DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預后評估中的價值

孔繁靜(湖北省荊州市第二人民醫院消化內科 434000)

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DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預后評估中的價值

孔繁靜(湖北省荊州市第二人民醫院消化內科 434000)

目的 研究胃鏡活檢組織Dickkopf相關蛋白(DKK-3)基因甲基化在胃癌病情及預后評估中的價值。方法 采用甲基化特異性聚合酶鏈反應檢測胃癌患者腫瘤組織、癌旁正常組織及健康人胃鏡活檢組織的DKK-3基因甲基化，比較不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化的差異，分析3年生存率與DKK-3基因甲基化的關系。結果 觀察組研究對象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和健康對照組研究對象正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常組織和健康對照組研究對象正常組織差異無統計學意義(P>0.05)。觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在性別、年齡、病變部位、肉眼形態、幽門螺桿菌感染和病理類型中差異無統計學意義(P>0.05)，在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移、遠處轉移和TNM分期中差異有統計學意義(P<0.05)。DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 胃癌患者胃鏡活檢組織DKK-3基因甲基化率越高則病情越重、預后越差，可作為胃癌病情及預后評估的標志物。

胃癌； 胃鏡； Dickkopf相關蛋白； 病情； 預后

胃癌的發病機制與基因表達異常密切相關，其中甲基化導致抑癌基因表達沉默是目前研究的熱點，有研究表明其可作為胃癌病情及預后評估的標志物[1-2]。Dickkopf相關蛋白3(DKK-3)具有抑制細胞增殖的作用,在越來越多的腫瘤中可檢測到其表觀遺傳學改變[3]。本研究檢測胃癌患者和健康人胃鏡活檢組織DKK-3基因甲基化，研究DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預后評估中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在研究選擇2009年1月至2011年6月在本院胃鏡檢查的胃癌患者作為研究對象(觀察組)，入選標準：(1)經癥狀體征、CT增強、胃鏡和(或)手術切除標本病理學檢查確診為胃癌；(2)首次診治患者，排除既往行手術、放療和化療及合并其他腫瘤。觀察組研究對象80例，男46例，女34例；平均年齡(53.5±5.9)歲。另選擇同期健康體檢的80例健康人為對照(對照組)，男45例，女35例；平均年齡(53.2±5.4)歲。兩組研究對象性別和年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 DKK-3基因甲基化檢測 觀察組胃癌患者取腫瘤組織和癌旁正常組織，對照組健康人取正常胃黏膜。采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(PCR)檢測觀察組胃癌腫瘤組織和癌旁正常組織、對照組健康人胃黏膜DKK-3基因甲基化，采用Methyl Primer Express v1.0設計引物，引物序列見表1。PCR循環條件為：95 ℃預變性10 min，95℃變性45 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共28個循環，最后一輪72 ℃延伸8 min。最后PCR產物行瓊脂糖凝膠電泳顯影。

表1 MSP檢測DKK-3基因甲基化引物序列

1.3 統計學處理 采用SigmaPlot12.0進行統計學分析。觀察組胃癌患者DKK-3基因甲基化在不同臨床病理因素中的差異采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 DKK-3基因甲基化 觀察組研究對象腫瘤組織中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率為52.5%，癌旁正常組織中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率為1.3%，對照組研究對象未檢測到DKK-3基因甲基化，甲基化率為0.0%，觀察組研究對象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和對照組研究對象正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常組織和對照組研究對象正常組織差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 DKK-3基因甲基化與臨床病理因素的關系 見表2。觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在性別、年齡、病變部位、肉眼形態、Hp感染和病理類型中差異無統計學意義(P>0.05)；在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移、遠處轉移和TNM分期中差異有統計學意義(P<0.05)。腫瘤直徑大、有淋巴結轉移、有遠處轉移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率顯著高于腫瘤直徑小、無淋巴結轉移、無遠處轉移和TNM分期早的患者。

表2 不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化差異(n)

續表2 不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化差異(n)

2.3 DKK-3基因甲基化與3年生存率的關系 對觀察組胃癌患者隨訪3年，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

DKK-3基因屬于Dickkopf家族成員，作為經典的Wnt信號傳導通路拮抗因子，具有抑制細胞增殖的作用，在越來越多的腫瘤中發現其表觀遺傳學表達沉默與病情及預后密切相關[4]。甲基化是表觀遺傳學最常見的轉錄前調控機制，甲基化CG自身或結合甲基結合蛋白后可阻遏轉錄因子結合至基因啟動子，從而抑制基因表達，是繼基因突變、單核苷酸多態性后的研究熱點[5]。楊子榮等[6]采用組織芯片檢測胃癌中DKK-3基因表達，發現其表達水平顯著低于健康人。基于基因表達法則，推測DKK-3的表觀遺傳學表達沉默可能與胃癌的發病機制、病情及預后緊密相關。本研究中觀察組研究對象腫瘤組織中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率為52.5%，癌旁正常組織中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率為1.3%，對照組研究對象未檢測到DKK-3基因甲基化，甲基化率為0.0%，觀察組研究對象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和對照組研究對象正常組織，差異有統計學意義(P<0.05)；DKK-3基因甲基化率癌旁正常組織和對照組研究對象正常組織中差異無統計學意義(P>0.05)。這些證據證實DKK-3在胃癌中存在高甲基化表達沉默狀態，推測其可能在胃癌的病情及預后評估中具有重要臨床價值。

