蕎麥花葉黃酮對家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響及機制

吳立國，韓淑英，石雪靜，張英，石亞靜，錢莊(開灤醫療集團錢家營醫院，河北開灤063000；河北聯合大學)

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·基礎研究·

蕎麥花葉黃酮對家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響及機制

吳立國1，韓淑英2，石雪靜2，張英2，石亞靜2，錢莊2(1開灤醫療集團錢家營醫院，河北開灤063000；2河北聯合大學)

摘要：目的觀察蕎麥花葉黃酮(FBFL)對家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響，并探討其機制。方法取禁食24 h的大耳白兔10只，猛擊后枕部致死，立即剖開腹腔，制備離體回腸腸管。腸管上端接肌張力換能器，下端固定于金屬鉤上，調整腸管初負荷為2 g，平衡30 min。待腸管收縮穩定后開始加入FBFL，FBFL溶液濃度為0、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL，每個濃度的體積為20 μL，觀察給藥前后回腸平滑肌平均收縮力和收縮頻率。采用M受體阻斷劑(阿托品)孵育肌條，觀察不同濃度(2、4、8、16、32、64 mg/mL)FBFL聯合10 mg/mL阿托品對離體回腸平滑肌舒縮功能的影響。結果0、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL的FBFL作用后回腸平滑肌收縮力分別為(2.77±0.30)、(2.90±0.08)、(2.97±0.10)、(3.11±0.20)、(3.26±0.11)、(3.33±0.15)、(3.57±0.12)、(3.56±0.14)、(3.57±0.18)g，收縮頻率分別為(7.41±0.40)、(8.17±0.52)、(8.74±0.52)、(9.37±0.41)、(10.25±0.11)、(10.69±0.23)、(10.43±0.28)、(10.48±0.23)、(10.25±0.46)次/min，FBFL在0.5、1、2、4、8、16 mg/mL范圍內對離體回腸平滑肌的收縮作用有一定量效關系(P均<0.01)；FBFL能拮抗阿托品對家兔離體腸管平滑肌收縮的抑制作用，在4、8、16 32、64 mg/mL范圍內有一定的量效關系(P均<0.01)。結論FBFL能增強家兔離體回腸平滑肌的收縮功能，其機制可能與激動M受體相關。

關鍵詞：蕎麥花葉黃酮；家兔；離體回腸平滑肌；阿托品

蕎麥(俗稱甜蕎)為蓼科植物，含較高的黃酮類化合物。目前對苦蕎麥、金蕎麥的研究較多，而蕎麥主要用作食品，對其研究較少。蕎麥中主要作為糧食應用的成分是蕎麥種子，結果造成大量的花葉被廢棄。蕎麥花葉黃酮(FBFL)為其花葉中提取的黃酮類成分。近年研究[1～3]表明,FBFL具有降血糖、降血脂、抗氧化等多種生物學作用,但其對腸道平滑肌活動的影響未見報道。本實驗旨在觀察FBFL對家兔離體回腸平滑肌收縮功能的影響，并探討其作用機制。

1材料與方法

1.1材料①藥品與試劑：蕎麥花葉采自內蒙古庫倫旗，經河北聯合大學中醫學院中藥學鑒定確認。硫酸阿托品 (atropin)注射液(貴州光正制藥有限責任公司，批號100806)。酸性殼聚糖。臺氏生理鹽溶液(NaCl 6.9 g，KCl 0.35 g，MgSO40.295 g，KH2PO40.16 g，NaHCO32.1 g，CaCl20.275 g)。②儀器：HW-400S 恒溫平滑肌槽，BL-420+生物機能實驗系統，購自成都泰盟科技有限公司。③實驗動物：健康大耳白兔，體質量2.0～2.5 kg，雌性，無孕，購自北京沙河通利試驗動物養殖有限責任公司，合格證號：SCXK(京)2010-0004。

