劉 君，丁 杰，何 巍，謝 歡，梁興勇

(四川理工學院化學與制藥工程學院，四川自貢 643000)

蟲草素又稱 3'-脫氧腺苷，由 Cunningham［1］于1950年第一次從蛹蟲草中分離得到。生物學研究發現蟲草素具有抗腫瘤、抑菌、抗病毒、消炎等［2］廣譜生物活性和藥理作用。近年來研究人員發現蟲草素可能具有增強人類免疫力［3］和清除因老齡化引起的體內自由基的功效［4］。另外，臨床上已有以蟲草素為主要成分的新藥用于白血病的治療［5］，應用前景良好，因此具有巨大的市場潛力。但是，蟲草素純品的獲得非常不易，因此國際市場上蟲草素的價格非常昂貴。

目前，蟲草素純品主要通過從人工培育的蛹蟲草中提取分離得到，操作繁瑣、制備成本較高［6］。為了大規模的獲取蟲草素用于生物活性研究，我們首先嘗試了對蟲草花進行分離，但是最終只獲得500 mg樣品，純度約93%。該方法成本太高，因此我們試圖通過化學合成的方法獲取蟲草素。

通過對骨架分析可知，蟲草素由一個3-脫氧的核糖和腺嘌呤進行糖苷化連接而成。目前文獻報道的蟲草素的化學合成工藝主要有兩種:一是以腺苷(1)為原料，通過將1的3'-位羥基溴代，接著用自由基還原去除3'-位的鹵素制備蟲草素［7］;二是利用木糖為原料通過多步基團保護，單獨裸露出3-位羥基，接著用自由基還原反應制得3-脫氧核糖，再與1進行糖苷化連接制得蟲草素［8］。

本文以1為原料［9］，經3步反應簡單快速地合成了蟲草素。即1與原乙酸三甲酯在醋酸作用下反應制得2'，3'-羥基原酸酯化的中間體(2)，接著加入乙酰溴，水解2'，3'-原酸酯，通過一鍋兩步法以40.5% 的收率制得 2'，5'-O-二乙酰基-3'-溴代腺苷(3);3在三丁基氫化錫和偶氮異二丁腈(AIBN)作用下經還原脫溴反應制得2'，5'-O-二乙酰基-3'-脫氧腺苷(4);4經水解去除糖環羥基上的乙酰基合成了蟲草素，3步總收率29.8%，純度＞95%，其結構經1H NMR和MS確證［7］。本文還重點對3的合成條件進行了優化。

Scheme 1

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

UV1900型雙光束紫外分光光度計;Bruker 400 MHz型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內標);Hitachi型高效液相色譜儀;5500 Q-Trap型液質聯用儀。

高效薄層層析板，青島海浪;柱層析用硅膠，200目～300目，青島海洋化工廠;Sephendex LH-20，北京綠百草公司;其余所用試劑均為分析純，愛斯特試劑公司，其中醋酸、甲苯和甲醇使用前經干燥和純化。

1.2 合成

(1)3的合成

在反應瓶中依次加入1 10.0 g(37.5 mmol)和冰醋酸75 mL，氮氣保護，水浴冷卻，攪拌下緩慢滴加原乙酸三甲酯14.4 mL(112 mmol)，滴畢;于室溫反應過夜(TLC檢測);冰水浴冷卻下反應15 min;緩慢滴加乙酰溴 7.6 mL(93.7 mmol)(30 min);升溫至20℃，反應6 h(TLC檢測)。低溫蒸去大部分乙酸和過量乙酰溴，殘余物用氯仿(80 mL)溶解，用飽和NaHCO3溶液調至pH 7～8，依次用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，蒸干溶劑后經硅膠柱層析［洗脫劑:A=V(DCM)∶V(MeOH)=15 ∶1］純化得黃色油狀物 3 6.26 g，收率40.5%;MSm/z:414，416{［M+H］+}。

