咽拭子和外周血EB病毒核酸檢測結果分析

陳曉宇，陳越，鄧蕾

(九江市第一人民醫院檢驗科，江西九江332000)

咽拭子和外周血EB病毒核酸檢測結果分析

陳曉宇，陳越，鄧蕾

(九江市第一人民醫院檢驗科，江西九江332000)

摘要:目的用熒光定量PCR法分別檢測咽拭子和外周血標本EB病毒核酸，將結果進行統計對比，探討其結果是否一致。方法采用實時熒光PCR法同時檢測疑似感染患者和正常人的外周血和咽拭子EB病毒DNA拷貝數，將結果進行對比。結果疑似感染患者咽拭子EB病毒陽性率49.4%遠高于正常人咽拭子13.3%陽性率，差異有統計學意義(P<0.05)；疑似感染患者外周血EB病毒陽性率19.1%高于正常人外周血陽性率7.2%，差異有統計學意義(P<0.05)；同一個患者同時取咽拭子檢測EB病毒陽性率51.6%高于外周血陽性率18.3%，差異有統計學意義(P<0.05)，且同一患者的咽拭子檢測病毒載量(1.0× 102～3.17×107)也高于外周血檢測病毒載量(4.5×102～2.84×105)，差異有統計學意義(P<0.05)。結論用熒光定量PCR法檢測咽拭子標本陽性率較外周血陽性率更高，更能及時準確的監測EB病毒在體內的實際復制情況，且標本采集方便，值得在臨床推廣應用。

關鍵詞：熒光定量；EB病毒；咽拭子；外周血

EB病毒1964年在非洲首次被發現，屬于人類皰疹病毒科。幼兒感染EB病毒后常引起傳染性單核細胞增多癥(IM)[1]，病毒感染與淋巴瘤、鼻咽癌等多種疾病的發生、發展有較密切的關系，人類是其唯一宿主[2]。病毒的傳播途徑主要是唾液，也可經輸血傳染[3]。EB病毒臨床檢測方法主要有血清學測IgM抗體檢測、熒光定量PCR檢測等。但多認為血清學檢測陽性率較低，且也難以客觀反映EB病毒感染真實情況，故目前臨床多采用PCR方法檢測EB病毒拷貝數，作為鑒別EB病毒感染有關疾病的重要手段。國內外對咽拭子及外周血等標本采用PCR法檢測EB病毒核酸的研究報道較多，但對于咽拭子與外周血檢測EB病毒陽性率對比的研究少有報道。作者應用熒光定量PCR法，同時檢測外周血和咽拭子EB病毒核酸,將結果進行統計比較，現報告如下。

1　材料與方法

1.1儀器和試劑實時熒光PCR擴增儀(達安7600)；人類淋巴細胞分離液和EB病毒PCR熒光檢測試劑。

1.2標本來源收集2012年－2014年來我院就診的疑似EB病毒感染患者咽拭子及外周血標本共400例。另收集同期來我院做健康體檢的正常人群咽拭子及外周血標本標本共250例。

1.2.1抽取受檢者空腹外周靜脈血2ml,注入含EDTA的采血管，立即輕輕顛倒混勻，使抗凝劑與靜脈全血充分混合，立即送檢。

1.2.2以無菌棉拭子,采集兩側腭弓、咽部或扁桃體粘膜上的分泌物，放入滅菌試管中，加蓋送檢。

1.3檢測方法

1.3.1按試劑說明分別提取鼻咽拭子標本和外周全血標本的DNA模板。

1.3.2PCR擴增程序PCR反應管中加入5μl DNA模板提取液，用已知EBV-DNA含量的標準陽性對照品制備標準曲線，置于自動熒光PCR儀檢測，結果低于500copies/ml判定為陰性。

1.4統計學方法采用SPSS18.0統計軟件進行統計分析，率的比較采用χ2檢驗；P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1疑似感染患者咽拭子EB病毒陽性率49.4%遠高于正常人咽拭子陽性率13.3%，結果有顯著性差異(P<0.05)(見表1)。

表1　疑似感染者與正常人咽拭子EB病毒檢測結果比較

2.2疑似感染患者外周血EB病毒陽性率19.1%，遠高于正常人外周血陽性率7.2%，結果有顯著性差異(P<0.05)(見表2)。

表2　疑似感染者與正常人外周血EB病毒檢測結果比較

2.3同一個患者同時取咽拭子檢測EB病毒陽性率51.6%遠高于外周血陽性率18.3%，結果有顯著性差異(P<0.05)；咽拭子檢測病毒載量(1.0×102～3.17×107)也遠高于外周血檢測病毒載量為(4.5× 102～2.84×105)，結果有顯著性差異(P<0.05)(見表3)。