1.2方法

1.2.1蕎麥花葉黃酮的制備自然干燥的蕎麥花葉，粉碎，用去離子90 ℃加熱提取2次，合并濾液，濃縮，加酸性殼聚糖攪拌，趁熱過濾，濾液靜置沉淀，過濾得黃色沉淀物，為總黃酮(采用紫外分光光度法，以蘆丁為標準，測得黃色沉淀物中總黃酮含量達95%)[4]。

1.2.2家兔離體回腸腸管的制備參考文獻[5]方法，將10只大耳白兔禁食24 h，猛擊后枕部致死，立即剖開腹腔，分離回腸，去除腸系膜，分離出長約25 cm的腸管，立刻置于37 ℃充入95%O2和5%CO2的混合氣體的臺氏液中，將腸管分成長2～2.5 cm 數段，用臺氏液將腸內容物輕輕沖洗干凈后備用。

1.2.3FBFL對離體回腸平滑肌收縮頻率及張力的影響觀察打開BL-420+生物機能實驗系統，調零，定標，在一通道輸入接口處安裝張力換能器。參照文獻[6]方法，取上述制備好的腸管，懸掛于置有臺氏液的麥氏浴槽內(液體容積 20 mL)，上端接肌張力換能器，下端固定于金屬鉤上，通入混合氣氣泡每秒1～2個為宜，調整標本初負荷為2 g，平衡30 min。待腸管收縮穩定后開始給予FBFL，所用FBFL均以最終浴槽內濃度計算。先描記一段正常腸平滑肌自律波形，再開始加入FBFL。分別加入FBFL溶液(用臺式液配制)0(臺式液)、0.5、1、2、4、8、16、32、64 mg/mL，每個濃度的體積為20 μL，每次給藥后觀察5 min，分別記錄給藥前后5 min腸管的運動波形。之后用新鮮臺氏液沖洗3次，待腸管舒縮穩定恢復正常后，再加入下一濃度藥物。實驗重復8次(8個腸管)，觀察給藥前后腸平滑肌平均收縮力和收縮頻率。以給藥前后腸平滑肌收縮的平均張力和頻率計算促進率。張力(頻率)促進率(%)=[給藥后平均張力(幅度)或頻率-給藥前平均張力(幅度)或頻率]/給藥前平均張力(幅度)或頻率×100%[6,7]。

1.2.4FBFL聯合阿托品對離體回腸平滑肌舒縮功能的影響觀察離體腸管制備同上，待腸管舒縮穩定后，分別向平滑肌槽中加入終濃度均為10 mg/mL阿托品，30 s后加入FBFL，FBFL濃度為2、4、8、16、32、64 mg/mL。其余操作參照1.2.3。

2結果

2.1FBFL對離體回腸平滑肌收縮頻率及張力的影響不同劑量FBFL作用離體回腸平滑肌后收縮頻率及張力比較見表1。由表1可見，2～64 mg/mL的FBFL均能提高家兔離體回腸腸管腸平滑肌收縮的平均張力，且4～64 mg/mL 的FBFL表現的作用更為顯著(P<0.01)；0.5～64 mg/mL的FBFL均能顯著提高家兔離體腸管回腸平滑肌的收縮頻率(P<0.01),且二者均呈劑量依賴性。

表1　不同劑量FBFL作用離體回腸平滑肌后

注：與0 mg/mL相比，*P<0.05，**P<0.01。

2.2FBFL聯合阿托品對離體回腸平滑肌舒縮功能的影響不同劑量FBFL聯合阿托品作用離體回腸平滑肌后收縮張力及頻率比較表2。由表2可見，阿托品能明顯抑制家兔離體回腸腸管腸平滑肌的平均收縮力和收縮頻率(P<0.01)；4～64 mg/mL的FBFL能拮抗阿托品對家兔離體腸管腸平滑肌收縮力的抑制作用，呈劑量依賴性，其中8～64 mg/mL的FBFL作用更明顯(P<0.01)；2～64 mg/mL的FBFL能使受阿托品抑制的家兔離體腸管腸平滑肌的收縮頻率增加，呈劑量依賴性，其中4～64 mg/mL的FBFL作用更顯著(P<0.01)。

±s)

