胃癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C的表達(dá)及其臨床意義

葛艷麗　張俊杰　王志榮　黃濱濱

·基礎(chǔ)研究·

胃癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C的表達(dá)及其臨床意義

葛艷麗張俊杰王志榮黃濱濱

【摘要】目的探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)與其受體-3(VEGFR-3)與胃癌臨床病理因素的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)20例正常胃組織和98例胃癌組織中VEGF-C表達(dá)。結(jié)果胃癌組織中VEGF-C陽性表達(dá)率為71.4%(70/98)，而癌旁組織和正常胃粘膜組織中其陽性表達(dá)率為9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。98例胃癌組織中VEGF-C表達(dá)與患者性別、腫瘤直徑大小、腫瘤部位、分化程度、是否存在血管浸潤(rùn)以及浸潤(rùn)深度無顯著相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論VEGF-C及其受體系統(tǒng)是淋巴管生成的重要調(diào)節(jié)因子，對(duì)于胃癌區(qū)域淋巴管生成、淋巴轉(zhuǎn)移途徑有非常重要的意義。

【關(guān)鍵詞】胃癌；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C；臨床意義

The Expression and Clinical Significance of Vascular Endothelial Growth Factor- C in Gastric Cancer Tissues

GEYanli，ZHANGJunjie，WANGZhirong，etal.TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiUniversity，Shanghai，200065

【Abstract】ObjectiveTo study the vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C) and its receptor(VEGFR-3) and their relationship with clinical pathological factors of gastric cancer.MethodsExpression of VEGF-C in 20 cases of normal gastric tissues and 98 cases of gastric cancer tissues were detected by immunohistochemical staining.ResultsVEGF-C positive expression rate was 71.4%(70/98) in gastric cancer tissues，and VEGF-C positive expression rates in tissues adjacent to tumors and normal gastric mucosa tissues were 9.2%(9/98) and 5.0%(1/20).The expression of VEGF-C in 98 cases of gastric cancer tissues and patient's gender，tumor diameter，size，location，degree of differentiation，presence of vascular invasion and infiltration depth had no significant correlation，but were significantly correlated with lymph node metastasis，lymphatic vessel invasion，distant metastasis，and TNM clinical stage (P<0.05).ConclusionVEGF-C and its receptor system is an important regulatory factor of lymphangiogenesis，it has very important significance in lymphangiogenesis of gastric cancer region and lymphatic metastasis.

【Key words】Gastric cancer；Vascular endothelial growth factor-C；Clinical significance

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:159～161)

1材料與方法

1.1　研究對(duì)象

收集本院2002年3月-2008年10月間，手術(shù)切除的胃癌及癌旁組織的石蠟標(biāo)本共98例，另選擇20例正常胃組織石蠟標(biāo)本作為對(duì)照組。患者術(shù)前均未實(shí)行放療或化療。均經(jīng)過病理檢查證實(shí)。98例胃癌中，男性62例，女性36例；年齡22~76歲，平均年齡(55±8)歲；腫瘤體積：直徑<5 cm者57例，≥5 cm者41例；腫瘤部位：胃底33例，胃竇、幽門65例；腫瘤分化程度：高、中分化腺癌55例，低分化腺癌43例；區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陰性者61例，陽性者37例；15例發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；淋巴管侵犯：陰性者47例，陽性者51例； 靜脈侵犯：陰性者74例，陽性者24例；超聲檢測(cè)浸潤(rùn)深度：T1~T2 33例，T3~T4 65例；根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟的新TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期59例。對(duì)98例患者進(jìn)行隨訪2~6年，平均4.6年，其中86例獲隨訪，隨訪率為87.8%。

1.2　研究方法

免疫組化染色：采用鏈霉素-生物素(SP)免疫組化技術(shù)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)兔抗人多克隆抗體和鼠抗人D-240單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)SANTA CRUZ公司。實(shí)驗(yàn)步驟按照說明書進(jìn)行操作，以實(shí)驗(yàn)胃癌陽性切片作為陽性對(duì)照，用PBS作為陰性對(duì)照，同一條件下進(jìn)行SP染色。