傳統的用于評估胃癌病情及預后的常見指標有腫瘤分化程度和TNM分期，其中分化程度低表示腫瘤惡性程度高，TNM分期越晚預示預后越差，可客觀準確地反映腫瘤的病情及預后[7]。本研究中，觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移、遠處轉移和TNM分期中差異有統計學意義(P<0.05)，腫瘤直徑大、有淋巴結轉移、有遠處轉移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率顯著高于腫瘤直徑小、無淋巴結轉移、無遠處轉移和TNM分期早的患者。這些證據表明DKK-3基因甲基化與胃癌患者的病情密切相關，為臨床胃癌病情評估提供客觀科學的證據。進一步研究發現，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統計學意義(P<0.05)，表明DKK-3基因甲基化的胃癌患者預后差于未甲基化患者。

目前基因與胃癌病情及預后均為對手術切除的病理標本檢測，其最大不足為無法在術前提供客觀證據，因此能在術前評估病情及預后的分子標志物具有重要意義[8]。胃鏡活檢組織與傳統病理標本相比，能在術前提供分子水平的證據，加上其標本取得手段簡單方便，因此具有更廣泛的臨床價值。

[1]Chen R,Zhuge X,Huang Z,et al.Analysis of SEMA3B methylation and expression patterns in gastric cancer tissue and cell lines[J].Oncol Rep,2014,31(3):1211-1218.

[2]Liu J,Zhu X,Xu X,et al.DNA promoter and histone H3 methylation downregulate NGX6 in gastric cancer cells[J].Med Oncol,2014,31(1):817-821.

[3]陶累累.Wnt信號通路拮抗因子DKK-3在腫瘤中的研究進展[J].臨床腫瘤學雜志，2012，17(8)：752-755.

[4]李振華，高小林，于秀月，等.多基因甲基化檢測在尿路上皮癌中作用的研究[J].中國醫科大學學報，2013，42(7)：648-652.

[5]陸海一，林蘭，劉繼斌.拮抗Wnt信號通路的CpG島甲基化表型在肝癌預后中的臨床價值[J].現代檢驗醫學雜志，2013，28(6)：22-25.

[6]楊子榮，董衛國，樊利芳，等.組織芯片檢測Dickkopf-3在胃癌中的表達及臨床意義[J].中華消化雜志，2009，29(8)：571-573.

[7]王來奎，曾和平，李楨.老年及中青年患者胃癌臨床表現及預后對比觀察[J].山東醫藥，2013，53(18)：43-45.

[8]葉瓊，涂煥平，蔣義，等.Endoglin和脾酪氨酸激酶在胃癌組織中的表達及意義[J].中華實驗外科雜志，2013，30(2)：227-228.

Value of DKK-3 gene methylation for evaluating disease condition and prognosis in gastric cancer

KONGFan-jing

(DepartmentofGastroenterology,JingzhouMunicipalSecondPeople′sHospital,Jingzhou,Hubei434000,China)

Objective To study the value of Dickkopf-related protein-3(DKK-3) gene methylation by gastroscopy biopsy for evaluating the disease condition and prognosis in gastric cancer.Methods The methylation specific PCR was used to detect the DKK-3 gene methylation by gastroscopy biopsy in gastric cancer tissue,paracancerous normal tissue and healthy controls.The DKK-3 methylation rates were compared among different clinicopathological factors.Results The DKK-3 methylation rate in the tumor tissues of the observation group was significantly higher than that in the paracancerous normal tissues of the observation group and the healthy contol group,the differences were statistically significant(P<0.05).The DKK-3 methylation rates had no statistical differrences in the gender,age,lesion position,gross morphology,Hp infection and pathological type in the cancerous tissue of the observation group,but the differences in the differentiation degree,caner diameter,lymph node metastasis,distant metastasis and TNM staging were statisticlly significant(P<0.05).The 3-year survival rate was 23.8% in the gastric cancer patients with DKK-3 methylation and 52.6% in the patients without DKK-3 methylation,which indicated that the 3-year survival rate in the patients with DKK-3 methylation was significantly lower than that without DKK-3 methylation,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The higher the DKK-3 methylation rate by gastroscopy biopsy,the poor the prognosis,so DKK-3 methylation may serve as the marker for evaluating the disease condition and prognosis.

gastric cancer; gastroscopy; DKK-3; disease condition; prognosis

孔繁靜，女，本科，主治醫師，主要從事消化內科疾病的診治。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.029

A

1672-9455(2015)09-1253-03

2014-11-05

2015-01-15)