氣質聯用測定杭白菊等3種中藥中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留

劉洪波

氣質聯用測定杭白菊等3種中藥中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留

劉洪波

（浙江農林大學 林業與生物技術學院，浙江 臨安311300）

采用濁點萃取反萃取樣品前處理方法，建立氣質聯用測定杭白菊Chrysanthemum morifolium，白術Atractylodes macrocephala和山茱萸Cornus officinalis中甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯等5種擬除蟲菊酯類農藥殘留量的測定方法。選用聚乙二醇6000作為濁點萃取的提取劑，異辛烷為反萃取劑，HP-5MS色譜柱為分析柱，氣相色譜質譜法進行檢測，外標法計算含量。結果表明：5種擬除蟲菊酯類農藥在15.00~2 000.00 μg·kg-1范圍內呈良好的線性關系，相關系數為0.955~0.999，檢出限為0.63~3.10 μg·kg-1，定量限為2.10~10.31 μg·kg-1。3種中藥的加標回收率為71.22%~91.00%，相對標準偏差（RSD）為3.20%~8.20%。該方法操作簡單、安全，可應用于杭白菊、白術、山茱萸中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留的檢測。圖4表4參19

杭白菊；白術；山茱萸；擬除蟲菊酯類農藥；氣相色譜-質譜聯用儀；殘留檢測

甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯等是一類擬除蟲菊酯類殺蟲劑，用于防治鱗翅目Lepidoptera和鞘翅目Coleoptera等多種農林業害蟲和衛生害蟲［1-2］。對擬除蟲菊酯類農藥的檢測一般采用氣相色譜法（ECD，FID），有時也用高效液相色譜法，較少用氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS）進行檢測［3-5］。現階段中藥中農藥最大殘留量沒有統一的標準，在此先參照GB2763-2012《食品中農藥最大殘留限量標準》中的有關數據。標準中規定了蔬菜、水果、茶葉等食品中這5種農藥的最大殘留量，甲氰菊酯的最大殘留范圍為0.10~5.00 mg·kg-1，高效氯氟氰菊酯為0.02~15.00 mg·kg-1，氯菊酯為0.10~ 20.00 mg·kg-1，氯氰菊酯為0.05~20.00 mg·kg-1，氰戊菊酯為0.02~3.00 mg·kg-1［6］。本研究采用濁點萃取-反萃取技術，選擇合適的色譜柱在GC-MS上對這5種農藥進行檢測，以期建立杭白菊Chrysanthemum morifolium，白術Atractylodes macrocephala，山茱萸Cornus officinalis等3種中藥中這5種農藥殘留的檢測方法。

1 材料與方法［7-19］

1.1 材料、儀器與試劑

供試材料杭白菊（花類藥材）、浙白術（根莖類藥材）、山茱萸（果實類藥材）均采自浙江農林大學中藥栽植基地。

5975C-7890A氣相色譜-質譜聯用儀（美國Agilent公司），HH-4數顯恒溫水浴鍋（中國國華電器有限公司），KQ-300E超聲波清洗器（中國昆山超聲儀器有限公司），CF16RXⅡ高速冷凍離心機（中國日本日立公司），FRESCO17高速冷凍離心機（德國Thermo公司）。

甲氰菊酯（99.4%，迪馬公司）；高效氯氟氰菊酯（99%，阿拉丁公司）；氯菊酯（99.5%，迪馬公司）；氯氰菊酯（99.0%，阿拉丁公司）；氰戊菊酯（99.0%，迪馬公司）；乙腈（色譜純，天津四友）；聚乙二醇6000（化學純，國藥集團化學試劑有限公司）；異辛烷（色譜純，阿拉丁公司）；硫酸銨（化學純，湖州湖試化學試劑有限公司）；超純水。

1.2 儀器條件

色譜條件：HP-5MS毛細管柱［30.00 m×250.00 μm×0.25 μm，（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷，非極性柱］；DB-5MS毛細管柱（30.00 m×250.00 μm×0.25 μm，苯基亞芳基聚合物，非極性柱）；DB-1701毛細管柱［30.00 m×250.00 μm×0.25 μm，（14%-氰丙基苯基）-二甲基聚硅氧烷，弱/中極性柱］；HPINNOWAX毛細管柱（30.00 m×250.00 μm×0.25 μm，聚乙二醇，強極性柱）；不分流、單錐型、無玻璃纖維型襯管；載氣為高純氦氣（＞99.999%）；進樣口溫度250℃；柱升溫程序：起始溫度90℃，恒溫1.0 min后以30℃·min-1升溫至230℃，恒溫1.0 min后以2℃·min-1升溫至280℃；進樣方式：不分流；進樣量1.00 μL。

