不結球白菜提取物對肉雞免疫及抗氧化功能的影響

馬景蕃， 劉喜明， 吳 程

(1.龍巖學院生命科學學院，福建 龍巖 364012;2.福建省預防獸醫學與獸醫生物技術重點實驗室，福建 龍巖 364012;3.龍巖學院藝術與設計學院，福建 龍巖 364012)

不結球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是長江中下游地區主栽蔬菜品種之一，中醫認為不結球白菜微寒味甘，具有養胃生津、利尿通便、除煩解渴、清熱解毒的功效［1］。國內外學者已從不結球白菜中分離到一系列復雜的化學成分，其中相當一部分具有重要的生理活性［2］。日本科學家發現，不結球白菜提取物抗氧化銹蝕的效果很好，其中尤其是未完全成熟，葉形舒展的嫩株提取物抗氧化效果更好［3］。在美國國立癌癥研究所發表的防癌食品排行榜中，不結球白菜排在大蒜的后面，位列第二［4］。最新的研究還發現，不結球白菜提取物能提升血清中雌激素代謝物——2羥雌酮的水平，對預防乳腺癌有益處［5］。經現代藥理學研究結果表明不結球白菜具有很好的免疫調節作用。Meyer等［6］報道，飼糧中添加不結球白菜提取物可提高小鼠血清抗氧化活性，龍盛京等［7］研究結果表明不結球白菜和百里香提取物可以提高雞肉和雞蛋的氧化穩定性及更有效地延緩肉仔雞脂質氧化。本試驗通過在日糧中添加不同比例的不結球白菜提取物(NCCE)，運用現代技術來研究其對肉雞生產性能、屠宰性能、免疫器官指數、血清免疫指標及血清抗氧化水平的影響，旨在探討NCCE對AA肉雞免疫功能及抗氧化功能的影響，為NCCE添加劑在肉雞生產上應用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

同一批出雛，體質健壯的1日齡AA肉仔雞240羽，購自森寶(龍巖)公司。

不結球白菜品種蘇州青由龍巖學院生物技術課題組提供，定植30 d后進行采收，用聚乙烯膜真空包裝后迅速于液氮中冷凍，經真空冷凍干燥，粉碎過60目篩。稱取100 g粉末，用75%的乙醇500 ml超聲提取35 min，再進行回流提取3 h后抽濾，濾渣重復以上操作1次，合并2次的濾液。經旋轉蒸發濃縮至近干，即為不結球白菜的粗提物。粗提物用蒸餾水溶解，得到水懸液，轉入500 ml分液漏斗中，用等體積乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，旋轉蒸發濃縮后真空冷凍干燥至恒質量，即為不結球白菜提取物(NCCE)，主要組分為黃酮和多酚類等生物活性物質［6］，將其置于4℃冰箱冷藏保存備用。

1.2 試驗動物分組處理與飼養管理

試驗用雞隨機分為4組，每組3個重復，每個重復20羽，試驗期35 d，4組雞飼養條件一致，均采用地面平養，自由采食及飲水，給24 h光照。對照組飼喂基礎日糧(玉米-豆粕型)，配制參照NRC 1994《家禽的營養需要量》，基礎日糧組成及營養水平見表1。試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組為分別在基礎日糧中添加100 mg/kg、500 mg/kg、900 mg/kg的NCCE。按常規免疫程序對所有試驗雞進行免疫接種。

表1 基礎日糧組成及營養水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 測定指標及檢測方法

1.3.1 生產性能的測定 分別在肉雞21、35日齡時，將每組肉雞個體空腹稱質量，統計耗料量，計算各階段平均日增質量及料肉比。

1.3.2 屠宰性能及免疫器官指數的測定 肉雞在35日齡時，每組隨機選取體質量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，稱質量，采用頸外放血致死，分別測定其屠體質量、全凈膛質量、腹脂質量和屠宰性能［8］，取胸腺、法氏囊及脾臟，剔出脂肪并用濾紙吸干血液后稱質量，計算免疫器官指數，免疫器官指數(g/kg)=器官質量/體質量。

