慢性乙型肝炎患者白細胞介素33水平變化研究

李　華，張素貞，賈　倩，李夢嘉，閻敏娜，賈曉暉

(1. 河北北方學院附屬第一醫院檢驗科,河北 張家口 075000； 2. 河北北方學院醫學檢驗學院,河北 張家口 075000)

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慢性乙型肝炎患者白細胞介素33水平變化研究

李華1※，張素貞1，賈倩1，李夢嘉1，閻敏娜1，賈曉暉2

(1. 河北北方學院附屬第一醫院檢驗科,河北 張家口 075000； 2. 河北北方學院醫學檢驗學院,河北 張家口 075000)

摘要：目的檢測阿德福韋酯治療前后慢性乙型肝炎患者血清中白細胞介素33(IL-33)水平變化，探討其臨床意義。方法選取2012年10月至2013年3月于河北北方學院附屬第一醫院進行診治的89例慢性乙型肝炎患者作為慢性乙型肝炎組，89例在本院體檢確定健康者作為健康對照組，應用全自動生化分析儀和熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)儀于不同時相點檢測血清中丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)水平及乙型肝炎病毒(HBV) DNA荷載量狀態，同時應用酶聯免疫吸附測定方法檢測所有研究對象血清中IL-33、干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平。結果慢性乙型肝炎組治療前IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷貝量顯著高于健康對照組[57.1(23.7～138.5) ng/L比20.5(9.3～67.5) ng/L；129.3(28.3～702.5)U/L 比17.4(9.1~23.2)U/L；97.5(31.4～327.1)U/L比16.2(5.9～27.8)U/L； 7.8 (5.6～9.8)×103log10拷貝/L比1.1(0.3～1.7)×103log10拷貝/L]，差異有統計學意義 (P<0.01)，且IL-33與ALT和AST無顯著相關性(P>0.05)，與HBV DNA拷貝量正相關(r=0.383，P<0.05)；治療后慢性乙型肝炎組IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-6水平較治療前顯著升高[12.4(10.8～16.1) ng/L比6.7(2.1～12.0) ng/L；9.0(4.4～14.1) ng/L比5.3(3.6～9.5)；7.1(5.8～13.1) ng/L 比6.6(4.3～11.4) ng/L；7.1(6.3～10.7) ng/L比6.5(5.7～8.8) ng/L，P<0.05或P<0.01]，TNF-α和IL-4水平變化差異無統計學意義，均與IL-33無相關性(P>0.05)。結論IL-33在慢性乙型肝炎患者免疫調節中具有一定作用，可能是HBV相關肝損傷中一個病理因素，檢測患者血清中IL-33 水平對于免疫狀態監控具有重要意義。

關鍵詞：慢性乙型肝炎；白細胞介素33；阿德福韋酯；肝功能

慢性乙型肝炎是機體感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)后未能及時清除，形成慢性肝臟損傷，最終導致肝纖維化、肝硬化甚至肝癌，嚴重威脅人類健康。細胞因子是機體免疫系統的重要組成部分，HBV感染后的疾病轉歸與機體免疫系統整體功能密切相關，其中細胞因子發揮重要作用[1]，但其具體機制尚未完全闡明。白細胞介素 (interleukin, IL) 33是新發現的一種細胞因子，屬IL-1家族，具有多種生理功能，與其受體suppression of tumorigenicity (ST2)結合后可調節機體炎癥反應和免疫應答[2]，關于其在HBV感染中所起作用的研究甚少。阿德福韋酯是治療HBV感染的一線藥物[3]。本研究檢測慢性乙型肝炎患者接受藥物治療前后血清中IL-33水平變化情況，探討其在疾病發病機制中的意義。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年10月至2013年3月于河北北方學院附屬第一醫院進行診治的89例慢性HBV感染者作為慢性乙型肝炎組，其中男49例、女40例，年齡17～66歲，平均(47±5)歲。診斷標準參照2010年制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[4]。所有患者入院6個月內未使用過免疫抑制劑及其他導致肝臟毒性的藥物。排除合并其他病毒感染、其他引起疾病和(或)藥物引起的肝臟損傷及合并其他系統嚴重疾病的患者。并于相同時間段內選取89例健康體檢者作為健康對照組，無病毒性肝炎及其他肝臟疾病，其中男46例、女43例，年齡22～59歲，平均(43±6)歲。慢性乙型肝炎組及健康對照者在性別、年齡方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法慢性乙型肝炎組患者使用阿德福韋酯[葛蘭素史克(天津)有限公司生產，批號：120421，10 mg/片]進行治療， 10 mg/d口服，維持12周，療程結束后在預定時間點(健康對照組為體檢當天，慢性乙型肝炎組為服藥治療前及服藥治療后第12周)抽取所有研究對象靜脈血，離心分離血清-20 ℃ 保存待行血清學檢測，離心半徑為3 cm，1000 r/min離心5 min。標本收集完成后統一應用酶聯免疫吸附測定檢測試劑盒(購于美國R&D公司)檢測血清中IL-33、干擾素γ(interferon-γ, IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

