HPLC法測定蒙藥復方述達格-4中庚酮類成分的含量Δ

信莎莎，楊 洋，孫國園，董 玉（內蒙古醫科大學藥學院，呼和浩特 010059）

蒙藥復方述達格-4的法定質量標準收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準（蒙藥分冊）》[1]。其處方由高良姜、紫硇砂、木香、石菖蒲（質量比為4∶2∶1∶1）四味藥材組成，具有鎮“巴達干赫依”、消喘止痛的功能，可用于治療膈肌痙攣、胸悶氣短、胸肋刺痛、消化不良等癥。高良姜主要含有黃酮類及庚烷類化合物。本課題組前期對該藥進行了分離與鑒定，并測定了其中黃酮類成分的含量[2-4]。在此基礎上，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對前期分離純化得到的庚烷類成分進行定量測定，以為全面控制蒙藥復方述達格-4有效成分的含量提供參考。

1 材料

1260型HPLC儀，包括梯度泵、自動進樣器、檢測器、柱溫箱、化學工作站（美國Agilent公司）；AB135-S型超聲波清洗儀（瑞士Mettler-Toledo 公司）；BS224S 型電子分析天平（北京塞多利斯儀器系統公司）。

1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮對照品（內蒙古醫科大學藥學院實驗室自制，純度：99%）；乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；甲醇、乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚、丙酮、乙酸乙酯均為分析純，水為娃哈哈純凈水。

蒙藥復方述達格-4中各味藥材均由內蒙古天立藥材有限公司提供（經內蒙古醫科大學藥學院喬俊纏教授鑒定為真品）。樣品共有4批（編號1～4）。其中，編號1：高良姜（批號：20140410），紫硇砂（批號：20140410），木香（批號：20140101），石菖蒲（批號：20140108）；編號2：高良姜（批號：20140426），紫硇砂（批號：20140410），木香（批號：20140101），石菖蒲（批號：20140108）；編號3：高良姜（批號：20140528），紫硇砂（批號：20140410），木香（批號：20140101），石菖蒲（批號：20140108）；編號4：高良姜（批號：20140707）；紫硇砂（批號：20140410）；木香（批號：20140101）；石菖蒲（批號：20140108）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Intersil ODS-3（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～25 min，45%A→55%A；25～40 min，55%A→100%A）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取經減壓干燥至恒質量的1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮對照品0.51 mg，置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取復方述達格-4樣品5.0 g，精密稱定，置于100 ml 圓底燒瓶中，精密加入10 倍體積的50%乙醇，回流提取2次，每次2 h，趁熱用棉花粗濾，合并提取液，回收溶劑至無醇味，加蒸餾水稀釋至15 ml。后經大孔樹脂柱，用2倍體積的水洗脫，棄去洗脫液，再用8倍體積的50%乙醇洗脫；收集洗脫液，回收溶劑，用70%乙醇定容于25 ml量瓶中，搖勻。精密量取上述溶液1.0 ml，置于25 ml量瓶中，用70%乙醇定容于25 ml量瓶中，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按復方述達格-4 比例，制得不含高良姜的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1 可知，供試品中1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮色譜峰能達到有效分離，且保留時間與相應對照品一致；陰性對照溶液在相同保留時間處無色譜峰，表明其余藥味對1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substances；B.test samples；C.negative control；1.1-phenyl-7-（3-methoxy-4-hydroxy）phenyl-5-ol-3-heptanone

2.4 線性關系考察

分別精密量取“2.2.1”項下對照品溶液2.0、6.0、10.0、14.0、16.0、20.0 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以進樣量（x，μg）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮回歸方程為y＝6 988.436 10x+63.950 60（r＝0.999 9）。結果表明，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮進樣量在0.102～1.02 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6 次，記錄峰面積。結果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮峰面積的RSD 為0.50%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取樣品（編號1）5.0 g，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別于放置0、2、4、6、8、10、12、24 h 時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮峰面積的RSD 為0.05%（n＝8），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取本品（編號1）6 份，各5.0 g，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮的平均含量為3.421 3%，RSD 為1.52%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已恒質量的干燥藥材粉末（編號1）6份，各2.5 g，精密稱定，分別加入一定量的1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Table 1Results of recovery tests（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取4 批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結果4 批樣品的含量分別為3.421 3%、3.128 5%、2.848 5%、3.369 5%。

3 討論

3.1 待測成分的選擇

自1885年至今已發現并確立結構的天然線性二苯基庚烷類化合物共有67 個[5]。1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮為二芳基庚烷類化合物，主要存在于姜科植物中，是一類結構比較特殊的化合物。蒙藥復方述達格-4中主要藥材高良姜為姜科植物，文獻報道其主要成分有黃酮類、二芳基庚烷類及揮發油等[6]。有報道對二芳基庚烷類及其單體進行了相關的藥理研究[7]，發現1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮具有溫胃散寒和消食止痛的作用。本課題從復方整體出發，采用現代化手段，對復方的化學成分進行研究，以確定與復方主治功能相一致的主要活性成分，并對其質量控制方法進行探討。

3.2 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器，以本研究所用的流動相為溶劑，在200～400 nm 波長范圍內對1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羥基）苯基-5-醇-3-庚酮進行掃描。結果發現，該成分在200～210 nm波長范圍內有吸收，但在200 nm波長末端吸收處信號干擾大，基線不平，故選取210 nm為檢測波長。

3.3 流動相的選擇

在流動相系統的選擇中，筆者比較了甲醇-水、甲醇-0.5%磷酸水、乙腈-水、乙腈-0.5%磷酸水等為流動相時的分離情況和出峰時間。結果發現，以乙腈-0.5%磷酸水溶液為流動相，采用梯度洗脫能使樣品峰達到良好分離，峰形對稱。

綜上所述，本方法準確、簡便，重復性好，可用于蒙藥復方述達格-4的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：蒙藥分冊[S].1998：158.

[2]楊洋，賈鑫，董玉，等.蒙藥述達格-4 的化學成分研究[J].內蒙古大學學報：自然科學版，2013，44（4）：392.

[3]賈鑫，武娜，董玉.高效液相色譜法測定蒙藥復方述達格-4有效部位中山柰素和高良姜素的含量[J].內蒙古醫學院學報，2011，33（3）：225.

[4]馬強，賈鑫，董玉.高效液相色譜法同時測定蒙藥復方述達格-4中3種黃酮類成分的含量[J].內蒙古大學學報：自然科學版，2010，41（6）：665.

[5]羅京超，馮毅凡，吉星.天然線性二苯基庚烷類化合物的研究進展[J].中草藥，2008，39（12）：1 912.

[6]郭曉玲，孟青，馮毅凡，等.GC法測定高良姜醇提物中兩個二苯基庚烷類化合物[J].中草藥，2011，42（8）：1 554.

[7]李洪福，李永輝，王勇，等.高良姜化學成分及藥理活性的研究[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（7）：236.