淡黃花百合離體快繁技術(shù)研究

李 黛

(遵義師范學院生命科學學院，貴州遵義563002)

淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)為百合科百合屬多年生球根花卉，是我國衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用植物［1］。目前，淡黃花百合的繁殖一般采用分球繁殖法，該法繁殖系數(shù)低，繁殖速度較慢，每株百合一年僅能得到1～3個子球，且需要培育2～3年才能達到開花年齡，因此生產(chǎn)成本高。在生產(chǎn)中也可以采用鱗片扦插法進行繁殖，但扦插條件較難控制，若濕度小成活率較低，濕度過大又易腐爛，并且長期扦插繁殖極易導致病毒積累，嚴重影響百合的生長和品質(zhì)［2］。筆者曾經(jīng)也進行過鱗片扦插繁殖試驗，增殖倍數(shù)也不高［3］。組織培養(yǎng)技術(shù)則可以解決以上問題，但目前有關(guān)淡黃花百合組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的研究多以鱗片為外植體［4－9］，以珠芽為外植體的研究較少，張文娥等［10］用珠芽繁殖取得了較好的效果。筆者用正交試驗的方法探討了植物激素和蔗糖濃度對珠芽誘導形成的不定芽增殖培養(yǎng)的影響，旨在篩選出其不定芽增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1．1 材料 以貴州務(wù)川野生淡黃花百合的珠芽為試材。野生淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)采自貴州務(wù)川縣山坡疏林地，種植于遵義師范學院生命科學學院苗圃內(nèi)，于

2014年10月從生長健壯的淡黃花百合植株上剝?nèi)≈檠浚魉疀_洗30 min，于超凈工作臺上用75%乙醇消毒30 s后，再用0．1%的氯化汞消毒15 min，無菌水清洗5次以上，剝?nèi)ネ鈱喻[片后接種到1/2MS+0．1 mg/L IBA培養(yǎng)基上培養(yǎng)60 d，

轉(zhuǎn)接到MS+1．0 mg/L 6-BA+0．1 mg/L NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)至苗高2 cm左右備用。培養(yǎng)基pH 5．8，培養(yǎng)溫度25℃左右，光照時間12 h/d，光強1 200 lx。

1．2 方法 采用正交試驗篩選不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基，

研究激素和蔗糖濃度對淡黃花百合珠芽誘導形成不定芽增殖的影響。所用基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，正交試驗采用L9(34)正交試驗表，6-BA、NAA、KT、蔗糖濃度4因素3水平試驗設(shè)計見表1。

表1 L 9(34)正交試驗

將上述珠芽誘導形成的不定芽接種到上述9組培養(yǎng)基中，每瓶1株，接10瓶，重復3次，培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計不定芽的數(shù)量和生長情況，并進行方差分析。芽增殖正交試驗的培養(yǎng)條件與珠芽誘導不定芽的培養(yǎng)條件相同。

2 結(jié)果與分析

將珠芽誘導形成的不定芽接種到上述正交試驗的9組培養(yǎng)基上，60 d后進行觀察，絕大部分不定芽基部形成了大量的愈傷組織，部分不定芽產(chǎn)生了數(shù)量不多但較為粗壯的不定根。第1、5、7組培養(yǎng)基中不定芽的生長情況見圖1～3。

2．1 激素濃度對芽增殖的影響 由表2可知，在試驗濃度范圍內(nèi)，6-BA和NAA的濃度對不定芽增殖倍數(shù)的影響:隨著濃度的升高增殖倍數(shù)降低，即分別是0．5 mg/L ＞1．0 mg/L ＞1．5 mg/L 和0．05 mg/L ＞0．10 mg/L ＞0．20 mg/L，但6-BA的影響未達顯著水平，NAA的影響達到極顯著水平。KT對不定芽增殖倍數(shù)的影響在試驗濃度范圍內(nèi)則是0．2 mg/L最高，但當濃度低于0．1 mg/L后，增殖倍數(shù)明顯降低，影響達極顯著水平。不定芽誘導率則是在6-BA和NAA濃度均較低的第1組培養(yǎng)基和KT濃度較高(0．2 mg/L)的第5組和第7組培養(yǎng)基中較高，分別是90%、90%和100%。愈傷組織誘導率除在第9組培養(yǎng)基和不定芽增殖倍數(shù)較高的第1、第5組培養(yǎng)基中稍低(分別為80%、90%和91%)外，其余均為100%。

2．2 蔗糖濃度對芽增殖的影響 由表2可知，蔗糖濃度對不定芽增殖倍數(shù)的影響:試驗濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出一定的規(guī)律，即20 g/L ＞30 g/L ＞40 g/L，其影響達極顯著水平;對愈傷組織形成的影響則表現(xiàn)為在蔗糖濃度為20 g/L的第1組、第5組和第9組培養(yǎng)基中，誘導率均稍低，分別為90%、91%和80%，在蔗糖濃度為30 g/L和40 g/L的培養(yǎng)基中則均達到100%;但對不定芽誘導率的影響未表現(xiàn)出一定的規(guī)律。

表2 芽增殖L9(3)正交試驗結(jié)果

3 討論

該研究表明，當培養(yǎng)基中未添加KT時，較低濃度的6-BA(0．5 mg/L)和 NAA(0．05 mg/L)有利于不定芽的增殖(第1組試驗)，當添加0．2 mg/L的KT后，適當增加6-BA和NAA的濃度仍能獲得較好的增殖倍數(shù)(第5組和第7組試驗)，其中第7組試驗中6-BA濃度達到1．5 mg/L仍有較高的增殖倍數(shù)，可能是因為6-BA濃度對不定芽增殖的影響并未達到顯著水平。而第3組試驗雖然KT的濃度也達到0．2 mg/L，但增殖系數(shù)仍不高，可能是因為NAA的濃度過高，NAA濃度對不定芽增殖的影響達到極顯著水平，所以NAA濃度的增加對不定芽增殖的影響較大，當達到0．2 mg/L時，對不定芽增殖的抑制作用較明顯。

此外，在6-BA濃度為1．5 mg/L的第7組、第8組和第9組試驗中，未見玻璃化現(xiàn)象，其余幾組試驗都不同程度地出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，如何克服玻璃化現(xiàn)象有待進一步研究;除不含KT的第1組、第6組和第8組極少或沒有形成不定根外，其余幾組試驗都或多或少形成了一定數(shù)量的不定根，說明附加KT后，有利于不定根的分化。

綜上所述，利用淡黃花百合珠芽誘導形成的不定芽進行擴繁，在試驗范圍內(nèi)不加KT時，6-BA和NAA濃度分別以0．5 mg/L和0．05 mg/L為最佳，添加 KT后，6-BA 濃度可提高至1．5 mg/L，NAA 濃度可提高至0．10 mg/L，考慮到玻璃化現(xiàn)象，以及在蔗糖濃度為30 g/L的第7組培養(yǎng)基中仍能獲得較好的增殖倍數(shù)，筆者認為不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基應為:MS+1．5 mg/L 6-BA+0．05 ～0．10 mg/L NAA+0．2 mg/L KT+20～30 g/L蔗糖。

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