同時應用AU1700全自動化分析儀檢測治療前后丙氨酸轉氨酶 (alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸轉氨酶(aspertate aminotransferase, AST)水平；應用美國ABI7300熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)擴增儀測定治療前后HBV DNA載量。病毒荷載量降低100倍定義為藥物敏感，其他則定義為藥物不敏感。正常值 ALT≤40 U/L；AST≤40 U/L；HBV DNA≤3×103log10拷貝/L。每例參與研究的患者均簽署了知情同意書，且本研究由本院倫理委員會批準。

2結果

2.1治療前后IL-33水平變化及與肝功能指標相關性治療前慢性乙型肝炎組患者血清中的IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷貝量均顯著高于健康對照組(P<0.01)；治療后上述指標均下降，與治療前相比差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，與健康對照組相比差異無統計學意義 (P>0.05)，見表1。IL-33與ALT和AST無相關性(r值分別為0.137和0.144，P>0.05)，與HBV DNA拷貝量呈正相關(r=0.383，P<0.05)。

表1　治療前后研究對象IL-33、ALT、AST及HBV DNA拷貝數變化情況　[M(Q25~Q75)]

IL-33：白細胞介素33；ALT：丙氨酸轉氨酶；AST：天冬氨酸轉氨酶；HBV DNA：乙型肝炎病毒DNA

2.2慢性乙型肝炎組治療前后其他細胞因子變化慢性乙型肝炎組患者治療前IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10均高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；治療后IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-10水平顯著升高，與治療前和健康對照組相比差異均有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，TNF-α和IL-4水平與治療前比較差異無統計學意義(P>0.05)，高于健康對照組(P<0.05或P<0.01)，見表2。IL-33與IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10無相關性(r值分別為0.236，0.089，0.158，0.095，0.117和0.175，均P>0.05)。

表2　治療前后受試者血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10和IL-6水平比較　[M(Q25~Q75),ng/L]

(續表2)

IFN-γ：干擾素γ；TNF-α：腫瘤壞死因子α；IL：白細胞介素

2.3研究對象不良反應發生情況慢性乙型肝炎組服藥治療期間未發生與藥物有關的不良反應，耐受性良好，均積極配合并完成了本次研究內容。

3討論

IL-33是一種多作用細胞因子，通過與特異性受體結合后激活促分裂素原活化激酶和核因子κB信號轉導途徑，進而促進Th2型免疫反應和細胞因子產生[5]。慢性乙型肝炎發病機制復雜，已明確Th1型免疫反應可使病毒感染局限化，Th2型免疫反應則與感染的慢性化有關[6]。Th1/Th2型免疫反應失衡可影響病毒性肝炎慢性化和不良臨床轉歸[7]。慢性乙型肝炎患者異常表達的IL-33水平可能參與疾病的進展過程。本研究為進一步明確IL-33在HBV導致的肝臟損傷機制中的作用，檢測其對于監控患者免疫狀態的意義，選取慢性乙型肝炎患者作為研究對象，檢測患者應用阿德福韋酯治療前后血清中IL-33及其他多個指標水平變化，探討其臨床意義。

本研究結果顯示，慢性乙型肝炎組治療前血清中IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷貝量顯著高于健康對照組，可能是因為治療前機體在清除HBV時產生的免疫應答導致肝細胞損傷，壞死的肝細胞釋放IL-33、ALT和AST增加，從而導致血清中水平升高。近期有研究發現IL-33水平與系統性紅斑狼瘡患者抗核抗體等活動性指標有關[8]，但本研究結果顯示，IL-33水平與ALT和AST無相關性(P>0.05)，有待進一步確認。