1.3　結(jié)果判定

首先在低倍鏡下選取陽性癌細(xì)胞最密集區(qū)域，然后在高倍視野下記數(shù)其中5個(gè)視野中的1 000個(gè)癌細(xì)胞，以陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分率表示(%)。VEGF-C染色結(jié)果以超過30%的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)染色顆粒為陽性表達(dá)。D-240染色以出現(xiàn)染色的內(nèi)皮細(xì)胞簇或條狀為陽性，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。0分為陰性，1~3分為陽性。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，并應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，Spearman分析兩者的相關(guān)性。生存率分析用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　VEGF-C在胃癌組織中的陽性表達(dá)率

在胃癌組織中VEGF-C陽性表達(dá)率為71.4%(70/98)，而癌旁組織和正常胃粘膜組織中大都為陰性和弱陽性，其陽性表達(dá)率為9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。表明VEGF-C在胃癌組織中的陽性表達(dá)率遠(yuǎn)高于正常胃粘膜組織的(P<0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2　VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系(表1)

98例胃癌組織中，VEGF-C表達(dá)與患者性別、腫瘤部位、腫瘤直徑大小、分化程度、是否存在血管浸潤(rùn)以及浸潤(rùn)深度無顯著相關(guān)，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(89.2% vs 60.7%，P=0.0005)，存在淋巴管浸潤(rùn)者其陽性率明顯高于不存在淋巴管浸潤(rùn)者(90.2% vs 51.1%，P=0.001)。同樣，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者其陽性表達(dá)率也高于對(duì)照組(90.5% vs 66.2%，P<0.022)。TNMⅢ、Ⅳ期患者其陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(86.4% vs 48.7%，P=0.042)。

2.3　VEGF-C表達(dá)與胃癌預(yù)后的關(guān)系

VEGF-C陽性表達(dá)患者術(shù)后2、4、6年生存率為58.8%、34.1%、33.7%，而同樣時(shí)間陰性表達(dá)患者術(shù)后生存率為85.6%、72.2%、69.4%，后者明顯高于前者(P<0.05)。

表1　VEGF-C表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3討論

惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的主要播散途徑之一是其擴(kuò)散到原發(fā)部位之外，侵入淋巴管，稱為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1]，是嚴(yán)重影響患者預(yù)后的因素。腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移主要依靠腫瘤部位淋巴結(jié)的生成，但是由于缺乏淋巴內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記物和其相關(guān)生物因子的研究，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制迄今為止尚不明確[2]。直到1996年隨著VEGF-C的發(fā)現(xiàn)[3]，止步不前的腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究出現(xiàn)轉(zhuǎn)機(jī)。

