蜂蜜中果糖和葡萄糖含量測(cè)定問(wèn)題的研究

蒲曉亞，杜旭升，劉 泊，張 華

(1．甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)東部分中心，甘肅天水741000;2．天水維爾康蜂業(yè)科技有限公司，甘肅天水741022)

2011年4月，國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布GB 14963－2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)—蜂蜜》，其中理化指標(biāo)果糖和葡萄糖含量要求每100 g蜂蜜中不得少于60 g，檢驗(yàn)方法按GB/T 18932．22《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法—液相色譜示差折光檢測(cè)法》(簡(jiǎn)稱(chēng)液相色譜法)進(jìn)行測(cè)定。在SN/T 0852－2012《進(jìn)出口蜂蜜檢驗(yàn)規(guī)程》中，果糖和葡萄糖含量測(cè)定采用GB/T 18932．22規(guī)定的液相色譜法或GB/T 5009．7《食品中還原糖的測(cè)定》中規(guī)定的堿性酒石酸銅試液直接滴定法和高錳酸鉀滴定法，《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部337頁(yè)《蜂蜜》標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的還原糖測(cè)定采用堿性酒石酸銅試液直接滴定法(統(tǒng)稱(chēng)滴定法)。

1 2種測(cè)定方法的應(yīng)用及比較

液相色譜示差折光檢測(cè)法測(cè)定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量是比較先進(jìn)的檢測(cè)方法，精度高、檢出限低，結(jié)果相對(duì)比較準(zhǔn)確，是我國(guó)秦皇島出入境檢驗(yàn)檢疫局于2003年參考加拿大相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)提出制定的。但該方法使用的儀器比較昂貴，尤其是示差折光檢測(cè)器目前主要以進(jìn)口為主，另外標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)尤其是果糖偶爾在國(guó)內(nèi)可以買(mǎi)到，而且價(jià)格不菲，因此沒(méi)能得到大范圍的應(yīng)用。最近幾年，在國(guó)內(nèi)的一些有條件的公立檢測(cè)及仲裁機(jī)構(gòu)開(kāi)始使用液相色譜法測(cè)定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量。

滴定法技術(shù)要求低，簡(jiǎn)單易行，容易操作，成本低廉，多年來(lái)大部分檢測(cè)單位、蜂產(chǎn)品收購(gòu)加工企業(yè)及蜂產(chǎn)品專(zhuān)業(yè)協(xié)會(huì)等都是采用堿性酒石酸銅試液直接滴定法或高錳酸鉀滴定法測(cè)定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量。但滴定法在檢出限度、準(zhǔn)確度、精密度及系統(tǒng)誤差方面較液相色譜法有較大的差異。

2 2種檢測(cè)方法下的測(cè)定結(jié)果分析

最近，人們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)液相色譜法和滴定法測(cè)定出的蜂蜜中果糖和葡萄糖含量，在結(jié)果上存在較大的差異性，接近10%，為了驗(yàn)證2種方法的差異性，筆者利用相同的樣品，按照2種不同的檢測(cè)方法進(jìn)行了檢測(cè)試驗(yàn)對(duì)比。

2．1 樣品來(lái)源及選擇 分別選取產(chǎn)于甘肅天水、隴南、平?jīng)龅貐^(qū)的洋槐蜜、油菜蜜及棗花蜜各樣2個(gè)，編號(hào)分別為Y1、Y2、Y3、Y4、Z5、Z6。

2．2 檢測(cè)方法Ⅰ(堿性酒石酸銅試液直接滴定法)

2．2．1 A液。取硫酸銅結(jié)晶6．93 g加水使溶解成100 ml。

2．2．2 B液。取酒石酸鉀鈉結(jié)晶34．60 g與氫氧化鈉10．00 g加水使溶解成100 ml。

2．2．3 堿性酒石酸銅試液的標(biāo)定。取葡萄糖約0．50 g，于105℃干燥至恒重，精密稱(chēng)定，置100 ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻。另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml(A液和B液各10 ml混合)，置錐形瓶中，加熱并保持在微沸的情況下，用上述葡萄糖溶液滴定至溶液的藍(lán)色幾乎消失，再繼續(xù)沸騰1 min，加1%亞甲藍(lán)溶液1滴，仍在微沸狀態(tài)下，繼續(xù)緩緩滴定至溶液的藍(lán)色消失，預(yù)測(cè)得所需葡萄糖溶液的容積(ml)。再另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml，自滴定管中加上述葡萄糖溶液滴定至終點(diǎn)前約剩1 ml。照上述預(yù)滴定的方法，自“加熱并保持在微沸的情況下”起，依法滴定。根據(jù)滴定結(jié)果算出每1 ml堿性酒石酸銅試液相當(dāng)于無(wú)水葡萄糖的重量即得。

