豬偽狂犬病的實驗室診斷及防控措施

徐霄妍，柴　磊，關(guān)婷婷，張　昕，韓　露

（1.河南省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 鄭州　450002；2.焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心；3.河南省畜牧總站）

豬偽狂犬病的實驗室診斷及防控措施

徐霄妍1，柴磊2，關(guān)婷婷2，張昕2，韓露3

（1.河南省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 鄭州450002；2.焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心；3.河南省畜牧總站）

1　豬偽狂犬病的臨床癥狀

仔豬發(fā)病主要表現(xiàn)為突然發(fā)病，病程一般在72h內(nèi)，死亡率幾乎100%，即仔豬出現(xiàn)體溫升高（41℃以上），呼吸困難，轉(zhuǎn)圈、鳴叫、痙攣、嘔吐、腹瀉、精神萎靡、運動不協(xié)調(diào)、步態(tài)不穩(wěn)、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運動，最后昏迷或因體溫下降而死亡。

育肥豬一般為隱性感染，癥狀相對較輕，易于恢復(fù)，發(fā)病時體溫升高、呼吸困難，生長延緩，一般不發(fā)生死亡，病愈后呈長期隱性感染帶毒或排毒。

種豬主要表現(xiàn)為不育癥，公豬睪丸炎，母豬返情，屢配不孕等。

妊娠母豬在初期，可在感染后的20d左右發(fā)生流產(chǎn)，妊娠后期經(jīng)常發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎，以產(chǎn)死胎為主，母豬產(chǎn)后可發(fā)生無乳和體溫升高。

2　實驗室培養(yǎng)和觀察

2.1病料處理

無菌采取病死仔豬的腦組織及扁桃體，研碎后用PBS液制成10%懸液或鼻咽洗液，經(jīng)2000rmp離心10 min，取上清液作為感染動物或細(xì)胞培養(yǎng)物的接種材料。

2.2細(xì)胞培養(yǎng)

將病料懸液的上清液接種于豬腎細(xì)胞或雞胚細(xì)胞，細(xì)胞接毒后逐日觀察細(xì)胞病變。細(xì)胞接毒后24～72h，出現(xiàn)細(xì)胞病變，細(xì)胞單層出現(xiàn)雙折光性細(xì)胞，逐漸增多，然后完全脫落，形成合胞體，其形態(tài)和大小各異。

2.3電鏡觀察

取病毒細(xì)胞培養(yǎng)物凍融后的離心上清液1滴，滴于蠟盤上。將被覆Formvar膜的銅網(wǎng)膜面向下放到液滴上，吸附2～3min，取下銅網(wǎng)，用濾紙吸掉多余的液體，再將該銅網(wǎng)放到pH值為7.0的2%磷鎢酸染色液上染色1～2min，取下銅網(wǎng)，用濾紙吸掉多余的染色液，干燥后放在電鏡下進(jìn)行觀察。病毒細(xì)胞培養(yǎng)物在電鏡下觀察，可見到典型的皰疹病毒粒子，病毒粒子的核心直徑約為75nm，核衣殼直徑105～110nm。

3　酶聯(lián)免疫方法檢驗

采用農(nóng)業(yè)部NY/T678-2003豬偽狂犬病免疫酶試驗方法，在包被板的待測樣品孔中每孔加入100ul待檢血清樣品，在陽性對照和陰性對照孔中每孔加入100ul對照血清，至室溫1h，棄去孔內(nèi)液體，并在紗布或吸水紙上拍干。然后用洗滌液將反應(yīng)板洗滌3～5次，每次洗滌后均棄去孔內(nèi)液體，最后一次洗滌后除凈孔內(nèi)液體并拍干。接下來，每孔加入100ul酶結(jié)合物溶液，室溫下作用20min，并重復(fù)棄去孔內(nèi)液體至拍干步驟。接下來各孔加入100ul底物液，室溫放置15min后，各孔加入50ul終止液，于酶標(biāo)儀650nm處測定吸光度（OD值）。經(jīng)檢驗，該血清樣品中含有偽狂犬病毒gE抗體。

4　防控管理措施

目前尚無治療PR的有效藥物。緊急情況下，用高免血清治療，可降低死亡率。

4.1消毒與隔離

豬圈和運動場用2%～3%氫氧化鈉或20%新鮮石灰水進(jìn)行消毒。如發(fā)現(xiàn)發(fā)病，至少連續(xù)2周對場區(qū)嚴(yán)格消毒并采取隔離措施，淘汰病豬并連續(xù)半年實行觀察，嚴(yán)格執(zhí)行購豬隔離觀察制度、消毒制度、免疫接種制度。防止購入種豬時帶入病原，注意隔離觀察，經(jīng)確認(rèn)購入種豬為健康時方可混群飼養(yǎng)。另外還要控制豬場人員流動，執(zhí)行登記制度。

4.2滅源與接種

鼠類是該病的主要傳染源，因此在豬場內(nèi)部要撲滅鼠類，杜絕傳染疫苗接種是防止PR發(fā)生和流行的重要措施，目前國內(nèi)主要應(yīng)用滅活苗和弱毒苗預(yù)防PR，具有良好的免疫效果。但滅活苗和弱毒苗只能降低接種豬的發(fā)病率和死亡率，不能阻止帶毒豬排毒。PR一旦傳入豬場就很難根治，在發(fā)生過PR的豬場，停止使用疫苗后又會引起該病發(fā)生。

4.3建立淘汰制度

建立淘汰制度即把所有成年豬進(jìn)行血清中和試驗，陽性者淘汰，以3～4周間隔，反復(fù)進(jìn)行，一直至兩次試驗全部陰性為止。母豬產(chǎn)仔斷乳后，盡快分開，隔離飼養(yǎng)，每窩仔豬均需與其他窩仔豬隔離。到16周齡，作血清學(xué)檢查，所有陽性豬淘汰，30d后再作血清學(xué)檢查，把陰性者合成較大群，最終建立新的無病豬群。□

S858.28+9.1

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1004-5090201504-0049-01

2015-03-25）