紫雪丹的質量控制

戴蘭

鹽城市亭湖區人民醫院，鹽城 224000

紫雪丹的質量控制

戴蘭

鹽城市亭湖區人民醫院，鹽城 224000

目的：建立紫雪丹的質量控制標準。方法：采用薄層色譜法對甘草、木香進行定性鑒別；采用氣相色譜法對龍腦進行含量測定。結果：定性鑒別陰性無干擾，分離度高；龍腦在100 μg· mL-1～800 μg·mL-1（r=0.9996）范圍內線性關系良好，加樣回收率為100.79%，RSD為2.5%（n=6）。結論：方法可用于紫雪丹的質量控制。

紫雪丹；質量標準；薄層色譜法；氣相色譜法

紫雪丹見于《太平惠民和劑局方》卷六，又稱紫雪，紫雪散，言此藥如法制成之后，其色呈紫；其性大寒，清熱解毒之方，猶如霜雪之性，從而稱之曰“紫雪丹”[1]。紫雪丹由石膏、羚羊角、寒水石、冰片、甘草、木香等10味中藥組成，具有清熱解毒、鎮痙熄風、開竅定驚的功效，臨床上主要用于治療溫熱病，如高熱煩躁、口渴唇焦、尿赤便閉及小兒熱盛驚厥等。該制劑原先質量控制中只有性狀檢驗，無定性定量指標，在質量控制方面存在局限性。本文增設了2項薄層色譜法（TLC）鑒別，并且采用氣相色譜（GC）法對方中揮發性成分龍腦進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-14B氣相色譜儀，島津FID檢測器，浙江大學N2000色譜工作站。

1.2 試藥

紫雪丹：廣西梧州制藥廠生產，批號：110912X、110925X、111011X；龍腦對照品：中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110881；水楊酸甲酯為分析純；其他試劑為分析純。

甘草、木香購于鹽城一中藥房。

2 方法與結果

2.1 甘草的TLC鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取紫雪丹3.5 g（批號：110912X、110925X、111011X），加乙醚40 mL，加熱回流1 h，濾過棄去醚液；藥渣加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，合并醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

陡河水庫壩基下砂層頂部埋藏深度為5～10m，建庫前所作的標準貫入試驗擊數為10～20擊，相應的相對密度Dr為0.6～0.75，其密實度屬中密上限或密實下限。遇到9～10度地震，仍將發生液化。對建庫時與震后修復后在壩基砂層所作的標準貫入試驗成果進行比對，壩基砂層密實度有了顯著的提高。

2.1.2 陰性供試品溶液制備 按處方配比取各味藥（缺甘草），按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

2.1.3 對照藥材溶液的制備 取甘草藥材0.2 g，同法制成甘草對照藥材溶液。

2.1.4 定性鑒別 照薄層色譜法 《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗[2]。吸取供試品溶液、甘草對照藥材溶液和陰性供試品溶液各2～3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（30∶10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，經105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與甘草對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的黃色斑點，見圖1。陰性供試品在相應位置上無黃色斑點。

圖1 甘草的薄層圖

2.2 木香的TLC鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取紫雪丹2 g（批號：110912X、110925X、111011X），加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.2 陰性供試品溶液制備 按處方配比取各味藥（缺木香），按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

2.2.4 定性鑒別 照薄層色譜法 《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB[3]）試驗。吸取供試品溶液、木香對照藥材溶液和陰性供試品溶液各4～6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環己烷-乙酸乙酯（6∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，經105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與木香對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性供試品在相應位置上無斑點。見圖2。

圖2 木香的薄層圖

2.3 龍腦含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：固定液為50%苯基甲基聚硅氧烷（DB-17）的彈性石英毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；程序升溫：90℃，保持3 min，10℃/min升溫至110℃，保持4 min；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；RANGE：0；進樣量：1 μL；分流比20∶1。

2.3.2 對照品溶液的制備 按照 《中國藥典》2010年版一部冰片項下，選擇水楊酸甲酯作為內標，結果內標峰和龍腦峰分離度在1.5以上，分離良好。

理論板數按龍腦峰計算應不低于2500。

2.3.3 供試品溶液的制備 取紫雪丹粉末0.1 g，精密稱定，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液置20 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加入內標溶液2 mL，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.3.4 陰性對照溶液的制備 按處方配比取相當于測定量5倍的藥材（缺冰片），照工藝制備成模擬制劑，按“2.3.3”項下制成陰性對照溶液。

2.3.5 系統適用性試驗 取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進樣。結果表明，陰性對照溶液對樣品中龍腦的測定無干擾。見圖3。