質譜條件：連接處溫度為280℃；EI離子源，電子能量為70 eV，離子源溫度為230℃；掃描方式：全掃描，選擇離子檢測；溶劑延遲5.5 min；譜庫NIST08。

1.3 實驗方法

色譜柱優化及5種菊酯類農藥的檢出限、定量限等測定方法：把甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯等用乙腈溶解，混合液稀釋到10.00~4 000.00 μg·kg-1，取4 000.00 μg·kg-1溶液進行全掃描檢測，然后在4種類型的毛細管柱中選取分離度好的，選擇3種質量分數（10.00~ 15.00，500.00，2 000.00 μg·kg-1）進行選擇離子監測掃描（條件見表1），確定這5種菊酯類農藥的檢出限（S/N=3），定量限（S/N=10），線性關系和線性范圍，重復5次。

表1 5種擬除蟲菊酯類農藥的質譜條件（HP-5MS）Table 1 MS conditions of 5 pyrethroid pesticides（HP-5MS）

濁點萃取-反萃取實驗步驟（優化后）：稱取1.0 g已粉碎的中藥干樣于20.0 mL刻度試管中，加入1.5 g硫酸銨和5.0 mL體積分數為8%乙腈水溶液，充分混勻后置于超聲波清洗器中超聲1 h，過濾后用2.0 mL體積分數為8%乙腈水溶液沖洗殘渣，沖洗3次，合并濾液并置于離心管中，依次加入0.9 mL質量濃度為20%聚乙二醇6000水溶液和4.5 g硫酸銨，用體積分數為8%乙腈水溶液定容至15.0 mL，使聚乙二醇6000最終質量濃度分別為12.0 g·L-1，乙腈最終體積分數為8%，硫酸銨的最終質量濃度為40%，然后置于30℃水浴中保持30.0 min，最后以3 500 r·min-1離心10 min，用長細針頭的注射器吸出下部水相后留下表面活性劑富集相（＜0.5 mL）。用超純水把表面活性劑富集相稀釋至0.5 mL，加入0.2 mL異辛烷，超聲25.0 min后，取上層異辛烷相1.0 μL進氣相色譜-質譜聯用儀檢測。

2 結果與討論

2.1 色譜柱優化結果

按照1.3節中的實驗方法，取4 000.00 μg·kg-1混合溶液在HP-5MS，DB-5MS，DB-1701，HP-INNOWAX等4種毛細管柱上進行全掃描檢測，得到的總離子流圖見圖1~4。由圖1~4可知：5種擬除蟲菊酯類農藥在HP-5MS，DB-5MS毛細管柱上分離度較好，在HP-5MS柱上要優于DB-5MS柱上。HP-5MS是一款非極性通用柱，DB-5MS也是一款非極性柱，根據檢測物的特性，和檢測結果相符，但因HP-5MS柱效果優于DB-5MS柱，故選擇在HP-5MS柱上進行選擇離子檢測。

圖1 HP-5MS全掃描總離子流圖Figure 1 Totalion chromatogram of5 pyrethroid pesticides with HP-5MS by full scan

圖2 DB-5MS全掃描總離子流圖Figure 2 Totalion chromatogram of5 pyrethroid pesticides with DB-5MS by full scan

圖3 DB-1701全掃描總離子流圖Figure 3 Total ion chromatogram of 5 pyrethroid pesticides with DBv1701 by full scan

圖4 HP-INNOWAX全掃描總離子流圖Figure 4 Totalion chromatogram of5 pyrethroid pesticides with HP-INNOWAX by full scan

2.2 5種擬除蟲菊酯類農藥的檢出限、定量限、線性關系和線性范圍

取不同質量分數（10.00~15.00，500.00，2 000.00 μg·kg-1）的5種擬除蟲菊酯類農藥標準溶液按照1.2~1.3節中的檢測條件進樣，確定它們的最低檢出限（S/N=3），定量限（S/N=10），回歸方程和相關系數，具體見表2。其中氯菊酯中的同分異構體含量氯菊酯Ⅰ∶氯菊酯Ⅱ為1.00∶2.89；氯氰菊酯中的同分異構體含量氯氰菊酯Ⅰ∶氯氰菊酯Ⅱ∶氯氰菊酯Ⅲ∶氯氰菊酯Ⅳ為1.46∶2.32∶1.00∶1.42；氰戊菊酯中的同分異構體含量氰戊菊酯Ⅰ∶氰戊菊酯Ⅱ為2.36∶1.00。從表2可以看出：本研究中5種農藥的最低檢出限為0.63~3.10 μg·kg－1，定量限為2.10~10.31 μg·kg－1，線性范圍為15.00~2 000.00 μg·kg－1，相關系數R 為0.955~0.999，各項指標完全能夠滿足5種擬除蟲菊酯類農藥殘留分析檢測的要求，該方法是可行的。

