前列腺素F2α受體與子宮腺肌病痛經的相關性研究

馬榮麗，關 錚，劉愛軍，李 潔，李亞里，劉晉紅

解放軍總醫院，北京 1008531婦產科；2病理科

前列腺素F2α受體與子宮腺肌病痛經的相關性研究

馬榮麗1，關 錚1，劉愛軍2，李 潔1，李亞里1，劉晉紅2

解放軍總醫院，北京 1008531婦產科；2病理科

目的研究前列腺素F2α受體(prostaglandin F2αreceptor，PTGFR)在子宮腺肌病(adenomyosis，AM)患者子宮不同部位的表達與分布特征，探討其與子宮腺肌病痛經的相關性。方法采用免疫組化SP法檢測2013年10月- 2014年6月就診于我院的30例AM患者在位內膜組織及異位內膜組織PTGFR的表達，并和同期因子宮肌瘤行全子宮切除術且無痛經的30例患者正常子宮內膜組織作對照。通過視覺模擬評分法(visual analogue scale/score，VAS)對AM患者痛經程度進行評分，并分析其與PTGFR的相關性。結果PTGFR在AM在位內膜、異位內膜和對照組的正常子宮內膜的陽性表達率及表達強度差異均有統計學意義(P＜0.05)；PTGFR在不同的月經周期表達差異無統計學意義(P＞0.05)；AM在位內膜組及異位內膜組痛經程度與PTGFR的表達強度之間均存在正相關，相關系數分別為0.753 6(P＜0.01)和0.619 3(P＜0.01)。結論AM患者不同組織部位PTGFR的表達不同，痛經程度與在位內膜及異位內膜PTGFR的表達強度有關，PTGFR表達越強，痛經程度越嚴重。

前列腺素受體；子宮腺肌病；痛經

子宮腺肌病(adenomyosis，AM)是由于子宮內膜腺體及間質侵入子宮肌層引起的一種病變，進行性加重的痛經和月經量過多是其主要癥狀。PGF2α是一種強烈的血管收縮物質，高濃度的PGF2α作用于子宮螺旋小動脈壁上的前列腺素F2α受體(prostaglandin F2αreceptor，PTGFR)，引起子宮平滑肌痙攣性收縮。目前已明確PGF2α與原發性痛經及子宮內膜異位癥引起的繼發性痛經有密切關系[1]。對于PGF2α及PTGFR與子宮腺肌病痛經相關性的研究至今未見報道。本研究采用免疫組織化學方法檢測子宮腺肌病在位內膜、異位內膜和正常子宮內膜中PTGFR的表達強度，以探討PTGFR與子宮腺肌病痛經之間的關系。

對象和方法

1研究對象 選擇2013年10月- 2014年6月在解放軍總醫院婦產科因子宮腺肌病行全子宮切除術且未絕經的30例患者作為實驗組，術后均經組織病理學確診。年齡39 ～ 52歲，平均(45.23±3.65)歲。目前認為，子宮肌瘤的發病與女性性激素相關，此外亦有試驗表明，高水平雌激素可以促進子宮腺肌病的發生[2]，加之臨床上約50%子宮腺肌病患者合并子宮肌瘤[3]，故對照組選擇同期因子宮肌瘤行全子宮切除術且無痛經的30例患者，年齡33 ～ 50歲，平均(43.20±4.87)歲。實驗組與對照組年齡分布的差異無統計學意義(P＞0.05)。術前根據視覺模擬評分法[4](visual analogue scale/score，VAS)對AM患者的痛經程度進行評分，30例AM患者中，無痛經者6例，中度(4 ～ 6分)痛經者8例，重度(7 ～ 10分)痛經者16例。所有患者術前6個月內未使用過激素、激素受體拮抗劑或激動劑類藥物，并且不合并子宮內膜異位癥或巧克力囊腫。

2標本收集與處理 取患者腺肌病異位、在位內膜組織和對照組子宮內膜組織，用10%甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋、切片。每份標本常規蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察組織形態。子宮內膜侵入子宮肌層達1個低倍鏡視野以上時診斷為子宮腺肌病腺肌癥，所有入選病例均經2名病理科專家確診。入選腺肌病30例中增生期18例，分泌期12例，對照組子宮內膜組織30例中增生期18例、分泌期12例。所有石蠟標本經過篩選后進行4 μm厚連續切片備用。全部病例標本取材經過倫理委員會批準及患者知情同意。

