轉化生長因子β1與乳腺癌微血管密度及預后的相關性

沈葉　徐梅玉　盛友華

(上海市奉賢區中心醫院普外科，*病理科，上海　201400)

?

·論著·

轉化生長因子β1與乳腺癌微血管密度及預后的相關性

沈葉徐梅玉盛友華*

(上海市奉賢區中心醫院普外科，*病理科，上海201400)

摘要目的：探討乳腺癌組織中轉化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)與微血管密度(microvessel density，MVD)及乳腺癌預后的相關性。方法： 采用免疫組織化學方法檢測62例乳腺癌組織及30例乳腺腺瘤組織中TGF-β1的表達水平，計數MVD，分析二者與乳腺癌病理特征的關系。結合隨訪資料分析TGF-β1與乳腺癌的復發轉移及患者生存率的相關性。結果：乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數均明顯高于乳腺腺瘤組織(P<0.05)；乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高(P<0.05)，且MVD計數與臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)。TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數呈正相關(r=0.705，P<0.05)。術后5年，TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者(P<0.05)。結論：TGF-β1在乳腺癌組織中呈過表達狀態且與MVD計數呈正相關，在乳腺癌發生、發展過程中發揮重要作用，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的生物靶點。

關鍵詞乳腺癌；轉化生長因子β1；微血管密度；預后

乳腺癌發病率占女性惡性腫瘤的首位，外科手術治療乳腺癌仍是目前最有效的治療手段。研究[1]顯示，即使是T0~T1、N1~N2等早期乳腺癌患者，其術后5年的復發轉移率仍達60%，而腫瘤的侵襲性與轉移性是導致患者死亡的主要原因。乳腺癌的生長、轉移與腫瘤血管生成密切相關，抑制血管生成已成為乳腺癌治療的一個新靶點[2]。目前已發現多種血管生成因子，其中轉化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)因其在體內外對血管增殖的作用不一致，一直是臨床研究的熱點[3-4]。腫瘤微血管密度(microvessel density，MVD)是特定腫瘤區域的微血管計數，是腫瘤侵襲轉移潛能的預測指標，但目前針對乳腺癌組織中TGF-β1與MVD間的關系的研究仍較少。本研究擬通過檢測乳腺癌組織中TGF-β1的表達，探討其與MVD及預后的相關性，為乳腺癌的基因靶向治療提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2010年12月—2014年1月在上海市奉賢區中心醫院手術并經組織病理學確診的女性乳腺癌患者62例。入組標準：(1)均保留手術切除的乳腺癌組織標本，并經手術及組織病理學確診；(2)均為首次確診，可耐受手術，且術前未接受任何放化療治療；(3)排除合并其他部位腫瘤或嚴重臟器功能不全者。本研究經本院倫理學委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。62例患者的年齡40～75歲，平均(53.6±5.8)歲；組織學分型：浸潤性導管癌38例，導管內癌19例，浸潤性小葉癌5例；根據美國癌癥聯合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分期標準：Ⅰ期23例，Ⅱ期14例，Ⅲ期21例，Ⅳ期4例。同時選擇同期收治的30例乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為對照組。

1.2方法將乳腺組織標本制作成連續4 μm的組織切片，采用免疫組織化學三步法進行免疫組織化學染色。TGF-β1兔抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術公司，CD34鼠抗人單克隆抗體購自上海森雄科技實業有限公司，采用已知陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3判定標準

1.3.1TGF-β1免疫組織化學結果的判定標準隨機選擇5個高倍鏡視野，每個視野計數200個細胞，采用半定量計分方法評價[5]。染色強度：無著色為0分；著色弱為1分；著色適中為2分；著色深為3分。陽性細胞比例：著色的陽性細胞數百分比≤5%為0分； 6%～25%為1分； 26%～50%為2分； ≥51%為3分。兩項積分乘積≥3分為陽性。

1.3.2MVD的判定標準參照Weidner[6]的方法，在低倍鏡(×100)下選擇5個腫瘤病灶中染色清晰、微血管最為密集的區域，再切換到高倍鏡(×400)，計算5個區域的MVD平均值。

2結果

2.1乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中TGF-β1蛋白的表達及MVD計數比較乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數均明顯高于乳腺腺瘤組織，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中TGF-β1蛋白表達及MVD計數比較