表3　同一患者的外周血與咽拭子EB病毒檢測結果比較

3　討論

EB病毒感染引發的相關疾病典型表現為發熱、咽痛、肝脾和淋巴結腫大等[4]，癥狀多樣化，不典型，早期易造成誤診、漏診，延誤病情，甚至危及患者生命。實時熒光PCR法檢測EB病毒核酸具有快速簡便、準確靈敏，特異性強、減少污染等優點[5]；也能準確、及時的監測到病毒復制感染情況，為臨床診斷治療，判斷病情和預后評價提供依據；故成為檢測EB病毒的首選方法。

機體咽部上皮細胞有EB病毒受體,EBV感染后，病毒先在口咽部上皮細胞內增殖，后感染B淋巴細胞，病毒長期潛伏在淋巴組織中，受感染者成為終生帶毒者。當機體免疫功能低下,潛伏在細胞中的EB病毒被激活并增殖致病，EB病毒DNA核酸拷貝數大量升高，感染細胞大量進入血循環而造成全身性EB病毒感染。

本次研究，筆者對正常人采集咽拭子和外周血進行EB病毒DNA檢測，將正常人與疑似感染患者檢測結果進行了比較，證實疑似病例EB病毒DNA陽性率明顯高于正常人EB病毒的陽性率，結果有顯著性差異(P<0.05)。EB病毒可長期潛伏在正常人體鼻咽部和淋巴細胞內，部分人檢測EB病毒可能呈陽性，但大部分人核酸拷貝數太低，檢測不出來。國內學者開展了正常人EB病毒相關研究，秦娟等研究顯示，796例正常人外周血細胞檢測EB病毒DNA的陽性率為7.4%[6]；康喜訊等人研究顯示一般正常人群外周血EB病毒DNA的檢出率較低[7]，與筆者研究結果相符。

本研究對疑似感染患者分別采集外周血和咽拭子的EB病毒進行檢測，其中同一患者同時采集咽拭子標本的EB病毒陽性率51.6%遠高于外周血的陽性率18.3%，且咽拭子檢測病毒載量也遠高于外周血檢測病毒載量，結果都有顯著性差異(P< 0.05)。說明檢測咽拭子中EB病毒DNA比檢測外周血中EB病毒DNA具有更高的敏感性和更強的特異性。劉金祿[8]等采用熒光定量PCR方法檢測咽拭子EB病毒陽性率36%，湯春波[9]采用熒光定量PCR檢測咽拭子陽性率為43%，于謹銘[10]等采用熒光定量PCR方法檢測外周血EB病毒陽性率20.5%與我們研究結果相符。

臨床上，國內多為鼻咽癌患者才采用咽拭子檢測，其他疑似患者多采用外周血檢測，至檢測陽性率不高，假陰性容易誘導誤診、漏診，延誤病情；抽取外周血提取白細胞操作繁瑣，干擾因素也多，會對PCR反應造成影響；且部分EB病毒感染者是幼兒，相對于抽血，咽拭子標本采集方便，更易于被患兒及家長接受，陽性檢出率也更高。為臨床盡早提供準確診療依據，確診病情制定治療方案，縮短了住院時間，降低了醫療費用；故筆者建議臨床推廣應用。用咽拭子標本檢測EB病毒陽性率較外周血標本高，原因與機制筆者目前難以探明，筆者分析可能是EB病毒首先感染咽部，咽部上皮細胞的EB病毒復制增殖要早于血中，或許可能與該法收集鼻咽分泌物帶有較多脫落白細胞，總之原因與機制有待進一步探討。

參考文獻

[1]陳琴琴.血清EBV-IgM抗體對兒童傳染性單核細胞增多癥臨床診斷的意義[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(5):564-582.

[2]P.R默里等著.徐建國等譯.臨床微生物學[M].北京：科學出版社，2005:1289-1290.

[3]李金明.實時熒光PCR技術[J].北京:人民軍醫出版社,2007:291-298．

[4]王四利,鐘天英.傳染性單核細胞增多癥外周血淋巴細胞形態學觀察[J].實驗與檢驗醫學,2010,2827(5):521.

[5]姚曄,萬瓊.應用FQ-PCR和ELISA方法檢測人巨細胞病毒感染的臨床價值[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(2):173-174.

[6]秦娟,何雅軍.外周血血漿和白細胞EBVDNA檢測的比較[J].臨床醫學工程,2011,8(8):1174-1176.

[7]康喜訊,萬世恒.鼻咽組織和外周血EB病毒DNA檢測用于早期診斷鼻咽癌[J].臨床醫學工程,2012,19(10):1697-1698.

[8]劉金祿,何曉峰.FQ-PCR技術檢測肺炎患兒咽拭子EB病毒結果分析[J].河北北方學院學報,2010,27(5):43-44.

[9]湯春波.小兒咽拭子EB病毒DNA-PCR臨床應用[J].醫學信息, 2010,24(11):122.

[10]于謹銘,羅兵.EBV-DNA檢測在兒童EB病毒感染中的臨床意義[J].醫學檢驗與臨床,2012,23(5):1673-1675.

·檢驗與臨床·

(收稿日期2014-10-13；修回日期2014-11-20)

DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2015.01.025

中圖分類號：R446.62,R373.1+1,R446.19

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2015)01-0070-03