乳腺癌組織中Maspin、Bmi-1的聯合表達及臨床病理學意義

陳淑蘋 車愛文 譚旭東 李家梁 孔繼光

乳腺癌的發生、發展是一個多因素、多基因參與的錯綜復雜的過程，在其進展過程中會出現多基因和蛋白表達的異常，其中癌基因的激活和抑癌基因的失活是細胞癌變的分子基礎。Maspin和Bmi-1是近年發現的抑癌基因和原癌基因。Maspin是一種腫瘤抑制基因，抑制多種腫瘤細胞活性，且在腫瘤細胞的運動、侵襲以及新生腫瘤性血管形成多環節中均發揮著重要的作用;Bmi-1基因是一種原癌基因，屬多梳基因家族成員，參與細胞增殖和腫瘤發生的調控，是與細胞周期和增殖相關的重要轉錄抑制子。目前多項研究報道Bmi-1在多種腫瘤中高表達，并且與腫瘤的轉移和擴散相關［1］。本實驗通過免疫組織化學SP法聯合檢測Maspin和Bmi-1的在乳腺癌組織中的表達情況及臨床生物學指標，旨在探討兩者在乳腺癌發生、發展中的作用及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院2010年1月至2014年11月外科手術切除的乳腺標本作為研究對象。通過查閱病例選取浸潤癌60例，正常乳腺組織35例，均為女性，年齡25～69歲，中位年齡48歲;患者術前均無放療、化療和內分泌治療。所有標本經10%中性甲醛固定，石蠟包埋4 μm厚切片。

1.2 免疫組織化學染色 應用免疫組化技術檢測標本中Maspin和Bmi-1的表達。鼠抗人Maspin單克隆抗體為美國Neomaker公司的產品，鼠抗人Bmi-l單克隆抗體購自美國Upstate公司，SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術公司。免疫組化染色采用S-P法，嚴格按說明書步驟進行實驗。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。Maspin以胞質和(或)胞核內出現棕黃色細顆粒為陽性細胞，Bmi-l蛋白陽性表達以細胞核內呈現棕黃色或者棕褐色顆粒為主，少量胞漿內也有棕黃色顆粒;采用半定量積分法，將染色強度分為3級:無著色1分，淺著色2分，棕黃色3分;按陽性瘤細胞的百分比分3級:≤25%為Ⅰ級記1分，26%～75%為Ⅱ級記2分，≥76%為Ⅲ級記3分。每張切片最后的得分為兩次評分的乘積(1～9分)。≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.3 統計學分析 應用SPSS 15.0統計軟件，各組間樣本率差異的比較采用χ2檢驗，兩資料之間的相關性采用Spearman等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Maspin和Bmi-1在乳腺組織中的表達 Maspin在正常乳腺組織主要表達于胞漿內，胞核與胞膜上少有表達，陽性表達率為94.29%，在乳腺癌組織中表達不強，陽性率降低為45%。Bmi-1陽性表達主要集中在胞核中，高倍鏡下呈棕黃色顆粒，在乳腺癌中陽性表達率為76.7%，高于正常乳腺組織中的陽性表達率(28.57%)，兩項指標在乳腺癌和正常乳腺組織中的表達的差異均有統計學意義(P＜0.05)。見圖1、2，表1。

2.2 Maspin和Bmi-1表達與乳腺癌臨床病理特征的關系 Maspin、Bmi-1陽性表達均與年齡和腫瘤大小無顯著差異(P＞0.05);Maspin陽性與腫瘤分化差異不大(P＞0.05)，隨分化增加Bmi-1陽性表達有明顯差異(P＜0.05)，TNM分期越高，Maspin陽性表達越低，Bmi-1陽性表達越高(P＜0.05);伴腋窩淋巴結轉移者Maspin陽性表達顯著降低，Bmi-1陽性表達顯著上升，Maspin、Bmi-1陽性表達差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

圖1 Maspin在乳腺癌中的表達(SP×400)

圖2 Bmi-1在乳腺癌中的核表達(SP×400)

表1 Maspin和Bmi-1在乳腺癌及正常乳腺組織中的表達比較例(%)

表2 Maspin和Bmi-1蛋白的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系例(%)