3免疫組化檢測PTGFR 采用免疫組織化學方法檢測對照組和實驗組PTGFR，兔抗人PTGFR多克隆抗體購于美國Abnova公司，PV-6001二步法免疫組化檢測試劑盒由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。載玻片預先經APES防脫片處理，石蠟標本連續切片，厚度4 μm，每例組織石蠟塊切片3張，1張HE染色核實病理診斷，余2張行免疫組化染色。石蠟切片常規脫蠟浸水，蒸餾水洗2次；PBS沖洗3次；檸檬酸緩沖液(0.01 mol/L、pH= 6.0)煮沸(沸水浴)修復2.5 min；冷卻15 min，PBS洗3次，每次5 min；3%過氧化氫水溶液，室溫孕育15 min；PBS洗3次，每次5 min；滴加一抗兔抗人PTGFR多克隆抗體(1∶50)，4℃，過夜。次日復溫10 min，PBS沖洗3次，每次5 min；按照PV-6001二步法免疫組化檢測試劑盒說明滴加二抗，孵育37℃，40 min，PBS沖洗3次，每次5 min；避光條件下DAB顯色，鏡下觀察顏色變化，適時終止。自來水充分沖洗，蘇木精復染，脫水，透明中性樹膠封片。用子宮內膜樣腺癌組織作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

4陽性標準 細胞染色以細胞質和(或)胞核出現棕黃色顆粒為陽性反應，陽性判斷采用Sinicrope等[5]的改良法。200倍電子顯微鏡下隨機計數5個視野，分為4級：0分：染色細胞＜5%，1分：染色細胞5% ～ 25%，2分：染色細胞26% ～ 75%，3分：染色細胞＞75%。染色強度分為4級：0分：不顯色或顯色不清，1分：淺黃色，2分：棕黃色，3分：深棕色。每份切片記分=(染色細胞分數+染色強度分數)/2。所得分數＜0.5分為陰性(-)，反之為陽性。陽性結果根據得分值分為3個等級：0.5 ～＜1.5分為弱陽性(+)，1.5 ～＜2.5分為中度陽性(++)，≥2.5分為強陽性(+++)。結果判定在雙盲下進行，由2名病理科專家分別閱片、統計。

5統計學分析 采用SPSS17.0統計軟件進行統計分析，數據以±s形式表示。蛋白表達陽性率差異比較采用Pearson χ2檢驗，蛋白表達強度差異的比較采用秩和檢驗，不同痛經程度與PTGFR表達強度的相關性采用等級秩相關進行分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

1PTGFR的表達 PTGFR主要存在于在位內膜和異位內膜的腺上皮細胞中，子宮平滑肌細胞及血管內皮細胞也可見不同程度的表達，間質細胞未見表達，見圖1。PTGFR在AM在位內膜與異位內膜的陽性表達率分別為96.67%(29/30)、90%(27/30)；在正常子宮內膜組織中陽性表達率為76.67%(23/30)，陽性表達率差異均有統計學意義(χ2=23.936 7，P=0.000)；AM在位內膜、異位內膜和對照組子宮內膜的PTGFR的表達強度差異有統計學意義(Hc=20.372，P=0.000)。見表1。

圖 1 PTGFR在不同內膜腺上皮細胞中的表達(SP， ×400)Fig. 1 Expression of PTGFR in different endometrial glandular epithelial cells (SP, ×400)

2PTGFR在不同月經周期的表達 3組增殖期與分泌期PTGFR表達強度差異均無統計學意義，見表2。

3PTGFR的表達與痛經的關系 AM在位內膜組，痛經程度與PTGFR表達強度之間存在正相關(r=0.752 6，P＜0.01)；AM異位內膜組，痛經程度與PTGFR表達強度之間存在正相關(r=0.619 3，P＜0.01)。見表3。

表1 PTGFR在AM組和對照組的表達Tab. 1 Expression of PTGFR in AM group and control group

表2 PTGFR在不同月經周期的表達Tab. 2 Expression of PTGFR in different menstrual cycle

表3 PTGFR在不同痛經患者的表達Tab. 3 Expression of PTGFR in different dysmenorrhea patients

討 論

前列腺素(prostaglandins，PGs)是一組化學結構相似，具有廣泛生物活性的不飽和脂肪酸。PGs家族包括PGD2、PGE2、PGF2α、PGI2和TXA2，含量極微，但活性極強。子宮內膜是合成PGs的重要部位，在人類子宮內膜PGs的E2和F2α系列是主要的花生四烯酸產物，不同的類型PGs因結構上的差異，表現出不同的生理活性。PGE2有抑制子宮收縮作用；相反，PGF2α可刺激子宮收縮，使子宮張力升高。PGF2α合成后在細胞內不能儲存，迅速釋放于鄰近組織，與相應受體結合發揮作用后被迅速滅活[1]。