2．2．4 樣品測(cè)定。取蜂蜜樣約1．00 g，精密稱(chēng)定，置250 ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，移置滴定管中。按照上述“2．2．3”堿性酒石酸銅試液的標(biāo)定，自“另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml”起，依法滴定，并將滴定結(jié)果按下式計(jì)算:

2．3 檢測(cè)方法Ⅱ(液相色譜示差折光檢測(cè)法)

2．3．1 檢測(cè)儀器。LC-P310高效液相色譜儀，配置德國(guó)產(chǎn)R1-201H型示差折光檢測(cè)器。

2．3．2 色譜條件。色譜柱為L(zhǎng)C-CT310型碳水化合物分析柱10μm，310 mm×3．9 mm。流動(dòng)相為乙腈+水(65+35);流速為1．0 ml/min;柱溫25℃;檢測(cè)器池溫35℃;進(jìn)樣量10 μl。

2．3．3 果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品。果糖標(biāo)準(zhǔn)品(01-133)-120318，葡萄糖(110833)-20100422，含量均大于等于99%，均來(lái)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

經(jīng)歷了1 9 7 9年那個(gè)冬天，殷燕才知道真的戰(zhàn)場(chǎng)遠(yuǎn)比《英雄兒女》里更糟糕。2月2 7日晨，東線(xiàn)最關(guān)鍵的諒山戰(zhàn)役開(kāi)始。有一個(gè)河南開(kāi)封的兵李民，高個(gè)，白凈，愛(ài)說(shuō)愛(ài)笑，會(huì)拉手風(fēng)琴，醫(yī)院的女孩兒們都喜歡和他搭腔聊天，與殷燕相熟。“2月2 8日那天，從6 5 0高地上抬下來(lái)許多尸體。大家都在忙著工作，一個(gè)女兵突然驚呼：這不是李民嗎！頭的一半已被炮彈炸飛，軍裝被血浸透，擔(dān)架里都是血水。要不是拿出他左上兜能夠證明身份的生死牌，誰(shuí)也不知道他就是李民。”殷燕回憶。

2．3．4 果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液及工作液的制備。分別配制成含果糖 9．80、14．70、19．60、24．50、29．40 g/L;葡萄糖 7．60、11．40、15．20、19．00、22．80 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。

2．3．5 樣品測(cè)試液制備。取蜂蜜約5 g于100 ml燒杯中，精密稱(chēng)定，加20 ml水充分溶解，轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中，再用15 ml水分3次洗滌燒杯并轉(zhuǎn)移至前述容量瓶中，用乙腈定容至容量，混勻。用0．45μm濾膜過(guò)濾供液相色譜測(cè)定。

2．3．6 液相色譜測(cè)定。將不同濃度的果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入液相色譜，以峰高為縱坐標(biāo)，工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)，樣品測(cè)試液同條件等體積進(jìn)樣測(cè)定，取得的峰高在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)上比較讀取被測(cè)組分溶液的濃度。按前述步驟同一樣品做平行試驗(yàn)及空白試驗(yàn)。

2．3．7 結(jié)果計(jì)算。果糖、葡萄糖含量計(jì)算公式如下:

式中，C為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)上讀取被測(cè)組分溶液的濃度(g/L)。

2．4 測(cè)定結(jié)果分析比較 從表1檢測(cè)結(jié)果可以看出，隨機(jī)選取的6個(gè)蜂蜜樣品，利用滴定法測(cè)定蜂蜜中還原糖含量，結(jié)果均在60%以上，符合GB 14963蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，如果用液相色譜法測(cè)定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量，結(jié)果有3個(gè)(Y1、Z5、Z6)低于 60%，不符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，其他 3 個(gè)(Y2、Y3、Y4)雖然符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但整體含量下降。滴定法測(cè)得的還原糖含量最低的為62．4%(Z5)，最高的為75．3%(Y4)，而液相色譜法測(cè)定的果糖和葡萄糖含量最低的為52．2%(Z5)，最高的為66．0%(Y4)，2種方法測(cè)定結(jié)果差異最大的為10．2%，差異最小的為8．8%，液相色譜法比滴定法測(cè)出的結(jié)果平均下降了約9．5%。