1.3.3 血清抗體和補體C3、C4的測定 肉雞在35日齡時，每組隨機選取體質量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，心臟采血，3 000 r/min離心10 min，取血清采用免疫比濁法測定抗體IgG、IgM、IgA及補體C3、C4，按試劑盒操作說明進行試驗，試驗試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.3.4 血清抗氧化水平的測定 血清SOD活性采用黃嘌呤氧化物酶法測定，T-AOC采用比色法測定，GSH-Px采用二硫代二硝基苯甲酸法測定，MDA含量采用硫巴比妥酸法(TBA)測定。試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.4 數據處理與統計分析

采用SPSS 19.0軟件One-way ANOVA方法進行統計分析，并采用LSD法多重比較。

2 結果與分析

2.1 不結球白菜提取物(NCCE)對肉雞生產性能的影響

由表2可知，在肉雞飼養前期(0～21 d)，各試驗組與對照間的日增質量與料肉比差異均不顯著;但在飼養后期(22～35 d)，各試驗組與對照相比，日增質量均有所提高，其中，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組較對照分別提高了4.92%和7.88%，達到顯著性差異水平。飼養后期各試驗組與對照相比，料肉比均有所下降，其中，試驗Ⅱ組與對照相比，料肉比降低了9.92%，達到顯著性差異水平。

2.2 NCCE對肉雞屠宰性能的影響

由表3可知，各試驗組與對照相比，肉雞活質量均有所增加，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組較對照分別增加了3.23%和4.48%，達到顯著性差異水平;各試驗組與對照相比，肉雞的屠宰率均有所增加，但增加不顯著;各試驗組與對照相比，肉雞的全凈膛率均有所增加，其中，試驗Ⅲ組比對照增加了3.59%，達到顯著性差異水平;各試驗組與對照相比，肉雞的腹脂率均有所下降，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組較對照分別下降18.26%、21.58%和23.65%，達到顯著性差異水平。

表2 NCCE對肉雞日增質量和料肉比的影響Table 2 Effects of NCCE on the growth performance and feed conversion of broilers

表3 NCCE對肉雞屠宰性能的影響Table 3 Effects of NCCE on slaughter performance of broilers

2.3 NCCE對肉雞免疫器官指數的影響

由表4可知，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組與對照相比，肉雞的脾臟指數均有所增加，但增加不顯著;各試驗組與對照相比，法氏囊指數均顯著增加;各試驗組與對照相比，胸腺指數也有增加趨勢，其中試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ與對照相比差異顯著。

2.4 NCCE對肉雞血清免疫指標的影響

由表5可見，與對照組相比，試驗Ⅰ組和Ⅱ組均能不同程度地提高肉雞血清的免疫水平。其中血清IgG含量分別提高49.9%(P＜0.05)和63.8%(P＜0.05);血清IgM含量分別提高21.0%(P＞0.05)和68.0%(P＜0.05);血清IgA含量分別提高6.4%(P＞0.05)和0.4%(P＞0.05);血清補體C3含量分別提高0.2%(P＞0.05)和38.7%(P＜0.05);試驗Ⅰ組血清補體C4含量比對照提高27.2%(P＜0.05)，但試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組的含量呈下降趨勢;另外，試驗Ⅲ組的血清IgG、IgM和補體C3均呈下降趨勢，但與對照無顯著性差異。

表4 NCCE對肉雞免疫器官指數的影響Table 4 Effect of NCCE on immune organ index of broilers

2.5 NCCE對肉雞血清抗氧化水平的影響

由表6可以看出，對照肉雞血清SOD活性最低，試驗Ⅰ組次之，試驗Ⅱ組最高，試驗Ⅱ組比對照提高18.4%(P＜0.05)，對照、試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組的SOD活性無顯著差異;血清T-AOC活性Ⅱ組最高，對照最低，試驗Ⅱ組比對照提高了21.2%(P＜0.05)，添加NCCE各試驗組間差異不顯著(P＞0.05);添加NCCE各試驗組血清GSH-Px活性均高于對照(P＞0.05)，其中試驗Ⅱ組最高，比對照提高2.6%(P＞0.05);各試驗組肉雞血清MDA含量均低于對照，但無顯著差異。