(2)4的合成

在反應瓶中加入3 5.53 g(13.4 mmol)和無水甲苯67 mL，攪拌使其溶解;加入AIBN 0.44 g(2.68 mmol)，于室溫反應10 min;氮氣保護下滴加三丁基氫化錫 5.8 g(20.1 mmol)，滴畢;回流(110℃)反應2 h(TLC檢測)。傾入100 mL輕石油醚中(析出淡黃色固體)，過濾，濾餅用冰輕石油醚洗滌得4粗品3.87 g，收率87.0%，直接進行下步反應。

(3)蟲草素的合成［8］

在反應瓶中依次加入無水甲醇37 mL和4 640 mg(1.87 mmol)，攪拌使其溶解;回流反應3 h(TLC檢測)。緩慢冷卻至室溫，減壓濃縮后經Sephendex LH-20柱層析［洗脫劑:V(H2O)∶V(MeOH)=10∶1］純化得淡黃色固體蟲草素405 mg，收率 85.1%，Rf=0.3(展開劑:A=4 ∶1)，m.p.226 ℃ ～228 ℃，［α］20D- 35.2 °(c0.10，MeOH);UV-Vis(CH3OH)λmax:213，260 nm;1H NMR δ:8.36(s，1H，2-H)，8.15(s，1H，8-H)，7.30(s，2H，NH2)，5.87(d，J=6.0 Hz，1H，1'-H)，5.69(d，J=5.6 Hz，1H，2'-H)，5.19 ～5.17(m，1H，5'-OH)，4.57(s，1H，2'-OH)，4.34(s，1H，4'-H)，3.69 ～3.66(m，1H，5-Ha')，3.51 ～3.46(m，1H，5-Hb')，2.27 ～2.20(m，1H，3-Ha')，1.93～1.90(m，1H，3-Hb')(與文獻［8］值一致);MSm/z:274.1{［M+Na］+}。

2 結果與討論

2.1 合成

本文參照文獻方法通過兩步反應合成3:一是1的環化;二是乙酰溴開環。實驗中我們發現該反應雖然收率較好，但伴隨生成的副產物5(Chart 1)較多，很難分離純化。其次，第一步反應產物2在乙酸乙酯、二氯甲烷及乙醚中的溶解性均較差，只在氯仿中有一定的溶解度。因此，萃取時氯仿用量較大。此外，由于第二步反應中DMSO會干擾反應的進行(DMSO會和原位生成的HBr反應)，所以需要將其盡量除凈。文獻方法通過大量水洗和柱層析處理，后處理操作步驟較為繁瑣。在第二步溴解反應中，我們發現按文獻方法操作，3/5=4/1，選擇性不理想，給后處理分離純化帶來了較大困難。

Chart 1

2.2 反應條件優化

在1的原酸酯化反應中，為了克服現有方法的缺點，尋找更加合理的合成工藝，對反應的溶劑進行了篩選，考察不同溶劑對反應的影響，結果見表1。由表1可見，以 DMSO為溶劑時，2收率82%;以醋酸和DMF為溶劑時，收率較高，分別為72%和65%，且雜質較少，可以作為DMSO的替代溶劑;乙腈和二氯甲烷為溶劑時收率較低，不能作為替代溶劑。

在2的溴解反應過程中，考察了溶劑對反應的影響，結果見表2。首先參照文獻［9］方法以乙腈為溶劑時，以78%的收率獲得3和5的混合物，3/5=4/1［較文獻值(6/1)稍低］;嘗試以乙酸為溶劑，3和5總收率為63%，3/5最佳能達6/1。因此在進行溴解反應時，乙酸可作為較佳溶劑。

