=1.48%，小于設(shè)定目標(biāo)3.00%，這說明實驗重復(fù)性符合要求，可直接用于多項式回歸分析。

2.2 多項式回歸分析 見表2。

表2 多項式回歸分析結(jié)果

在表2中，二次回歸多項式非線性系數(shù)b2(t=-3.958，P=0.029)與0差異有統(tǒng)計學(xué)意義。三次回歸多項式非線性系數(shù) b2(t=1.307，P=0.321)與 b3(t=-2.448，P=0.134)與0差異無統(tǒng)計學(xué)意義，二次回歸多項式為最適多項式。

2.3 線性偏倚分析，見表3。

表3 二次多項式的線性偏倚分析

由表3可見，第一個濃度點的DLi＞5.00%，舍去該點，對剩余數(shù)據(jù)進行多項式回歸分析。

2.4 多項式回歸修正，見表4。

表4 多項式回歸修正分析結(jié)果

從表4可知，二次多項式的非線性系數(shù)b2(t=-3.113，P=0.090)，三次多項式的非線性系數(shù)b2(t=2.708，P=0.225)、b3(t=-3.656，P=0.170)與 0 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，一次回歸多項式為最適多項式，該試劑盒在日立7180上檢測尿液鎂離子濃度的線性范圍為3.4750~16.8850mmol/L。

3 討論

線性范圍是指檢測系統(tǒng)結(jié)果具有可接受線性的范圍，即在此范圍內(nèi)非線性誤差小于設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)[5]。所以線性范圍是試劑盒的重要性能指標(biāo)之一,對其的驗證對我們的臨床工作顯得非常重要。從簡單的目測線性到復(fù)雜的多項式回歸分析，判斷線性的方法在不斷發(fā)展[6]。多項式回歸分析方法被認(rèn)為是目前判斷線性的最佳方法。有報道[7]應(yīng)用EP6-A2方法驗證血糖試劑盒的線性范圍就是用多項式回歸分析的，是個成功的例子。本研究的是尿鎂的線性范圍的驗證，尿中含有的基質(zhì)及影響因素多，但本研究用的校準(zhǔn)品是羅氏的cfas校準(zhǔn)品，質(zhì)控品用RANDOX，索源性及準(zhǔn)確性等都有保證。

EP6-A2文件要求對試驗數(shù)據(jù)進行一次、二次、三次多項式回歸分析，并判斷非線性系數(shù)與0是否有統(tǒng)計學(xué)差異。如果非線性系數(shù)與0無統(tǒng)計學(xué)差異，那么一次回歸多項式就是最適多項式，試驗結(jié)果在測試樣本濃度范圍內(nèi)呈線性。本研究二次回歸多項式為最適多項式，尿鎂檢測結(jié)果在測試樣本濃度范圍內(nèi)呈線性。最后線性偏倚分析時對剩余數(shù)據(jù)進行多項式回歸分析顯示線性偏倚DLi≤5.00%，得到最佳線性回歸模型為一次多項式Y(jié)=0.978X+0.705，因此其分析測量范圍為3.4750~16.8850mmol/L。比廠家提供的線性范圍0.17~11.0mmol/L較寬，但檢測低限沒有達(dá)到廠家提供的0.17mmol/L，可能原因為樣本選擇的局限。由于第一個濃度點L偏離了線性，將其舍棄后0.2H+0.8L濃度高于廠家的檢測低限，可以試著縮小系列標(biāo)本濃度的間距，增加標(biāo)本數(shù)量的方法去解決。此外，本實驗室的檢測條件留取標(biāo)本等和廠家不完全一致，這也可能是本實驗得出的分析測量范圍與廠家申明略有不同的原因[8]。也可能是尿鎂濃度數(shù)值較低、尿液基質(zhì)和酸堿度的因素，故尿鎂一般作1:5或1:6稀釋后檢測。

綜上所述，本科室使用的尿鎂試劑盒在3.4750~16.8850mmol/L范圍內(nèi)呈線性，與試劑盒申明的線性范圍基本一致。說明其檢測的非線性度可以接受，可以認(rèn)為試劑盒在試驗樣本的濃度范圍內(nèi)仍然呈線性，能夠滿足臨床常規(guī)檢測要求。

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