表5 NCCE對肉雞血清免疫球蛋白及補體C3、C4的影響Table 5 Effects of NCCE on immunoglobulins，complements C3 and C4 in broilers sera

表6 NCCE對肉雞血清抗氧化水平的影響Table 6 Effects of NCCE on antioxidant levels in broilers sera

3 討論

3.1 NCCE對肉雞生產性能和屠宰性能的影響

試驗結果表明添加500 mg/kg的NCCE能顯著提高肉雞后期日增質量和飼料轉化率，顯著增加肉雞活質量，降低肉雞腹脂率。各試驗組與對照相比，肉雞的屠宰率有所增加，全凈膛率有所增加(P＜0.05)?？梢奛CCE對肉雞的產肉性能具有良好的促進作用，其機制可能與NCCE具有的廣泛生物學活性有關，NCCE含有黃酮及多酚類等活性物質，Afolabi研究結果［9］表明，黃酮類物質能明顯改變小鼠胃黏膜的損傷，對其具有保護作用;Yakubu等研究結果［10］表明，添加0.08%的十字花科植物西蘭花提取物(主要成分為黃酮及多酚類物質)對AA肉雞具有一定的促生長作用，這與本試驗的結果相類似?？梢娞砑覰CCE后，可能使肉雞的胃黏膜得到了保護，進而提高了營養物質的消化率和肉雞的生長速度。

3.2 NCCE對肉雞免疫指標的影響

免疫器官是動物有機體執行免疫功能的組織，是淋巴細胞和其他免疫細胞發生、分化、增殖和產生免疫應答的場所［11］。動物有機體免疫功能的強弱與免疫器官的發育有著密切的關系。本試驗結果表明，試驗組與對照相比能提高免疫器官指數，這說明NCCE可以有效提高肉雞免疫器官的發育，從而提高免疫器官指數，最終使機體的免疫力提高。Pattanaik等［12］報道，添加植物黃酮類物質，可顯著提高肉雛雞免疫器官指數。Fasscas等［13］報道，植物多酚可增加正常小鼠和免疫抑制小鼠的脾臟和胸腺質量?？梢?，不結球白菜活性提取物可以促進免疫器官的發育，抑制其細胞凋亡，提高機體抵抗力。

免疫球蛋白質是執行體液免疫，具有抗體活性的蛋白質，是衡量動物有機體免疫功能的重要指標［14］。本試驗結果表明，試驗組肉雞血清中IgG、IgM、IgA及補體C3、C4水平都有一定的提高，Milos等［15］通過研究五味子黃酮對小鼠免疫生成細胞的影響，發現五味子黃酮可使免疫球蛋白數量明顯增多;Sato等［16］報道黨參主要活性成分黨參多酚具有明顯的增強雛雞免疫功能的作用。NCCE可顯著提高肉雞血清中免疫球蛋白含量，從而使機體免疫力增強。本試驗高劑量組(試驗Ⅲ組)并未顯示顯著的促進作用甚至還有降低的趨勢，這可能與機體對NCCE的適應性有關。

3.3 NCCE對肉雞血清抗氧化能力的影響

SOD、GSH-Px是防御體系中清除H2O2的主要物質［17］，血清中SOD、GSH-Px活力間接反映了動物有機體清除自由基的能力，其活性越高，越有利于動物機體健康［18］。添加NCCE在一定程度上提高了血清中SOD、GSH-Px活力，可能是由于含有黃酮和多酚類等生物活性物質阻礙過氧化物的形成［19］。T-AOC可反映血清抗氧化系統功能情況，本試驗結果表明，各試驗組血清T-AOC活性均顯著高于對照，說明添加NCCE能提高肉雞血清的總抗氧化能力。有學者對NCCE進行體外抗氧化試驗，發現其多酚類物質有很強的抗氧化作用，而其他次要成分發揮著重要的協同作用［20］。MDA含量可反映機體脂質過氧化的程度即機體氧化損傷的程度［21］，本試驗中各試驗組肉雞血清MDA含量均低于對照，這可能是NCCE多種抗氧化成分進入循環系統最終在血清中表現出抗氧化活性的結果。

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