抗癲癇西藥藥物成分的血藥濃度監測

呂雪城

[摘要] 目的 探討高效液相色譜測定人體托吡酯血藥濃度的方法與效果。 方法 選擇Agilent 1100高效液相色譜儀測定人體血漿中的托吡酯的濃度。 結果 托吡酯的線性方程為Y=6.25×10-4X+1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL，提取回收率為92.1%，在血漿中的平均濃度為0.260?g/mL。 結論 高效液相色譜測定人體血漿中的托吡酯的濃度方法簡單、可行、靈敏度高，具有良好的回收率。

[關鍵詞] 托吡酯；血藥濃度；高效液相色譜

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）24-81-02

The blood concentration monitoring for antiepileptic medicine- topiramate

LV Xuecheng

Shangqiu City First People's Hospital， Shangqiu 476000，China

[Abstract] Objective To investigate the ways and effects of HPLC for detecting human plasma concentration of topiramate. Methods Used the Agilent 1100 HPLC to detect human plasma topiramate concentrations. Results Topiramate linear equation was Y=6.25×10-4X+1.08×10-2， the linear range was 0.05-10.00μg/mL， extraction recovery was 92.1%， while the average plasma concentration was 0.260 μg/mL. Conclusion HPLC determination of human plasma topiramate is simple， practical， high sensitivity that has good recovery.

[Key words] Topiramate； Plasma concentration； HPLC

癲癇是最常見的神經疾病之一，患病率為6‰左右，當前隨著我國癲癇發病率的增高，越來越多的人被癲癇困擾，長期不治愈可伴隨有嚴重的身心后果，其常伴有記憶、學習、行為等認知功能障礙[1]。在藥物治療中，當前應用比較多的是托吡酯，托吡酯可增強抑制性神經遞質作用來發揮治療效果[2]。不過在托吡酯被吸收后，如何進行血藥色譜濃度測定就值得探討[3]。本研究采用高效液相色譜測定了人體血漿中托吡酯的濃度，現報道如下。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

托吡酯及內標金剛烷胺的標準品購自西安楊森制藥有限公司和中國藥品生物制品檢定所，純度均大于99%；甲醇、乙腈為色譜純（北京化工分公司），水為雙蒸超純水，乙腈、乙酸、丙酮、三乙胺等其他試劑均為分析純，血漿樣品來自健康受試者，血漿樣品保存在-40℃的冰箱。

1.2 儀器

超級恒溫水浴鍋購自本地區儀器廠，HHS型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（武漢市琴臺醫療器械廠），CS101型電熱鼓風干燥箱（重慶試驗設備廠）。Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司），TG16G臺式高速離心機（上海生物工程有限公司），BS110型電子天平（北京三博醫藥有限公司），RE52AA旋轉蒸發儀（上海生物工程儀器廠），WH-2微型渦旋混合儀（滬西分析儀器廠有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜與質譜條件

選擇Ultimate C18分析色譜柱（250mm× 4.6mm，5?m）；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH=5）；柱溫25℃；流速是1.0mL/min；柱溫：35℃；熒光檢測器檢測波長為315nm，激發波長為260nm。

2.2 標準溶液的制備

托吡酯標準溶液：稱取0.50g托吡酯標準品，置于50mL容量瓶中，用1∶1的甲醇-水溶解并定容至刻度，從而得到10.0mg/mL托吡酯標準溶液。內標溶液：稱取金剛烷胺12.0mg，溶解方法同托吡酯標，得240.0?g/mL的內標溶液。

2.3 樣品的制備

移取血漿樣品0.5 ～ 1.5mL的EP管中，加入0.5mL丙酮和10?L內標金剛烷胺，混合后以12 000r/min離心10min，轉移上清液0.8mL至另外的EP管中，加入10?L異硫氰酸苯酯和5?L三乙胺，混勻后進行60℃的恒溫水浴中衍生反應1h，然后吹干，再用200?L的流動相重復上述步驟，進樣20?L分析。

2.4 標準曲線的繪制

將托吡酯標準溶液用血漿進行梯度稀釋成托吡酯濃度分別為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00?g/mL的樣品，然后以托吡酯的峰面積與內標的峰面積比值（Y）為縱坐標，以濃度（X）為橫坐標作加權線性回歸，計算得到托吡酯的線性方程為：Y=6.25×10-4X +1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL。

2.5 回收率計算

分別用空白血漿和水配制兩組低、中、高三個濃度水平的托吡酯，每種濃度平行制備3份，然后計算得到的托吡酯和內標的提取回收率分別為92.1%和85.2%。

2.6 準確度與精密度計算

采用同樣方法配制低、中、高三種濃度水平，每個濃度水平下平行處理3份，其中日間緊密度則要連續考察3d，日內精密度將配制的低、中、高溶液連續進樣分析。實驗結果顯示日內和日間精密度的RSD分別為4.4%和4.5%。endprint

2.7 濃度計算

分別精密吸取不同的血漿樣品，制備樣品溶液，每批樣品進樣3次，根據外標法計算3批血漿樣品中的托吡酯的含量，結果見表1。其平均濃度為0.260?g/mL。

3 討論

癲癇患者常伴有認知功能損害，是多因素綜合作用的結果。雖然癲癇預后比較差，但是治療方法比較多[4-5]。多選擇抗癲癇藥物來控制癲癇，目前臨床上常用抗癲癇藥物都是經過長期大量反復臨床試驗的來的，每種藥物有效率都在70%～80%以上[6-7]。其中托吡酯是結構全新的新一代抗癲癇藥，臨床應用安全有效。其可以增強部分電壓門控及鈣門控鉀離子通道電流；增加非苯二氮類γ-氨基丁酸α受體亞型介導的氯離子內流；阻斷電壓門控鈉離子通道，阻斷L型高電壓門控鈣離子通道[8-9]。

在生物樣品的血藥濃度分析中，高效液相色譜具有高精確性、高靈敏度、高選擇性的特點，已成為當代最重要的分離分析方法之一[10-13]。本研究托吡酯在240nm和260nm處均有最大吸收，但240nm處干擾物質比較多，故本實驗的檢測波長設為260nm。本研究經過液相色-質譜聯用分析，得到托吡酯的線性方程為Y=6.25×10-4X+1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL。托吡酯的提取回收率為92.1%，在日內和日間精密度的RSD分別為4.4%和4.5%，在血漿中的平均濃度為0.260?g/mL。

總之，高效液相色譜測定血人體漿中托吡酯的濃度方法簡單、可行、靈敏度高，具有良好的回收率、準確度和精密度。

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（收稿日期：2014-10-17）endprint