注：與乳腺腺瘤組織比較，*P<0.05

2.2TGF-β1蛋白表達、MVD計數與乳腺癌臨床病理特征的關系乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高，差異均有統計學意義(P<0.05)。Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌患者MVD顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者，伴有淋巴結轉移的乳腺癌患者MVD高于不伴有淋巴結轉移的乳腺癌患者，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數的相關性 經Spearman秩相關分析，TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數呈顯著正相關(r=0.705，P<0.05)。

2.4乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達與預后的關系 乳腺癌患者術后1、3、5年，TGF-β1蛋白陽性表達與陰性表達患者的復發轉移率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；術后1、3年，TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率與陰性表達患者比較差異無統計學意義(P>0.05)；術后5年TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表2　TGF-β1蛋白表達、MVD計數與乳腺癌臨床病理特征的關系

注：不同臨床分期、腫瘤直徑、有無淋巴結轉移比較，*P<0.05

表3乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達與預后的關系 (n,%)

預后隨訪時間TGF-β1蛋白表達-+χ2P復發轉移率1年 2(12.5)7(15.2)0.07>0.053年 4(25.0)13(28.3)0.06>0.055年 7(43.8)27(58.7)1.07>0.05生存率 1年 16(100.0)44(95.7)0.72>0.053年 15(93.8) 37(80.4)1.56>0.055年 13(81.3) 22(47.8)5.39<0.05

注：與TGF-β1蛋白陰性表達患者比較，*P<0.05

3討論

乳腺癌的生長、轉移是一個極為復雜過程，而新生血管的形成是其中不可或缺的環節之一。有研究[7]認為，腫瘤作為典型的血管依賴性病變，腫瘤血管生成對其侵襲性與不良預后具有重要預測價值，同時發現，MVD與腫瘤大小、分期、淋巴結轉移及早期死亡密切相關。TGF-β是一種細胞內源性生長抑制因子，可調節多種靶基因的表達，在細胞分化、增殖及凋亡中發揮重要作用，同時因其在腫瘤發生發展過程中的雙向調節作用而備受關注[8]。在腫瘤發生的初期，TGF-β1抑制腫瘤形成，而在腫瘤發展過程中則起促進作用[9]。目前，TGF-β1與腫瘤血管形成的關系已有共識，但其與MVD的相關性及對乳腺癌患者預后的預測性研究較少。

本研究結果顯示，乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數均明顯高于乳腺腺瘤組織(P<0.05)。進一步分析發現，乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高(P<0.05)，且MVD計數也與臨床分期及淋巴結轉移密切相關(P<0.05)。以上說明，隨著乳腺癌的進展，TGF-β1的表達水平隨之升高，且MVD也參與了新生血管的形成，二者對判斷乳腺癌的惡性程度、浸潤及轉移具有重要價值。Fils-Aimé等[10]研究認為，TGF-β1的高表達促進了癌組織的血管生成，但由于新生血管結構缺乏完整性，基底膜變薄或缺如，易進入血管而發生轉移。此外，本研究還發現，TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數呈顯著正相關(P<0.05)，TGF-β1的過表達可促進MVD的增高，二者相互協同，為乳腺癌腫瘤細胞的侵襲性生長提供了條件。

目前，臨床上對乳腺癌切除后的復發和高轉移人群尚缺乏有效的預測指標，故難以在復發前進行相應的治療。TGF-β1對乳腺癌患者預后的影響尚有爭議。Divella等[11]研究指出，TGF-β1過表達預示乳腺癌患者的不良預后，其表達陽性率越高，預后越差。殷科等[12]近期研究發現，TGF-β1與人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)陰性乳腺癌患者預后無明顯關系，認為TGF-β信號途徑主要通過TGF-β受體發揮作用。本研究中，TGF-β1蛋白陽性表達與陰性表達的乳腺癌患者的復發轉移率在術后5年內差異無統計學意義(P>0.05)，而術后5年TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者(P<0.05)，說明TGF-β1對早期預后的影響甚小，但可作為遠期不良預后的預測因子。

總之，TGF-β1在乳腺癌組織中呈過表達狀態且與MVD計數呈正相關，TGF-β1在乳腺癌發生、發展過程中可能發揮了重要作用，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的重要生物靶點。但本研究樣本量較少，TGF-β1能否準確預測乳腺癌患者術后的復發轉移及生存時間，尚需進一步研究。

參考文獻

[1]Biesaga B, Niemiec J, Ziobro M, et al. Prognostic potential of topoisomerase IIa and HER2 in a retrospective analysis of early advanced breast cancer patients treated with adjuvant anthracycline chemotherapy[J]. Breast, 2011, 20(4):338-350.