VEGF-C 是VEGF 家族的成員，其編碼基因位于染色體4q34，能表達(dá)含有419個(gè)氨基酸片段的蛋白，其相對(duì)分子質(zhì)M約為46 KD[4]。VEGF-C是分泌性糖蛋白結(jié)構(gòu)高度保守，對(duì)淋巴管、血管的形成和動(dòng)脈血管滲透性具有調(diào)節(jié)作用，并且參與調(diào)控體內(nèi)多種病理和生理過程[5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3) 特異表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮，作為VEGF-C的特異性受體，通過與其結(jié)合，參與受體的酪氨酸激酶信號(hào)系統(tǒng)的介導(dǎo)和啟動(dòng)調(diào)控，MAPK由胞內(nèi)激酶的反應(yīng)所介導(dǎo)，被VEGF-C激活后，加速淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂和增殖進(jìn)程，最終導(dǎo)致新生淋巴管的生長(zhǎng)[6-7]。在腫瘤患者體內(nèi)，VEGF-C可能在附近的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞原發(fā)灶之間相互旁分泌過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，腫瘤細(xì)胞分泌VEGF-C，對(duì)淋巴管內(nèi)皮產(chǎn)生強(qiáng)烈的化學(xué)吸引作用，在轉(zhuǎn)移早期就對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲淋巴管產(chǎn)生加速作用[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)，98例胃癌患者中有70例患者組織中出現(xiàn)VEGF-C表達(dá)，而在正常和癌旁組織中多表達(dá)為陰性和弱陽性。證實(shí)胃癌細(xì)胞具有分泌VEGF-C的功能，通過自分泌方式作用于VEGFR-3利于淋巴管增生；本研究中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期Ⅲ、Ⅳ期的患者癌組織中VEGF-C的表達(dá)明顯增高。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴管浸潤(rùn)的情況下，VEGF-C表達(dá)的陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴管浸潤(rùn)的情況，說明VEGF-C的表達(dá)與淋巴管侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在功能性相關(guān)關(guān)系。胃癌細(xì)胞通過分泌VEGF-C與VEGFR-3特異性結(jié)合，刺激淋巴管內(nèi)皮生長(zhǎng)并加速其新生，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)淋巴管的侵襲作用，最終提升腫瘤在淋巴中轉(zhuǎn)移的概率。Ⅲ、Ⅳ期組胃癌組織中VEGF-C的陽性表達(dá)顯著高于Ⅰ、Ⅱ期組(P<0.05)，表明隨著VEGF-C表達(dá)升高，胃癌細(xì)胞向周圍組織器官浸潤(rùn)得到了促進(jìn)和增強(qiáng)，更有利于出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移。而與一些研究報(bào)道相反[9]，我們發(fā)現(xiàn)病程中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者體內(nèi)，VEGF-C陽性表達(dá)率有明顯升高(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，闡釋VEGF-C表達(dá)升高促進(jìn)了原發(fā)病灶中腫瘤的轉(zhuǎn)移，加快出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，檢測(cè)VEGF-C在胃癌中的表達(dá)情況，進(jìn)一步闡明了胃癌發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制，由此可見，VEGF-C及其受體系統(tǒng)是淋巴管生成的重要調(diào)節(jié)因子，對(duì)于腫瘤區(qū)域淋巴管生成、淋巴途徑的轉(zhuǎn)移具有非常重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Li ZX，Kaminishi M.A comparison of gastric cancer between Japan and China〔J〕.Gastric Cancer，2009，12(1)：52-53.

[2]白曉楓，張建偉，梁建偉，等.進(jìn)展期胃癌術(shù)中腹腔內(nèi)氟尿嘧啶緩釋化療的臨床研究〔J〕.中華消化外科雜志，2009，8(5)：377-378.

[3]Kraft A，Weindel K，Ochs A，et al.Vascular endothelial gr-

owth factor in the sera and effusions of patients with malignant and nonmalignant disease〔J〕.Cancer，1999，85(1)：178-187.

[4]Pytowski B，Goldman J，Persaud K，et al.Complete and specific inhibition of adult lymphatic regeneration by a novel VEGFR-3 neutralizing antibody〔J〕.J Natl Cancer Inst，2005，97(1)：14-21.

[5]Pepper MS.Lymphangiogenesis and tumor metastasis myth or reality〔J〕.Clin Cancer Res，2001，7(3)：462-468.

[6]Kawakami M，F(xiàn)uruhata T，Kimura Y，et al.Quantification of vascular endothelial growth factor-C and its receptor-3 messenger RNA with real-time quantitative polymerase chain reaction as a predictor of lymph node metastasis in human colorectal cancer〔J〕.Surgery，2003，133(3)：300-308.

[7]Dias S，Choy M，Alitalo K，et al.Vascular endothelial grow-

th factor(VEGF)-C signaling through FLT-4(VEGFR-3) mediates leukemic cell proliferation，survival，and resistance to chemotherapy〔J〕.Blood，2002，99(6)：2179-2184.

[8]于大海，溫玉明，孫勁東，等.口腔癌 VEGF-C mRNA 表達(dá)和血管及淋巴管生成與淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究〔J〕.癌癥，2002，21(3)：319-322.

[9]王天寶，董文廣，李兆亭，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C 在胃癌中表達(dá)的意義〔J〕.中國(guó)普通外科雜志，2004，13(9)：701-702.

(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-07-23修回日期 2014-09-21)

中圖分類號(hào)：R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2015)02-0159-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.02.001

通訊作者：王志榮

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào)：NO.1200170111)
作者單位：200065 同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院消化內(nèi)科