鉬藍(lán)比色法測定甜櫻桃中還原型VC含量的條件優(yōu)化

楊金鳳　黃玉琴　呼麗萍

摘要：采用鉬藍(lán)比色法測定甜櫻桃中還原型VC含量，探討了此方法的最佳測定條件。結(jié)果表明，鉬藍(lán)比色法的最大吸收峰為850 nm，5%硫酸溶液和5%鉬酸銨溶液的最佳用量分別為1.50 mL和3.00 mL，最適反應(yīng)時間為14 min，在此條件下測得R2為0.998 7。優(yōu)化后的測定方法變異系數(shù)小于5 %，平均回收率為98.52%，還原型VC含量在0.00～0.12 mg/50 mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。該方法準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定，適合少量和批量樣品的測定。用此法測得天水甜櫻桃樣品中的還原型VC的平均含量為2. 032 mg/100 g。

關(guān)鍵詞：鉬藍(lán)比色法；VC；甜櫻桃

中圖分類號：O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）01-181-03

目前，果蔬中還原型VC的測定方法很多，如高效液相色譜法[1-3]、熒光分光光度法[4-6]、原子吸收光譜法[7，8]、紫外分光光度法[9-11]、滴定分析法[12]、鉬藍(lán)比色法[13-15]等，其中，高效液相色譜法、熒光分光光度法和原子吸收光譜法要求樣品的純度較高，還需要有昂貴的儀器，無法應(yīng)用普及；紫外分光光度法中2，4-二硝基苯肼比色法操作麻煩，耗時較長；2，6-二氯靛酚法操作簡便且應(yīng)用最普遍，但是藥品價格昂貴，而且多數(shù)果蔬樣品提取液都有顏色，使滴定終點(diǎn)不易確定，有的即使用脫色劑也很難脫色完全，且造成VC的損失；碘量法需標(biāo)定碘液，比較麻煩、費(fèi)時。相比之下，鉬藍(lán)比色法操作簡便，不易受樣品提取液顏色的影響，在有偏磷酸存在下， 樣品中的還原性物質(zhì)對測定結(jié)果也無明顯影響，專一性較強(qiáng)，反應(yīng)迅速，反應(yīng)產(chǎn)物較穩(wěn)定。利用鉬藍(lán)比色法測定食品中還原型VC已有一些研究報道，但在實(shí)際應(yīng)用中，有些試驗(yàn)條件、特別是關(guān)于最大吸收波長的報道很不一致[16-18]，因此，本研究對測定的最大吸收峰、鉬酸銨和酸性介質(zhì)的用量以及反應(yīng)時間等條件作了進(jìn)一步的研究，確定了鉬藍(lán)比色法測定甜櫻桃中還原型VC的最佳實(shí)驗(yàn)條件。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

供試甜櫻桃樣品于2012年6月初采自天水師范學(xué)院植物園，品種為“美早”。

UV3010 紫外分光光度計(jì)（日本日立公司）；FA1004 電子天平（上海越平科學(xué)儀器公司）。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制 ①5%鉬酸銨溶液：準(zhǔn)確稱鉬酸銨25.00 g，加適量水溶解定容至500 mL；②草酸-EDTA溶液：草酸0.05 mol/mL、0.20 mol/mL EDTA，精確稱取草酸6.300 g（含結(jié)晶水），EDTA 0.058 4 g，充分溶解并定容到1000 mL；③5%鹽酸溶液：吸取5 mL的濃鹽酸稀釋至100 mL；④5%硫酸溶液：吸取5 mL的濃硫酸稀釋至100 mL；⑤5%硝酸溶液：吸取5 mL的濃硝酸稀釋至100 mL；⑥偏磷酸-醋酸溶液：搖動溶解15 g片狀偏磷酸于40 mL醋酸中，稀釋至500 mL，用濾紙過濾，取濾液備用；⑦標(biāo)準(zhǔn)VC溶液：準(zhǔn)確稱取60 ℃真空干燥2 h的VC 0.050 0 g，用上述配好的草酸-EDTA溶液定容于500 mL的容量瓶中，使標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度達(dá)到1 mg/mL；所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水均為去離子水。

1.2.2 樣品處理及測定方法 將樣品用去離子水洗凈后擦干、搗碎，準(zhǔn)確稱取10.00 g于研缽中，加入10 mL草酸-EDTA溶液，快速研磨成勻漿后轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶，用草酸-EDTA溶液定容后用高速冷凍離心機(jī)以10 000 r/min離心10 min，吸取10 mL的上清液于50 mL容量瓶中，加入1.00 mL的偏磷酸-醋酸溶液和2.00 mL的5%硫酸溶液搖勻后，再加入4.00 mL的鉬酸銨溶液，用去離子水定容至50 mL，15 min后以試劑空白為參照，在850 nm處測定。