表1 溶劑對腺苷原酸酯化反應的影響*Table 1 Effect of the solvent on ortho-esterification

鑒于此，可將原酸酯化反應和溴解反應合并進行，反應以40.5%收率制得3和5，3/5=6/1。該方法提高了反應選擇性的同時也簡化了后處理程序。由于醋酸的沸點相對較低，因此可以在低溫下將乙酸和過量乙酰溴蒸餾出，大大簡化了后處理難度。但是反應選擇性一般，需進一步改進以利于工業化生產。

3 結論

以廉價易得的腺苷(1)為原料，經3步反應以29.8%總收率成功合成了具有抗腫瘤、抑菌、抗病毒活性的天然產物蟲草素。合成中間體2'，5'-O-二乙酰基-3'-溴代腺苷的最佳反應條件為:1 37.5 mmol，醋酸 75 mL(作為溶劑和催化劑)，將原乙酸三甲酯112 mmol在冰水浴條件下緩慢滴加入體系，于室溫反應過夜;冰浴條件下，將乙酰溴93.7 mmol在30 min內緩慢滴加入反應體系，于20℃反應6 h，收率40.5%。

該改進方法為蟲草素工業化合成提供了新的途徑。

［1］Cunningham K G，Manson W，Spring F S，et al.Cordycepin，a metabolic product isolated from cultures of Cordyceps militaris(Linn.)Link［J］.Nature，1950，166:949-951.

［2］Paterson R R.Cordyceps-A traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory?［J］.Phytochemistry，2008，69(7):1469 -95.

［3］Ng T B，Wang H X.Pharmacological actions of Cordyceps，a prized folk medicine［J］.Pharm Pharmacol，2005，57(12):1509 -1519.

［4］Jeong M H，Seo M J，Park J U，et al.Effect of cordycepin purified from Cordyceps militaris on Th1 and Th2 cytokines in mouse splenocytes［J］.J Microbiol Biotechnol，2012，22(8):1161 -1164.

［5］Ramesh T，Yoo S K，Kim S W，et al.Cordycepin(3'-deoxyadenosine)attenuates age-related oxidative stress and ameliorates antioxidant capacity in rats［J］.Exp Geronto，2012，47(12):979 -987.

［6］Kodama E N，Meeafrey R P，Yusa K.Antileukemic activity and mechanism of action of cordycepin against terminal deoxynucleotidyl transferase-positive(TdT+)leukemic cells［J］.Biochem Pharmacol，2000，59(3):273-281.

［7］王英娟，李多偉，王義潮，鄭婷婷.蛹蟲草中蟲草素、蟲草多糖綜合提取工藝研究［J］.西北植物學報，2005，25(9):1863 -1867.

［8］Robins M J，Wilson J S，Madej D Low，et al.Nucleic acid related compounds.88.Efficient conversions of ribonucleosides into their 2'，S'-anhydro，2'(and S')-deoxy，2'，3'-didehydro-2，3'-dideoxy，and 2，3'-dideoxynucleoside analogues［J］.J Org Chem，1995，60(24):7902-7908.

［9］Meier C，Huynh D T.Improved conversion of adenosine to 3'-deoxyadenosine［J］.Synlett，1991，4:227 -228.

［10］Kumar A，Khan S I，Manglani A，et al.Synthesis and antifungal activity of 3'-deoxyribonucleosides［J］.Nucleosides and Nucleotides，1994，13(5):1049-1058.

［11］Herdewijn P.Reaction of adenine nucleosides，tosylated in the carbohydrate moiety，with lithium triethylborohydride［J］.Tetrahedron，1989，45(20):6563-6580.

［12］Hansske F，Robins M J.Regiospecific and stereoselective conversion of ribonucleo sides to 3'-deoxynucleosides.A high yield three-stage synthesis of cordycepin from adenosine［J］.Tetrahedron Letters，1985，26(36):4295 -4298.

［13］Xiao Q，Li Q H，Yang R C.Total synthesis of cordycepin［J］.Chin J Org Chem，2013，33:1340.

［14］涂紅艷.從腺苷合成蟲草素的工藝研究［D］.杭州:浙江大學，2006.