貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量測定

王建舫++穆祥

摘要：為建立一種高效液相色譜-紫外檢測法（HPLC-UV）測定貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量的方法。采用博納艾杰爾Venusil MP C18色譜柱 （150 mm×4.6 mm， 5 μm），以甲醇-1%磷酸（42：58）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長350 nm，柱溫25 ℃，結果表明金絲桃苷在0.025～0.25。mg/mL范圍內線性關系良好（r=0.999 5），平均加樣回收率為97.66%（n=6），峰面積的相對標準偏差（RSD）為2.68%。該方法專屬性強、重復性好，可用于貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量測定。

關鍵詞：貫葉連翹；金絲桃苷；高效液相色譜；含量測定

中圖分類號：853.7 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）12-0008-02

貫葉連翹（Hypericum performatum L.）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、調經活血、止血生肌、解毒消炎[1]。金絲桃苷（Hyperin）是貫葉連翹主要的有效成分之一，為黃酮醇苷化合物。本試驗采用高效液相色譜法對貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量進行了測定，建立了一種專一性強、重復性好的測定方法，以期為貫葉連翹提取物的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Alliance e2695型高效液相色譜儀；美國Millipore水純化系統；針筒式微孔濾膜過濾器（上海興亞凈化材料廠產品，孔徑0.22 μm）。

1.2 藥品與試劑

金絲桃苷（批號E-0193，購自上海同田生物技術股份有限公司）；貫葉連翹提取物，本實驗室自制；甲醇（色譜純，天津市光復精細化工研究所）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

博納艾杰爾Venusil MP C18色譜柱（5 μm， 150 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇-1%磷酸（42：58）；流速1.0 mL/min；檢測波長350 nm；柱溫25 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取金絲桃苷對照品10 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，制成濃度為1.0 mg/mL的對照品貯存液。精密吸取金絲桃苷對準品貯備液0.125、0.250、0.500、0.750、1.000、1.250 mL，分別放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的對照品工作溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 精密稱取貫葉連翹提取物80.0 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm濾膜過濾，取續濾液，即得提取物樣品溶液。

2.3 專屬性試驗

精密吸取濃度為0.100 mg/mL的金絲桃苷對照品溶液和樣品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，由色譜圖（圖1）知，在金絲桃苷對照品色譜相應的位置上，樣品溶液具有相同保留時間的色譜峰。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取濃度為0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的對照品溶液10 μL，自動進樣注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以金絲桃苷濃度（mg/mL）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，計算回歸方程y=22 613 825x+16 861，r=0.999 5，結果表明，在0.025～0.25。mg/mL范圍內，峰面積與金絲桃苷濃度呈良好的線性關系（圖2）。

2.5 精密度試驗

取濃度為0.100 mg/mL的金絲桃苷對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣10 μL，測定峰面積，結果峰面積的相對標準偏差（RSD）為1.25%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

按照“2.2.2”項下方法，重復配制6份貫葉連翹提取物樣品溶液，各取20 μL注入色譜儀，結果6份供試品峰面積RSD為2.33%，說明方法重復性良好。

2.7 溶液穩定性試驗

按照“2.2.2”項下方法，配制樣品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8和10 h進樣20 μL，測定峰面積，結果表明，金絲桃苷10 h內峰面積RSD為2.12%，表明樣品溶液在10 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已知金絲桃苷含量的貫葉連翹提取物約200 mg，平行制備6份，置10 mL棕色容量瓶中，分別加入對照品貯存液1.0 mL，按“2.2.2”方法制備6份樣品溶液，進樣10 μL注入色譜儀，計算加樣回收率。結果6份樣品平均回收率為97.66 %，RSD為2.68%，說明回收率良好。

2.9 樣品的測定

按“2.2.2”項下方法制備3份樣品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進樣10 μL，同時取濃度為0.050 mg/mL的金絲桃苷對照品進樣10 μL，按照“2.1”項下條件測定，以外標一點法計算貫葉連翹提取物中金絲桃苷的平均含量為0.26%。

3 小結

本試驗采用高效液相色譜-紫外檢測法測定了貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量，方法學考察證明該試驗中使用的方法良好，可以作為貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量測定的方法。

參考文獻：

[1] 王曉利，張俊松，羅 謙，等. HPLC法測定貫葉連翹藥材及提取物中金絲桃素的含量[J].中藥材，2006，29（10）：1047-1049.