[2]Kim MS,You MK,Rhuy DY,et al.Loquat(Eriqbotrya japonica) extracts suppress the adhesion,migration and invasion of human breast cancer cell line[J].Nutr Res Pract,2009,3(4):259-264．

[3]李軍川,竺紅宇,陳延煊,等.乳腺癌TGF-β1和BRCA2表達與臨床因素相關性研究[J].中國醫師雜志,2009,11(3):344-346．

[4]Paiva CE,Serrano SV,Paiva BS,et al.Absence of TGF-βRII predicts bone and lung metastasis and is associated with poor prognosis in stage III breast tumors[J].Cancer Biomark,2012,11(5):209-217.

[5]許良中,楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準[J].中國癌癥雜志,1996,6(4):229-231.

[6]Weidner N.Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumor[J].Breast Cancer Res Treat,1996,36(2):169-180．

[7]Juárez P,Guise TA.TGF-β in cancer and bone:implications for treatment of bone metastases[J].Bone,2011.48(1):23-29．

[8]劉春富,李衛,許軍,等.乳腺癌組織中轉化生長因子-β1和血管內皮生長因子的表達及其與血管生成的關系[J].現代生物醫學進展,2014,14(26):5104-5107．

[9]吳韶娜,齊鳳杰,方亞.乳腺癌預后與腫瘤相關因子關系研究進展[J].中國公共衛生,2010,26(6):695-697.

[10]Fils-Aimé N,Dai M,Guo J,et al.MicroRNA-584 and the protein phosphatase and actin regulator1(PHACTR1),a new signaling route through which transforming growth factor-β Mediates the migration and actin dynamics of breast cancer cells[J].J Biol Chem,2013,288(17):11807-11823．

[11]Divella R,Daniele A,Savino E,et al.Circulating levels of transforming growth factor-βeta (TGF-β) and chemokine(C-X-C motif) ligand-1(CXCL1) as predictors of distant seeding of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer[J].Anticancer Res,2013,33(4):1491-1497.

[12]殷科,郭宇.轉化生長因子βⅡ受體與人表皮生長因子受體2陰性乳腺癌患者預后的關系[J].中國臨床藥理學雜志,2014,30(4):306-308.

Correlation of Transforming Growth Factor β1 with Microvessel Density and Prognosis in Breast Cancer

SHENYeXUMeiyuSHENGYouhua*DepartmentofGeneralSurgery,*DepartmentofPathology,ShanghaiFengxianDistrictCentralHospital,Shanghai201400,China

AbstractObjective：To explore the correlation of the expression of transforming growth factor β1(TGF-β1) in breast cancer tissues with the microvessel density(MVD) in breast cancer tissues, as well as the prognosis of breast cancer patients. Methods: The expression of TGF-β1 in the tissues of breast cancer(n=62) and breast fibroadenoma(n=30) were detected with immunohistochemical staining, and the MVD was counted. The correlation of the two factors with the pathological features were analyzed.The influence of TGF-β1 on recurrence, metastasis and survival rate were analyzed in combination with the follow-up data. Results: The positive expression rate of TGF-β1 protein and the count of MVD in breast cancer tissues were significantly higher than those in breast fibroadenoma tissues (P<0.05).The positive expression rate of TGF-β1 protein in breast cancer tissues increased as the increase of tumor diameter,clinical stage,lymph node metastasis(P<0.05),and the count of MVD was correlated with clinical stage and lymph node metastasis(P<0.05).The expression level of TGF-β1 protein was positively correlated with the count of MVD in breast cancer tissues (r=0.705,P<0.05).The 5-year survival rate in patients with positive expression of TGF-β1 was significantly lower than those with negative expression of TGF-β1(P<0.05). Conclusions: TGF-β1 is overexpressed in breast cancer tissues and is positively correlated with the count of MVD. TGF-β1 plays an important role during the process of occurrence and development in breast cancer, and it is a potential biological target for anti-angiogenesis therapy in breast cancer.

Key WordsBreast cancer；Transforming growth factor β1；Microvessel density；Prognosis

通訊作者汪強,E-mail：wq.516@163.com

中圖分類號R737.9

文獻標識碼A