注：與未給藥物前相比，**P<0.01；與10 mg/mL阿托品相比，△P<0.05，△△P<0.01。 3討論

目前，蕎麥作為食品已占有一席之地，但作為藥品使用尚未引起足夠重視。在臨床應用中，最理想的藥物是高效低毒的藥品，食品作為日常生活中的必需品，較為安全，而具有藥用價值的食品是相對更為安全的藥品，藥物或多或少具有一定的不良反應，中藥相對于西藥來說，不良反應較小。在疾病治療中，選用藥食同源且具有高效低毒作用的植物作為藥品，是最佳的選擇。

蕎麥作為食藥兩用植物，目前還沒有實現高效利用。蕎麥分為甜蕎麥和苦蕎麥，甜蕎麥種子主要作為糧食應用，而大量的花葉被廢棄。研究[8,9]發現，蕎麥花葉中含有豐富黃酮類成分，并具有抗氧化、降糖、降脂、免疫調節等作用，但其對腸道平滑肌活動的影響尚未見報道。本研究觀察了FBFL對家兔離體回腸腸管平滑肌收縮功能的影響，結果發現，FBFL的作用性質是興奮腸管平滑肌，不同劑量的FBFL能提高家兔離體腸管腸平滑肌的收縮張力及收縮頻率，且濃度越高作用越顯著；FBFL能拮抗阿托品對家兔離體腸平滑肌收縮張力和收縮頻率的抑制作用，并呈劑量依賴性。阿托品為M膽堿受體拮抗劑，而FBFL能有效拮抗阿托品對家兔離體腸管的抑制作用，證明 FBFL對腸道平滑肌收縮的促進作用可能與激動M膽堿受體相關。但FBFL的作用機制是否與影響腸平滑肌的其他因素有關，需進一步研究；黃酮類成分很多，具體是哪一成分發揮作用，有待探索。

綜上所述，FBFL能增強家兔離體回腸平滑肌的收縮功能，其機制可能與激動M膽堿受體有關。

參考文獻：

[1] 白靜,姜妍,韓婷,等.蕎麥花葉黃酮對2型糖尿病C57小鼠糖脂代謝及胰島素抵抗的影響[J].廣東醫學,2012,33(13):1876.

[2] 韓淑英,王志路,儲金秀,等.蕎麥花葉黃酮對 2型糖尿病大鼠胰島素抵抗及肝組織PTP1B的影響[J].中國中藥雜志,2009,34(23):3114.

[3] Zhu LS, Ma XC, Han SY, et al. Effect of total flavones of buckwheat leaf on blood lipid and lipid peroxides[J]． Chin J Chlin Rehabilitation, 2004,8(25):5178.

[4] 韓淑英,張博男,張靜怡,等.蕎麥花葉黃酮對2 型糖尿病大鼠血糖穩態的影響[J].第三軍醫大學學報,2013,35(23):2597-2599.

[5] 袁明勇,馬松濤,劉冬戀,等.桂枝油對兔離體腸平滑肌的運動作用機制[J].中國醫院藥學雜志,2011,31(17):1482-1483.

[6] 劉紅艷,郭建生,王小娟,等.檀香不同部位提取物對豚鼠離體腸平滑肌功能的影響[J].西安交通大學學報(醫學版),2012,33(2):241-244.

[7] 李晶晶,牛彥兵,石寧,等.延胡索炮制前后在金鈴子散中對大鼠腸管平滑肌的影響[J].天津中醫藥大學學報,2014,33(2):94-97.

[8] 王樹華,韓淑英,耿菲,等.正交試驗法優選甜蕎麥花葉中蘆丁的提取工藝[J].遼寧中醫雜志,2011,38(6):1178-1179.

[9] 馬俊利,李春鋼,張博男,等.甜蕎麥花葉化學成分研究[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(13):94-96.

(收稿日期：2014-09-12)

通信作者：韓淑英

基金項目：唐山市“十二五”重點科技支撐項目(10130203-3)。

中圖分類號：S517;R337.5

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2015)03-0024-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.03.008