阿德福韋酯是現階段抗病毒治療的一線藥物，臨床上已經明確通過誘導Th1類細胞因子分泌增強非溶細胞機制而抑制病毒復制，清除HBV感染，且不造成肝細胞損傷，從而改善患者肝功能狀態，機體耐受性良好，具有良好的治療效果[3, 9]。本研究結果顯示，慢性乙型肝炎組接受阿德福韋酯治療12周后肝功能恢復明顯，血清中IL-33水平降低，與HBV DNA拷貝量呈正相關(P<0.05)，與預期結果一致。

本研究結果還顯示，慢性乙型肝炎組血清中IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-10在治療后較治療前水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)，TNF-α和IL-4變化差異無統計學意義。提示前炎性細胞因子不僅在清除HBV感染過程中起重要作用，在肝臟恢復中也發揮重要作用[10]。IL-6是Th17細胞功能發育的重要細胞因子，且IFN-γ和IL-2是Th1型免疫反應的作用因子，慢性乙型肝炎組治療前血清中IFN-γ、IL-2和IL-6水平較低提示病毒存在持續復制抑制了Th1型免疫反應的發生。IL-10 促進T2型細胞因子模式的發展，慢性乙型肝炎組血清中IL-10水平的降低可能是多種細胞因子相互作用的結果。本研究結果顯示，IL-33與上述幾種細胞因子無相關性，有待進一步確認。

本研究初步探討了慢性乙型肝炎患者服用阿德福韋酯治療前后IL-33水平變化情況，結果表明IL-33在機體免疫調節中具有一定作用，可能是慢性乙型肝炎患者HBV相關肝損傷中一個病理因素，檢測患者血清中IL-33水平對于免疫狀態監控具有重要意義，有待進一步明確IL-33在慢性乙型肝炎患者病理進展過程中的具體作用及機制。

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Study on Changes of Interleukin-33 Levels in Patients with Chronic Hepatitis BLIHua1,ZHANGSu-zhen1,JIAQian1,LIMeng-jia1,YANMin-na1,JIAXiao-hui2.(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China； 2.CollegeofLabMedicine,HebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China)

Abstract：ObjectiveTo explore the changes of serum interleukin-33(IL-33) levels in patients with chronic hepatitis B before and after adefovir dipivoxil therapy and its clinical significance.MethodsA total of 89 patients with chronic hepatitis B admitted in the First Affiliated Hospital of Hebei North University from Oct.2012 to Mar.2013 were selected as the chronic hepatitis B group,and another 89 healthy people underwent physical examination in the hospital during the same period were selected as the healthy control group.Automatic biochemical analyzer and fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PCR) were applied to detect serum levels of alanine transaminase(ALT) and aspertate aminotransferase(AST) and the quantity of hepatitis B virus(HBV) DNA load at different phases,and enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) method was used to detected serum levels of IL-33,interferon-γ(IFN-γ),tumor necrosis factor-α(TNF-α),IL-2,IL-4,IL-6 and IL-10.ResultsIn chronic hepatetes B group,levels of IL-33,ALT,AST and HBV DNA copies before treatment were significantly higher than those of the healthy control group [57.1(23.7-138.5) ng/L vs 20.5(9.3-67.5) ng/L；129.3(28.3-702.5)U/L vs 17.4(9.1-23.2)U/L；97.5(31.4-327.1)U/L vs 16.2(5.9-27.8)U/L； 7.8 (5.6-9.8)×103log10 copies/L vs 1.1(0.3-1.7)×103log10 copies/L],the differences were statistically significant(P<0.01),while there was positive correlation between IL-33 level and HBV DNA load(r=0.383,P<0.05).Serum lveels of IFN-γ, IL-2, IL-10 and IL-6 in chronic hepatitis B group significantly increased after treatment[12.4(10.8-16.1) ng/L vs 6.7 (2.1-12.0) ng/L；9.0(4.4-14.1) ng/L vs 5.3(3.6-9.5)；7.1(5.8-13.1) ng/L vs 6.6(4.3-11.4) ng/L；7.1(6.3-10.7) ng/L vs 6.5(5.7-8.8) ng/L，P<0.05 orP<0.01],changes of TNF-α and IL-4 levels showed no statistically significant differences,and there were no correlation of IL-33 level with TNF-α and IL-4 levels.ConclusionIL-33 is involved in the immune regulation of chronic hepatitis B,and may be a pathological factor in HBV related liver injury.Detection of serum IL-33 level contributes great significance for monitoring the patients′ immune status.

Key words:Chronic hepatitis B； Interleukin-33； Adefovir dipivoxil； Liver function

收稿日期：2014-03-25修回日期：2014-10-02編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.11.062

中圖分類號：R512.62

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)11-2081-03