2.3 Maspin和Bmi-1表達的相關性分析 經Spearman等級相關分析顯示，乳腺癌組織中Maspin蛋白表達與Bmi-1表達呈負相關(r=-0.78，P＜0.05)。見表3。

表3 Maspin和Bmi-1表達水平之間的關系 例

3 討論

Maspin基因是一種抑癌基因，是1994年Zou等［2］用減數雜交技術發現的，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員，研究證實，Maspin存在于正常的口腔黏膜、乳腺、胃腸道等黏膜中，高水平表達，而在相應的惡性腫瘤中，其含量明顯下降［3］，隨著腫瘤的侵襲和轉移，表達逐漸消失。Maspin基因可作用于纖維母細胞生長因子和血管內皮生長因子，阻斷細胞的有絲分裂和管道的形成［4］，誘導內皮細胞凋亡，Maspin能直接抑制培養基中的血管內皮細胞向血管內皮生長因子和堿性纖維生長因子轉化，進而抑制有絲分裂和腫瘤血管的生成［5］;Maspin還可以增加細胞與細胞外基質的黏附，減低細胞的運動能力［6］;當Maspin表達下調或發生基因沉默時［7］，導致上述綜合作用明顯減弱。從而促進腫瘤的發生，進展。另有結果顯示用質粒或反轉錄病毒轉染乳腺腫瘤細胞使其Maspin表達上調后，腫瘤的生長和轉移被明顯抑制［8］。且Maspin陽性的腫瘤細胞其穿過基底膜的能力明顯低于Maspin陰性表達的腫瘤細胞。故Maspin在腫瘤生長、運動、轉移及腫瘤血管生成過程中發揮著重要的作用。本實驗結果顯示Maspin在正常乳腺組織中高表達，陽性率為94.29%，而在乳腺癌組織中低表達，陽性率為45%，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示Maspin的低表達可能是導致乳腺癌發生的原因之一，結果還顯示Maspin的表達與臨床分期及淋巴結轉移相關，提示Maspin的低表達與乳腺癌的進展和惡化相關，與研究結果相一致。在乳腺癌的發生、演變過程中起重要作用，并與患者的生存期密切相關，可作為預測乳腺癌預后的參考指標。

Bmi-1基因是多梳基因家族中成員之一，是一種廣泛表達的核蛋白，作為一種原癌基因，調節HOX基因的轉錄［9］，參與細胞增殖和腫瘤發生的調控。高表達Bmi-1的細胞被認為是腫瘤中存在的“癌癥干細胞”。其作用機制可能為:Bmi-1蛋白進入細胞核與染色質結合，通過抑制其下游INK4a，來抑制 cyclinDCDK4從而誘導細胞從Gl期進入S期，促進腫瘤增殖，同時增加MDM-2的活性，減少細胞的凋亡［10］。另外，還可與c-myc基因協同作于腫瘤細胞，使其逃逸凋亡［11］;激活腫瘤細胞的端粒酶促使細胞擴增［12］。Bmi-1通過不同的途徑調控腫瘤的浸潤轉移:一方面Bmi-1作為細胞癌基因一旦被激活，高表達于腫瘤細胞中，通過抑制p16 INK4a的表達，參與調控細胞的增殖分裂，延長細胞的增殖期［13］使癌細胞生命周期延長，增殖旺盛。另一方面Bmi-1也可能在蛋白水平直接與腫瘤浸潤轉移相關因子發生作用［14］。本實驗結果表明乳腺癌組織中Bmi-1的高表達與臨床分級、分期及淋巴結轉移有正相關性，提示Bmi-1在乳腺癌晚期發生浸潤轉移的過程中可能起重要作用。

Maspin在惡性病變組織中表現為低表達，Bmi-1表現為基因高表達，兩者呈負相關。Maspin的低表達可激活相關基因蛋白的級聯表達，為促進腫瘤細胞的浸潤轉移創造了條件，與Bmi-1共同作用，在乳腺癌的發生和疾病進展中發揮了重要作用。兩者的聯合檢測成為預測乳腺癌高度轉移的新分子標志物。Maspin和Bmi-1作為腫瘤基因標記物已經為惡性腫瘤的診斷和治療提供了一種新的有效途徑。

1 鄭偉，吉巧紅，李三強，等.Bmil-1、Notchl在乳腺癌中的表達及意義.河南科技大學學報(醫學版)，2014，32:7-9.

2 Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ.Maspin，a serpin with tumor-sup-pressing activity in human mammary epithelial cells.Science，1994，263:526-529.

3 劉文會，牛曉東.Maspin在惡性腫瘤浸潤轉移中的機制研究.醫學綜述，2014，20:1975-1976.

4 Sopel M，Surowiak P，Berdowska I.Nuclear maspin expression as a good prognostic factor in human epithelial ovarianearcinoma.Folia Morphol (Warsz)，2010，69:204-212.

5 Zhang M，Volpert O，Shi Yll，et al.Maspin is a¨angiogenesis inhibitor.Nat Med，2000，6:196-199.

6 Narayan M，Twining S.Focus on molecules:maspin.Exp Eye Res，2010，90:2-3.

7 張偉，王瑞月.Maspin和MMP-2在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其臨床意義.中國腫瘤外科雜志，2014，6:225-229.

8 Shi HY，Zhang W，Liang R，et al.Blocking tumor growth，invasion，and metastasis by MASPIN in a syngeneic breast cancer model.Cancer Res，2001，61:6945-6951.

9 Arias AM.EpitheIial mesenchymal interactions in cancer and development.Cell，2001，105:425-431.

10 Tateishi K，Ohta M，Kanai F，et al.Dysregulated expression of stem cell factor Bmi-1 in precancerous lesions of the gastrointestinal tract.Clin Cancer Res，2006，12:6960.

11 Park IK，Morrison SJ，Clarke MF.Bmi-1，stem cells，and senescence regulation.J Clin Invest，2004，113:175-179.

12 Song IB，Zeng MS，Liao WT，et al.Bmi-1 is a novel molecular marker of nasopharyngeal carcinoma progression and immortalizes primary human nasopharyngeal epithelial cells.Cancer Res，2006，66:6225-6232.

13 Itahana K，Zou Y，Itahana Y，et al.ControI of the repIicative Iife span of human fibrobIasts by p16 and the poIycomb protein Bmi-1.MoI Cell Biol，2003，23:389-401.

14 馮艷，宋立兵，郭寶紅，等.Bmi-1在乳腺癌組織中的表達及意義.癌癥，2007，26:154-157.