PGF2α通過PTGFR發揮其生物學作用，PTGFR屬于G蛋白偶聯受體，PGF2α與PTGFR結合，激活細胞內的信號轉導系統及基因轉錄，產生自分泌及旁分泌功能。活化的PTGFR屬于Gq蛋白，PGF2α通過與PTGFR作用誘導Ca2+內流或IP3內流，激活PKC信號系統使子宮平滑肌收縮[6-9]。

PGF2α通過刺激細胞生長因子的產生，進而促進內皮細胞及上皮細胞的增殖[10-12]。本研究通過采用免疫組織化學方法發現，PTGFR主要存在于在位內膜和異位內膜的腺上皮細胞中，子宮平滑肌細胞及血管內皮細胞也可見不同程度的表達，間質細胞未見表達。AM在位內膜、異位內膜和對照組子宮內膜PTGFR的陽性表達率及表達強度差異均有統計學意義，但PTGFR在不同的月經周期表達無差異。

早在20世紀70年代已有研究表明，PGF2α與原發性痛經有著密切關系[13-14]。隨后又有學者指出，PGF2α與子宮內膜異位癥導致的繼發性痛經也有密切關系[1]。本研究符合入組標準的30例AM患者中，痛經者占80%(24/30)，其中痛經患者中66.67%(14/24)服用過布洛芬等前列腺素合成酶抑制劑緩解痛經，有效緩解率為85.71%(12/14)。由此可以初步推斷，AM痛經與前列腺素的合成有關。本研究統計數據表明，痛經程度不同的AM患者PTGFR的表達強度不同，可以初步確定AM患者的痛經程度與在位內膜及異位內膜PTGFR的表達強度有關，PTGFR表達越強，痛經程度越嚴重。

由于子宮腺肌病病灶呈彌漫性生長，子宮切除術是循證醫學證實的治療子宮腺肌病痛經的唯一有效方法[2]。近年來，子宮腺肌病的發病趨勢逐年上升[15-16]，越來越多的絕經前患者難以接受子宮切除手術。本研究部分AM痛經患者服用前列腺素合成酶抑制劑類藥物對痛經有一定緩解作用，但由于該類藥物長期服用不良反應較大，難以被廣大患者接受。通過本文對PTGFR的表達強度與痛經關系的研究，我們設想PTGFR拮抗劑有可能作為一種新藥來緩解子宮腺肌病引起的痛經癥狀。或許一種攜帶PTGFR拮抗劑的宮內節育器應用于治療子宮腺肌病引起的痛經可以獲得滿意療效，我們期待更多相關方面的研究。

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Correlation between Prostaglandin F2αreceptor and dysmenorrhea in adenomyosis

MA Rongli1, GUAN Zheng1, LIU Aijun2, LI Jie1, LI Yali1, LIU Jinhong2

Department of Obstetrics and Gynecology;2Department of Pathology Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

GUAN Zheng. Email: GZ9332@ Aliyun.com

ObjectiveTo study the expression and distribution characteristics of the prostaglandin F2αreceptors (PTGFR) in patients with adenomyosis, and discuss the association between uterine adenomyosis dysmenorrheal and PTGFR.MethodsThe expression of PTGFR was measured in the endometrium tissue and ectopic endometrium tissue of 30 AM patients admitted to our hospital from October 2013 to June 2014 with immunohistochemical method, and it was compared with the expression of PTGFR in normal endometrial tissue of 30 uterine-fibroid patients in the same period. Visual analogue scale/score was used to test the dysmenorrhea score in patients with AM and its correlation with PTGFR was analyzed.ResultsThe difference of PTGFR among AM patients' endometrium tissue, ectopic endometrium tissue and the normal endometrium of the control group had statistical significance in the positive expression rate and expression intensity (P＜0.05); PTGFR expression in different menstrual cycle had no statistical significance (P＞0.05); there was positive correlation between the degree of dysmenorrheal and the expressed intensity of PTGFR in the endometrium tissue group and ectopic endometrium group with the correlation coefficient of 0.753 6 (P＜0.01) and 0.619 3 (P＜0.01) respectively.ConclusionDifferent tissue of patients with AM have different PTGFR expression, degree of dysmenorrhea is related to expression intensity of PTGFR in the endometrium tissue group and ectopic endometrium group, the more expressed intensity of PTGFR shows in AM patients, the higher degree of dysmenorrheal is.

prostaglandin receptors; adenomyosis; dysmenorrhea

R 711.71

A

2095-5227(2015)04-0355-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2015.04.015

時間：2015-01-04 11:31

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20150104.1332.005.html

2014-10-20

馬榮麗，女，在讀碩士，醫師。研究方向：子宮內膜異位癥、子宮腺肌病。Email: 498013207@qq.com

關錚，女，主任醫師，教授。Email: GZ9332@Aliyun.com