圖3 龍腦專屬性試驗GC色譜圖

2.3.6 線性關系考察

儲備溶液的制備：取龍腦對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。

內標溶液的制備：取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含4.5 mg的溶液。

標準曲線的制備：精密吸取儲備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL分別置10 mL量瓶中，加內標溶液2.0 mL，加甲醇至刻度，搖勻，制成濃度為50.0、100.0、200.0、400.0、600.0 μg·mL-1的對照品溶液。分別取1 μL注入氣相色譜儀，照上述色譜條件測定，記錄色譜圖，得到龍腦峰與內標峰峰面積比值分別為0.124、0.261、0.654、1.308、2.060，以龍腦量與內標量比值X為橫坐標，龍腦與內標峰面積比值Y為縱坐標進行回歸，方程為：Y=1.5815X-0.0694，r= 0.9996（n=5）。龍腦對照品在100 μg·mL-1～800 μg· mL-1范圍內線性關系良好。標準曲線見圖4。

圖4 龍腦標準曲線圖

2.3.7 精密度考察 精密吸取對照品溶液（200 μg· mL-1）1 μL，連續進樣6次，考察其精密度，龍腦和內標峰峰面積比值的RSD為0.8%。表明精密度良好。

2.3.8 穩定性考察 取供試品溶液分別于0、2、4、6、8 h進行測定，龍腦峰面積與內標峰面積比值的RSD為1.8%。表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.3.9 重復性試驗 取同一批號樣品6份 （批號：110912X），按“2.3.3”項下制備成供試品溶液，進行測定，龍腦含量的RSD為2.4%，表明方法可行，重現性好。

2.3.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品6份（批號：110912X，含量：681.2 μg·g-1），精密加入對照品適量，配成中間濃度溶液，其余操作按“供試品溶液的制備”，平行6份，計算加樣回收率。平均回收率為100.79%，RSD為2.5%。見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2．3.11 樣品測定 取不同批號制劑，制備成供試品溶液，在上述色譜條件下以外標法測定龍腦的含量，結果見表2。

表2 各批樣品龍腦含量測定結果（g·g-1）

3 討 論

紫雪丹歷史悠久，君藥石膏、寒水石為礦物藥，《中國藥典》無定性標準。羚羊角為動物藥，也沒有相關定性、定量標準。查閱文獻未見有關紫雪丹質量控制標準及定性定量方面的文獻。因此在制定該質量標準時，選擇了臣藥甘草、木香進行定性鑒別，選擇了臣藥冰片中的龍腦作為含量測定的對象。龍腦為易揮發物質，常溫下不穩定，生產過程中易損失，因此，龍腦的含量對于紫雪丹質量穩定性具有十分重要意義。采用氣相色譜法測定紫雪丹中龍腦含量重現性好、雜質對分離無干擾，可為紫雪丹的質量控制提供可行的方法。

木香薄層色譜展開條件參照 《中國藥典》2010年版一部木香[3]項下，以環己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。結果發現木香的幾個斑點比移值較小。對展開劑進行改進，以三氯甲烷-環己烷-乙酸乙酯 （6∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，Rf值達標。

龍腦的含量測定文獻中多采用超聲處理的提取方法[4-5]，考慮到龍腦的揮發性，不宜采用加熱、煎煮等劇烈的提取方法，所以本實驗采用超聲提取。分別考察了三種提取溶解：乙酸乙酯、乙醇、甲醇各10 mL，密塞，超聲處理30 min。結果表明，三者提取效率相差不大，但是由于甲醇在FID檢測器上響應最小，為避免溶劑影響，選用甲醇作為樣品提取溶劑。分別超聲處理10、20、30、40 min，結果表明10 min和20 min提取不完全，30 min和40 min提取較完全且提取效率相當，故采用超聲處理30 min的方法進行提取。

[1] 何河內.從紫雪丹談成藥的標準化 [J].中醫雜志，1994，35（5）：303-4.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典[S]：一部，北京：中國醫藥科技出版社，2010：一部附錄ⅥB.

[3] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典[S]：一部，北京：中國醫藥科技出版社，2010：57.

[4] 鄒吉利，徐 彬，吳金虎，等.燒傷愈合膏龍腦與異龍腦的含量測定[J].醫藥導報，2014，33（7）：944-6.

[5] 趙 磊，邵大志，譚洪泉，等.氣相色譜法同時測定小兒雙清顆粒中薄荷腦、龍腦 [J].中國藥師，2013，35（7）：1470-2.

Quality Standard for Zixue Dan

DAI Lan
The Lake District People's Hospital of Yancheng City Pavilion,Yancheng 224000

Objective:To establish the quality standard for Zixue dan.Methods:Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Aucklandiae Radix were identified by TLC.The content of borneol was determined by GC.Results:The qualitative identification was with high resolution and without interference from the negative substances.The linear range of borneol was 100 μg·mL-1～800 μg·mL-1(r=0.9996)and the recovery was 100.79%(RSD=2.5%,n=6).Conclusion:The method can be used in the quality control of Zixue dan.

Zixue dan;Quality standard;TLC;GC

R927.1

A

1673-7806（2015）01-042-03

戴蘭，女，主管藥師 E-mail:2689026243@qq.com

2014-10-12

2014-12-15