1.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) ①最大吸收峰的選擇：準(zhǔn)確吸取1.00 mL的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 ml 容量瓶中用去離子水定容，然后以去離子水為空白置于1 cm石英比色皿中，在600～1 000 nm內(nèi)進(jìn)行連續(xù)光譜掃描，確定VC最大吸收峰；②鉬酸銨用量的選擇：分別吸取1.00 mL的標(biāo)準(zhǔn)VC溶液于50 mL容量瓶中，加入1.00 mL偏磷酸-醋酸溶液和2.00 mL 5%硫酸溶液，搖勻后分別加入1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5 mL鉬酸銨溶液，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測定，選出最適鉬酸銨用量；③硫酸用量的選擇：分別吸取1.00 mL的標(biāo)準(zhǔn)VC溶液于50 mL容量瓶中，加入1 mL偏磷酸-醋酸溶液，再分別加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL 5%硫酸溶液，搖勻后加入3 mL鉬酸銨溶液，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測定，分析酸度對反應(yīng)的影響，選出最適酸液的用量；④反應(yīng)時間的選擇：吸取1.00 mL的標(biāo)準(zhǔn)VC溶液于50 mL容量瓶中，加入1 mL偏磷酸-醋酸溶液和1.5 mL 5%硫酸溶液，搖勻后加入3 mL鉬酸銨溶液，放置2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 min后，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測定，考察時間對反應(yīng)的影響，選出最佳反應(yīng)時間；⑤精密度和回收率的測定：準(zhǔn)確稱取100 g甜櫻桃，再加入一定量的草酸-EDTA溶液，經(jīng)搗碎后移人50 mL容量瓶中定容、過濾，其上清液即為待測樣品的提取液。吸取2.00 mL的提取液，加入1.00 mL的偏磷酸-醋酸溶液，5 %的硫酸1.50 mL，搖勻后，加人3.00 mL鉬酸銨溶液，用去離子水定容至50 mL，14 min后，測定吸光度，平行測定6次。吸取2.00 mL的提取液加入標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL，其他試劑同上，定容到50 mL，14 min后測定吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收峰的選擇

吸收峰的大小決定著方法的靈敏度，只有選擇合適的波長，才能減少系統(tǒng)誤差，提高測定的準(zhǔn)確度。由圖1可知，隨著波長的增大，藍(lán)色絡(luò)合物的吸光度先上升而后呈下降趨勢，在850 nm處有最大吸收峰，故本試驗(yàn)選擇850 nm為測定波長。endprint

2.2 鉬酸銨用量的選擇

由圖2可知，隨著鉬酸銨用量的不斷增加，吸光度不斷增大，在3.00 mL左右達(dá)到最大值，大于3.00 mL后其吸光度略有下降，之后無明顯變化，說明過量的鉬酸銨對反應(yīng)并無多大的影響，因此鉬酸銨的最佳用量為3.00 mL。

2.3 酸度的選擇

由圖3可知，隨著硫酸用量的不斷增加，吸光度先呈直線增加，當(dāng)硫酸用量超過0.60 mL后，吸光度雖有增加，但增加幅度減緩，在1.50 mL達(dá)到最大值，之后吸光度又有所下降，但下降幅度不大，也就是說硫酸在1.00～3.50 mL時吸光度較穩(wěn)定。說明在此范圍內(nèi)有利于穩(wěn)定抗壞血酸，促進(jìn)鉬藍(lán)絡(luò)合物的生成，使顯色反應(yīng)進(jìn)行得比較徹底。但當(dāng)硫酸的用量超過3.50 mL后，吸光度下降很快。這可能是溶液中酸度過大，使抗壞血酸過于穩(wěn)定，從而減緩了顯色反應(yīng)， 不能使鉬酸銨充分顯色的原因。因此，本試驗(yàn)5%硫酸溶液的適宜用量為1.50 mL。

2.4 反應(yīng)時間的選擇

從圖4中可以清晰看出，在14 min之前，隨著時間的延長，吸光度在不斷增加，這是由于抗壞血酸與鉬酸銨的反應(yīng)不徹底，還沒有達(dá)到顏色的最大強(qiáng)度；在14 min時吸光度達(dá)到最大值，之后吸光度的連線近似直線，而且可以穩(wěn)定在14～20 min，也就是說，在此范圍內(nèi)吸光度非常穩(wěn)定，可以滿足測定時間的要求，這同李軍[14]研究相符。故本試驗(yàn)的最佳反應(yīng)時間為14 min。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在優(yōu)化的試驗(yàn)條件下，分別吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL的標(biāo)準(zhǔn)VC溶液于50 mL容量瓶中，加入1 mL偏磷酸-醋酸溶液和1.5 mL 5%的硫酸溶液，再加入3 mL鉬酸銨溶液后定容并搖勻，放置14 min后，以試劑空白為參照在850 nm處測定其吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)VC溶液的濃度（mg/50 mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制曲線，得回歸方程A850 nm=0.400 2 C，R2=0.998 7（圖5）。結(jié)果表明，VC濃度在0.00～0.12 mg/50 mL內(nèi)吸光度與VC含量呈良好的線性關(guān)系，服從比爾定律。

按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法對6個甜櫻桃樣品中還原型VC含量進(jìn)行測定，3次重復(fù)，最終測定了甜櫻桃還原型VC平均含量為2. 032 mg/100 g。

2.6 回收率試驗(yàn)

回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率為96.50%～100.69%（表1）。

3 小結(jié)與討論

通過試驗(yàn)確定了鉬藍(lán)比色法測定甜櫻桃中還原型VC的最佳條件，建立了一種簡便、快速、穩(wěn)定的測定甜櫻桃中還原型VC的方法，該法同樣適合其他果蔬中還原型VC的測定。

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