表1 2種測(cè)定方法結(jié)果分析 %

3 分析與討論

蜂蜜的主體成分是糖類(lèi)物質(zhì)，約占蜂蜜總量的75%，其中葡萄糖和果糖含量最高，占蜂蜜總糖的85% ～95%，其次是蔗糖占蜂蜜總量的1% ～5%，另外還含有少量的麥芽糖、曲二糖、松三糖、棉子糖和糊精等糖類(lèi)，共達(dá)23種之多，就不同的檢測(cè)方法結(jié)果存在較大差異，進(jìn)行以下分析。

滴定法測(cè)定蜂蜜中的糖，嚴(yán)格來(lái)說(shuō)測(cè)定的是蜂蜜中的還原糖，而不是果糖和葡萄糖純單體。葡萄糖本身具有還原性，果糖在強(qiáng)堿性加熱條件下具有還原性，但是其他同分異構(gòu)糖在強(qiáng)堿性加熱條件下也可能具有還原性。

蜂蜜中的其他糖類(lèi)，在強(qiáng)堿性加熱條件有可能發(fā)生分解或其他化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生醛基，具備還原性，當(dāng)利用滴定法測(cè)定時(shí)也被一并檢出。

由于蜂蜜來(lái)源的植物種類(lèi)、地域環(huán)境、蜜蜂品種等不同，其化學(xué)成分、糖類(lèi)的種類(lèi)及含量也存在一定的差異。

根據(jù)以上情況，2種不同檢測(cè)方法測(cè)定蜂蜜中糖的含量存在較大差異，是完全有可能的。

4 結(jié)論與建議

此次研究試驗(yàn)，由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有限，測(cè)定的樣品數(shù)量不多，不具備代表性。如要真正驗(yàn)證蜂蜜中糖類(lèi)檢測(cè)的差異性，完善蜂蜜中糖類(lèi)的檢測(cè)方法，修訂國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，還需要收集大量的樣品，進(jìn)行全方位的大量試驗(yàn)和驗(yàn)證。但是，筆者發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題如果能引起蜂產(chǎn)品行業(yè)及有關(guān)部門(mén)的注意，可在標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行、日常檢測(cè)中做進(jìn)一步的研究和探討。

目前大部分蜂產(chǎn)品收購(gòu)加工企業(yè)及專(zhuān)業(yè)協(xié)會(huì)，如果還利用滴定法測(cè)定蜂蜜中的還原糖含量，如果還原糖含量在60%～70%，雖然符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但到利用液相色譜法測(cè)定的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，測(cè)出的結(jié)果有可能會(huì)低于60%，不符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。因此希望蜂產(chǎn)品行業(yè)的同行們密切注意，嚴(yán)格控制。

建議國(guó)家相關(guān)檢測(cè)研究部門(mén)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定部門(mén)，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定時(shí)，能夠充分考慮基層、一線(xiàn)企業(yè)的實(shí)際情況，參考《中國(guó)藥典》中同類(lèi)產(chǎn)品的一些檢測(cè)方法，盡可能使標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)、簡(jiǎn)單、通用、易于操作、便于推廣、成本低廉、普及性強(qiáng)，并能保障食品質(zhì)量的安全可靠。如果一味地追求高、精、深、難或引用國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，不考慮我國(guó)的實(shí)際國(guó)情，無(wú)疑給企業(yè)、基層一線(xiàn)造成實(shí)際困難，如果企業(yè)和國(guó)家檢測(cè)仲裁機(jī)構(gòu)的檢測(cè)結(jié)果不一致，致使企業(yè)無(wú)所適從，造成不必要的損失。

［1］衛(wèi)生部．食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):蜂蜜:GB 14963 －2011［S］．北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012．

［2］龐國(guó)芳，曹彥忠，李子健，等．蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法液相色譜示差折光檢測(cè)法:GB/T 18932．22［S］．北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004．

［3］楊大進(jìn)，常迪，趙馨，等．食品中還原糖的測(cè)定:GB/T 5009．7 －2008［S］．北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009．

［4］中華人民共和國(guó)浙江省出入境檢驗(yàn)檢疫局．進(jìn)出口蜂蜜檢驗(yàn)規(guī)程:SN/T 0852 －2012［S］．北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013．

［5］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:337．