表2 回歸方程、相關系數、最低檢出限和定量限Table 2 Regression equation,correlation coefficient,limit of detection and limit of quantitation

2.3 回收率與精密度

在1.0 g的中藥干樣中分別添加3種濃度50.00，100.00，500.00 μg·kg－1的混合標準溶液1.0 mL，充分混勻，按照1.3節中的實驗方法測定農藥回收率，同一個樣重復測定5次（n=5），結果見表3。從表3可以看出：杭白菊中5種擬除蟲菊酯類農藥的平均回收率（第1列）為75.02%~91.00%，相對標準偏差（RSD）（第1列）為3.2%~8.2%；白術中5種擬除蟲菊酯類農藥的平均回收率（第2列）為71.22%~ 86.23%，RSD（第2列）為3.5%~8.1%；山茱萸中5種擬除蟲菊酯類農藥的平均回收率（第3列）為72.03% ~89.22%，RSD（第3列）為3.2%~8.0%。

表3 加標農藥回收率（n=5）Table 3 Recoveries at spiked concentrations of 50.00－500.00 μg·kg－1

2.4 樣品分析

按以上的方法測定了市售的杭白菊、白術、山茱萸等樣品中的菊酯類農藥殘留，樣品中的菊酯類農藥質譜圖通過和標準品質譜圖比對，匹配度較高。杭白菊中檢出含有甲氰菊酯11.05 μg·kg－1，白術中檢出含有氯菊酯Ⅰ和氯菊酯Ⅱ，分別為3.57 μg·kg－1和10.31 μg·kg－1，山茱萸中未檢出。

表4 不同樣品中農藥殘留量Table 4 Pyrethroid pesticides residues in different samples

3 結論

本研究建立了濁點萃取反萃取-氣質聯用測定杭白菊、白術和山茱萸中甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯等5種擬除蟲菊酯類農藥殘留量的測定方法。該方法操作簡單安全，能夠滿足這3種中藥中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留的實際檢測。

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Five pyrethroid pesticide residues for three kinds of traditional Chinese medicines using GC-MS

LIU Hongbo
（School of Forestry and Biotechnology,Zhejiang A&F University,Lin’an 311300,Zhejiang,China）

Methods for residual determination by gas chromatography mass spectrometry （GC-MS）of five pyrethroid pesticides in Chrysanthemum morifolium,Atractylodes macrocephala and Cornus officinalis were established.Cloud point extraction-back extraction was used as sample pretreatment method,and PEG 6000 was used as an extraction agent,isooctane was used as a back-extractant,a chromatographic column HP-5MS was used as an analytical column.Content was calculated by the external standard method using GC-MS.Results showed a linear range from 15.00 to 2 000.00 μg kg-1with favorable correlation coefficients （r=0.955-0.999）. For the five pyrethroid pesticides,the limit of detection was 0.63-3.10 μg·kg-1and quantitation was 2.10-10.31 μg·kg-1.At spiked concentrations of 50.00-500.00 μg·kg-1,recoveries ranged from 71.22%to 91.00%. This proposed method can be applied to determine pyrethroid pesticide residues in Chrysanthemum morifolium, A.macrocephala,and Cornus officinalis.［Ch,4 fig.4 tab.19 ref.］

Chrysanthemum morifolium;Atractylodes macrocephala;Cornus officinalis;pyrethoid pesticide; GC-MS;residue detection

S567；TS207.5+3

A

2095-0756（2015）01-0110-06

浙 江 農 林 大 學 學 報，2015，32（1）：110-115

Journal of Zhejiang A＆F University

10.11833/j.issn.2095-0756.2015.01.016

2014-04-09；

2014-09-04

浙江省科技廳公益性技術應用研究（分析測試）項目（2013C37099）

劉洪波，實驗師，從事生物農藥、林木病蟲害防治等研究。E-mail：lhb@zafu.edu.cn